山羊传染性化脓性皮肤炎活毒减毒疫苗及抗体检测试剂研发

山羊传染性化脓性皮肤炎活毒减毒疫苗及抗体检测试剂研发 山羊傳染性化膿性皮膚炎活毒減毒疫苗 及抗體檢測試劑研發 製劑研究組、豬瘟研究組 黃天祥 研究員兼組長 摘要 103年度於本所GMP藥廠完成一批山羊傳染性化膿性皮膚炎次單位疫苗、三批活毒減毒疫苗以及一批羊痘P32和山羊傳染性化膿性皮膚炎F1L和B2L之雙價次單位疫苗試製,並完成試製疫苗之安全、效力和病毒迷入否定等自家品管檢定試驗。以蔗糖、乳糖及山梨糖醇做為冷凍乾燥保護劑之活毒減毒疫苗,經4?保存13個月後每劑量之病毒力價均無顯著差異。此外,於台中市太平區及霧峰區各一牧場進行試製活毒減毒疫苗田間試驗,經以F1L ELISA檢測結果,免疫9天後即可測得抗體陽轉現象,有效抗體力價可以持續180天以上。試製之羊痘和CE雙價次單位疫苗,經以每劑 20μg 和 60μg 肌肉注射免疫羊隻後,分別經以以自行研發之P32、B2L和F1L ELISA套組檢測結果均可測出相關特異性抗體並可耐過兩種強毒的攻毒。次單位疫苗佐劑比較試驗,將重組蛋白分別與ISA70適當混合乳化後免疫 Balb/c 小鼠結果,僅一次免疫後即可獲得抗體明顯揚升。懷孕約3月齡母羊,經免疫活毒減毒疫苗後未引發流死產或皮膚病變,顯示試製疫苗對羊 隻具有高度安全性。除了F1L和B2L外,將可能具有免疫原性的ORF88、ORF94和ORF104蛋白基因架構於原核現質體上,片段大小分別為783bp、591bp和273bp。經定序確認序列無誤後,將架構好的質體轉型到大腸桿菌中,以IPTG加以誘導表現,經四和六小時誘導後分別萃取出可溶性和不可溶性蛋白,經SDS-PAGE蛋白膠體電泳後再經西方墨點法並以抗組織胺之單株抗體加以辦認結果,可見ORF88、ORF94和ORF104重組蛋白。