SC 1093-2007 黄喉拟水龟

SC 1093-2007 黄喉拟水龟 ww w. bz fx w. co m ICS 65.150 ?? 52 瞌自 中华人提共和国71<产行业栋准 SC 1093-2007 黄眼 t以 71<龟 Asian yellow pond turtle 2007 -12-18 发布 2008-03-01 实施 中华人民共和国农~部发布 ww w. bz fx w. co m 白日 自 本标准的第 4 章为强制性的，其余为推荐性的。 本标准的附录 A、附录 B为资料性附录，附录 C 为性附录。 本标准出农业部草草业局提出。 本标准由全国水产标准化技术委员会淡水养殖分技术委员会归口。 sc 1093-2007 本标准起草单位:农业部水产种质监督检验测试中心(广州)，中国水产科学 研究院珠江水产研 究所妇 本标准主要起草人:朱新平、陈永乐、魏成清、刘毅辉、共11光明、陈昆慈。 1 ?非 ww w. bz fx w. co m sc 1093-2007 黄喉踉水龟 1 范围 本标准给出了黄喉i'bl!l<龟 [J\;I，α旷'emys mutica CCan1or , 1842门的主要形态构造特征、生长与繁殖、遗 传学特性及检测方法。 本标准适用于黄喉拟水龟的种质检测与鉴定。 2 规范性引用文件 F列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 或修订版均不适用于本标准.然而，鼓励根据的修改单〈不包括勘误的内容) 本标准达成的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件.其最新版本适用于本标准。 GB/ T 18654. 1 养殖鱼类种质检验第 1 部分 2检验规则 GB/T 18日54. 2 养殖鱼类种质检验第 2 部分衬1样方法 GB/ T 18654. 12 养殖鱼类种质检验第 12 部分?染色体组型 3 学名与分类 3. 1 学名 黄喉拟水龟 [Mauremys mutica (Cantor , 1842) ] 3. 2 分类位置 脊索动物门 CChordata) 、脊椎动物亚门 CSubphylum ver1ebrata) 、爬行纲 CReptilia) 、龟~吕 (Tes1u dinata) 、淡水龟科 CBataguridael 、拟水龟属 Clvlaurernyο 。 4 主要形态构造特征 4. 1 外部特征 4. 1. 1 形态性状 体呈长椭圆形，前部峪窄、后部路宽，中部稍内凶。头中等大，吻较尖突，上领;1丁央具缺刻.头背光滑 元鳞.鼓膜圆形。背甲稍微隆起，有 3 条纵棱，中央脊棱明报.而侧脊棱较弱。王道盾较小呈长方形，臀盾 在最后缘形成尖突。腹甲较大， 1略与背甲之长相等，喉屑前缘稍内凹;月工盾k??缘形成深的兰角形缺刻;甲 桥明显。四肢扁阂，前胶 5 爪，后肢 4 爪，指、趾!可具全膜。头侧白眼后至室主膜上方有?条窄的黄色纵 纹，头背及两侧橄榄色或棕色，背甲、四月支外侧及尾背为棕黄色、褐色或棕黑色。背甲各盾片闷缝为黑 色:头的)j重面、四肢内侧、腹甲、尾的E盖面及裸露皮肤部分均为榕黄色或淡黄色，腹甲各盾片上具对称的 棕黑色斑块。成龟雌ft腹甲平坦啕雄性r!l腹甲中线具纵凹陷;成年雄龟个 体大于同龄J!t住龟。 外部形态见图 10 监Iì'、雄背、腹 iIif观见图 2 ??. I ww w. bz fx w. co m sc 1093-2007 4. 1.2 可数性状 4.12 1 背甲 颈盾: 1 枚。 中在盾 :5 枚。 肋盾， 8 枚，左右各 4 枚。 缘盾 :22 枚，左右各 11 枚。 