广州地区汉族人群Duffy基因型分型研究

广州地区汉族人群Duffy基因型分型研究 匦擅壅查QE盟鲞差塑 广州地区汉族人群Dully基因型分型研究 s?s第一军医大学南方医院血型西作组盛丁红曹琼年7 类I~TQ 棚 343.t 一1中图分类每—丽.1一?一l 究报告,进入90年代后,分子生物学技术为深入研究血型提 供了新方法.1999年3月,笔者对广州地区汉族人群进行了 IXfffy基因型分型研究,现报告如下. 1材料与方法 汉旌,来自广 1.1受检样本102名无亲缘关系随机人群, 州地区.静脉取血,ACD抗凝,用盐析法提取DNA,~4230/ A280?l70..析出DNA丝保存于一3O?以下备用. 1.2血型基因分型试剂由美国G&T公司提供(美 国马利兰州政府批准文号1998,643259)试剂混台液中含有 PCR缓冲液,dNTP特异性的Fy基因引物,内对照引物,以 及染料,PCR产物见表l. 表1Duffy基因分型PCR产物及其检测的基因 1.3Dully基因型分型方法采用PCR—SSP法.将抽提好 的DNA从冰箱中取出溶解.稀释至0l--03ggl浓度.取 2支0.2ml塑料小试管,标记并分别加入Duffv—F和Duf Fy分型试剂8,每管各加入IlDNA样品和Il已稀释 的DNATaq酶.混句并加滴石蜡油覆盖反应液.在pCR 扩增仪(德国B[ometra一?)95125min,95?30s一581230s一 73"C90s,共循环30次;72?延伸5min,降温至4V;,完成扩 增将FCR扩增产物直接点样到2%琼脂糖凝胶上,在0.5 ×TBE缓i申液条件下,以10v/cm电泳15~20m[n.电泳后 在紫外灯下拍照. 2结果 带有Fya基因的个体,与Duf/y.F分型混台液反应出现 特异性带;带有Fv基因的个体,与Dully--F分型混台液反 应出现特异性带;同时带有F/和Fy的基因的个体,与两种 混台反应液都产生7lJ特异性扩增片段;非常罕见的Fy【a— )个体.与两种反应液都不产生特异性的PCR扩增片段,而 只有429bp的内对照产物(表2). 试剂盒只针对gy',F产基因设计.故Fy2倒不境什在内 3讨论 Duffv血型在不同种族中的分布差异甚太,在^类学研 究中也是一个有用的工具=1950年发现抗一Fya,1951年发现 了抗一F,这是Dully血型系统中最常见的两个抗体;1955年 血型系统 发现Fv和另一等位基因FJ.扩展后的Dully包括抗一F,Fy【】,Fy,和Fyx等4个基因 抗一F和抗一Fyb都能引起溶血性反应,严重者可死亡 绝大多数的中国人都带有F基因,但产生抗一Fy的可能性 不容忽视,因为其抗原不台的机会约为0.117J. 采用DNA技术对Duffy基因型分型,一是检测水平达到 基因水平,试剂成率低且易于购到;二是标本不受新鲜或陈 旧样品限制,抽提DNA后可长期保存,复查.三是结果易于 判定,也便于各实验室质量控制及互相比较. 国内血清告未见Fy(a—b-)个体.上述2侧标率 PCR扩增产物结果观察,内对照正常,而未出现F和 特异带.暂判定为Fv(a—b一).由于其遗传背景不明,尚需进 一 步做DNA删序分析,故未统计在分布表中. 致谢:血型协作组其他单位成员:重庆市血植中心毛伟,台肥市 红十字舍中心血站刘忠.成都军区昆明总医院输血科胡宗煌,中国医 学科学院输血研究所陈强.大连市红十字血液中心胡荣花,青岛市红 十字会中心血站彝一鸣,西安市中心血站刘孟黎,撩州市红十字中心 血站孟庆宝. 参考文献 1赵桐茂^类血型遗传学.北京:科学出版杜;1987,113-115 2越桐茂,张工粱中国^Duffy血型分布中华血液学杂志 1982.3(】):32 f】99908.27牧稿.20004}2-29修回) 本文编辑:尚云