臀盾 :2 枚，左右各 1 枚c 4. 1.2.2 腹甲 喉盾 :2 枚，左右各 l 枚。 肢盾 :2 枚，左右各 1 枚。 胸盾， 2 枚，左右各 l 枚。 腹盾， 2 枚，左右各 1 枚。 股盾 2 枚，左右各 1 枚。 虹盾， 2 枚，左右各 1 枚。 4. 12.3 串桥 腋盾， 2 枚，左右各 I 枚。 2 图 1 黄喉拟71<龟外形 图 2 黄喉拟水龟营、腹面观{左击，右?} ww w. bz fx w. co m sc 1093-2007 E苦盾 :2 枚，左右各 1 枚。 注，各部位说明参见附录A. L 4. 1.3 可量性状 样本范围 z雌龟体重: 5? g~-1160g，平均 825. 9 富士 16 1. 0 g; 背 甲长1.;;0 rnm~204 mrn，平均 174.2mm士 13.0 mm; 背甲宽 102 mm~144 mm，平均 124.8 mm 土 1 1. 0 mm。 雄龟体重: 600 g~ 1980 g.平均 1 267.4 g 士 319.4 日;背甲长 161 mm~245 mrn，平均 205.3 mm 土: 20.1 mm; 背甲宽 110 mm~-175 mm，平均 144.1 mrn十 14.1 rnmo 背甲 t史与各可量性状的 比例见表 L 表 1 黄喉拟水龟背甲长及与各可量性状的比例 比例 腹甲后半部后宽/背甲长 甲桥长/背甲长 喉盾宽/背申长 O. 19 喉盾缝长/背甲长 0.11 肢盾缝长/背甲长 i 台 11 E电盾缝长/背甲伏 O. 16 腹盾缝长/背甲长 0.20 股盾缝长F 背甲长 0.17 MI!昌平缝长/背甲长 0.09 ?二一一 注=各可量性状说明参见附录A. 2. 4.2 内部构造特征 心脏具有静脉窦及二心房?心寞，心室内具不完全的分隔，属不完全双循环; 肺为海绵状，两叶 3肝 两ut;肾1)1才;消化道J~盲肠;雌雄异体，雄性塞丸 1 对，有交配器，雌 性卵巢 1 对。 5 生长与繁殖 5 1 生长 黄喉拟水龟不同年龄组实测平均背甲氏、背甲宽与体重见王是 2 ， 表 2 黄喉拟水龟不同年龄组实测背审长、宽和实泯j体重 年龄，龄 刚孵出 1'< 15.01土1. 86 _~旦旦旦~Ll巳旦旦1 5EE击刮点 2' 4千 r FHU 在+ {丰茧， g i 9.34土1. 23 : 100. 00土 26. .15: 199. OC 土 59. 521290. 00土 92.84 二十一 注生长为程和背甲长与体重关系式参见附录日。 5.2 繁殖 3 ww w. bz fx w. co m sc 1093--2007 5. 2 1 性成熟年龄 雌、雄龟性成熟年龄均为 5+龄。 5. 2. 2 繁殖期 每年 4 月 ~8 月，其中 5 月 ';---6 月为高峰期。 52.3 产卵类型 一年多次产卵 c 5.2.4 产卵量 每只雌龟每年产 1 窝~-4 窝，一般 2 ~勾 ----3 窝。 1 枚/窝~9 枚/窝，平均 3 枚/窝。 5.2.5 孵化时间与孵化温度 孵化时间见表 3 表 3 不同孵育温度黄喉拟水龟卵所需孵化时间 孵育温度， ;C 25士。.5 27士 8.5 29士 o. 5 31土 o. 5 孵化时间 .d 1108.10土L 也 1103. 7出 97 I 66. 60士1. 35 61. 16:::: 1. 13 6 遗传学特性 6. 1 细胞遗传学特性 33士05 58.93士1. 36 体细胞染色体数 271=52 0 核型 ， A十B十C=9+5+12;染色体臂数(NF) ， 70 0 黄喉拟Jj(龟染 色体组型见图 3 0 A 组为中部着丝点染色体o的和ill'中部着丝点染色体(SM) ，已经为亚端部染色体 (ST)和端部着丝点(T) ， C 组为微小染色体(rn) 0 A 事巍其墨 翼草草藤第蘸路路感必 B 铺盖韩撞撞撞静制 图 3 黄喉拟水龟染色体组型图 6. 2 生化遗传学特性 黄喉拟水龟??f组织乳酸脱氮酶(LDH)同工酶电泳图和扫描阁见图 4. 同工 酶酶带相对迁移率见 表 40 4 表 4 声言喉拟71<龟肝组织乳酸脱氢酶(LDH) 同工酶黯带相对迁移率 酶带 相对迁移率 LDH O. 16 LDH? 0.1吕 ww w. bz fx w. co m 7 检测j方法 7. 1 抽样 + 图 4 黄喉拟水龟E干组织乳酸册，氢酶(LDH) 同工酶电泳扫描图 按 GBí T 18654. 2 的规定执行。 7.2 性状测定 sc 1093-2007 根据龟外部形态中的可数性状及T:i丁量做状进行测定，其可数、可量性状的测定参见附录 A， 7.3 年龄的鉴定 根据龟背甲 L椎盾或肋盾的同心致密窄圈，或主是盾上的 L 形致密纹进行鉴定，每一个问心致密窄 圈或 L形致密纹为 A龄。 7.4 染色体的检测j 以 10μg/g 体重剂量给龟腹腔注射植物血球凝聚紊CPHA) ，处理 24 h ，以 5μgìg~6 μg/ g 体重剂 量腹腔内注射秋水仙素， 3.5 h 后取牌脏， O. 037 5 mol/ L KCl 低渗 15 rnin r-...- 20 mino 一卡谐氏(C'??rnoy' s) 因定液(甲醇 2 冰醋酸=3: 1)固定。染色体标本的1M片、染色和计数按 GB! T 18654.12 的规定执行。 龟类染色体的核型模式按以下标准排列 .A 级为中部着丝点染色体CM)和亚中部着主主点染色体CSM);B 级为端部着丝点CT)和亚端部染色体CST) ;C 级为微小染色体(m) 。由于微 小染色体太小.在统计染色 体臂数时，记为 10 7.5 肝组织乳酸脱氨酶酶谱 7. 5. 1 样品制备 离主I汗组织 1.0 g，放入离心管.n~冰箱保存。每个样品取 0.'1 g ,1J1l 0.1 mol! L , pH=7. 2 磷酸缓冲 液。L附录c. 1) 1 600μL，加 400 ,uL 5%茂糖溶液，冰浴条件 F研磨，全部研磨碎后倒入离心管，在 14000 r/ min条件下，1.1 0C冷冻离心 20 n1in，取上清液置于?20'C冰箱保存备用c 7. 5. 2 凝胶制备 由'1.5%分离i胶和 2.5%浓缩胶制成聚丙烯除胶垂直板凝胶。各种凝胶制备溶液配方见表C. 1 ，凝 胶制备配方见表C. 20 7.53 上神与电泳 在 t 、下电级槽中分别力[J人上、 F槽电极缓冲液(见附录C. 3) ，取样品上清 i夜 100 I-'L ，加 50%甘油 50μL 和 0.05%澳盼蓝 10.uL.混匀后用微量注射器小心吸取 8μL 注入点样孔中，置于 n:冰箱，在稳、压 ww w. bz fx w. co m sc 1093-2007 220 V 条件下进行电泳，至澳酸蓝指示剂到下槽玻璃下缘止。 7, 5, 4 染色、褪色、扫描 染色?将电泳胶放入预先制备好的染色液(见附录C. 4) 中， :lOoC恒温条 件 F染色 30 min~'45 min , 至得到清晰的梅带止。 褪色?在 2.5%的冰酶酸中褪色至底板清晰市透明。 扫描:透明后即刻用扫描仪对褪好色的凝胶进行扫描、保存。 8 检验规则与结果!fIJ定 按 GB/ T 18654 , 1 的规定执行。 5 ww w. bz fx w. co m 附录 A {资料性附录) 可数、可量性状名词解释 Al 可数性状 颈盾:椎盾前方嵌于左右缘盾之间的一块小盾片， 椎盾:背甲正中的 1 列历i 片; 肋屑:椎盾左右两侧与左右缘盾之间的 2 列宽大的盾片; 缘盾:背甲左右边缘 2 列较小的盾片; 臀盾:背甲后缘正中的lX~缘盾; 喉盾:腹甲最前缘正中央的盾片; 胶盾:喉盾和胸盾之间的盾片; 胸盾，Jj主盾和j腹盾之间的盾片- E重盾:胸盾和股盾之间的盾片; 股盾:腹盾和JlI盾之间的盾片; 且工盾:腹甲后部的盾片; 腋盾z面临腋凹的底片; 膀盾:面临膀凹的盾片。 A.2 可盖章性状 背甲长:背甲的最大直线长度， 背甲觉:背甲的最大直线宽度; 壳高 2腹甲与背甲之间的最大直线高度; 腹甲长， ft草甲的最大直线长度， 腹甲后半部长， n复甲膀盾至臀盾后缘的垂直最大直线长度 g E草甲前半部宽 3腹甲腋盾前最大直线宽度; 腹甲后半部前宽z腹盾与股盾接合处直线宽度; 腹甲后半部后宽z股盾与111盾接合处直线宽度; 甲桥长:腋盾到膀盾的直线长度; E提盾宽?喉屑最大直线宽度， 喉盾缝长:喉盾中缝直线长度; 且在盾缝长，M;盾中缝直线妖度; 胸厨缝长:胸盾中缝直线长度; 腹盾缝长，Jl1i!盾中缝直线长度; 股盾缝民 z股盾中缝直线长度; 月工盾缝长 :.ml雪中缝直线长度。 sc 1093-2007 7 ww w. bz fx w. co m sc 10932007 附录 B (资料性附录) 生长方程和背甲长与体意关系式 81 体室、背甲长和背甲宽生长方程 式中 W; =15. 377é649.11 (r=O. 904 6) ........................... (B.]) L，二 4.22681吧阳 1 (r~O. 990 9) …...., … … . (B.2) W'2 =3.589 3T069f3 (r~O. 988 0) ……...…. (B. 3) W;l龄时龟体茧，单位为克(g); L， 一-t 龄时龟背甲长，单位为毫米(rnrn) ; 1再112 --------------t 龄时龟背甲宽，单位为毫米(口1m) ; T 龟的年龄，龄。 B.2 体重重、背甲长与背甲宽关系式 8 式中 z W; =0.2017 L ,2.m8(r=0. 998 3) ….....,..….....‘ CB.4) L,=l. 040 5 W;i099 1 (r=O. 999) ………?……. (B. 5) W;t龄时龟体重，单位为克(g) j L/. ?-t 龄时龟背甲长，单佼为毫米(mm)j W; - t 龄时龟背甲宽，单位为毫米 (mm); T … 龟的;f龄，龄。 ww w. bz fx w. co m sc 1093-2007 附录 C {规范性附录) 同工自每各种试剂的配和j C1 磷酸缓冲液(0 ， 1 mol/L pH=7 , 2) 的配制 磷酸缓冲液出 Aì夜和 Bì夜j战 72 ' 28 的比例泪，合而成，现自己现用 o C. l , l Aì夜 (0.1 mol/ L. Naz HP04 )配制:取 18.30 g 含)个结晶水的磷酸氢二锅(Na2HP04 ?? H ,O) 定容于 1 ?o mL 蒸馆水中，或取 35.82 g 含两个结品水的磷酸氢二锅 (Na，HPO， ?? 2日2()) 定容于 10? mL蒸馅水中，即成。 C. 1, 2 B 液(0.1 mol! L ， NaH， PO，)配制.取 18.80 g 含一个结晶水的磷酸二氧的(NaHzP04 ?? H 20) 定容于 1 0? mL 蒸馆水中，或取 15. 60 g 含两个结品水的磷酸二氧纳 (NaH， Po.， ?? 2日2()) 定容于 1000 ml 蒸馆水中，即成。 C2 凝胶制备 C. 2, 1 凝胶制备溶液配制 各利2凝胶市ù备溶液配方见表C. L 表C. l 各种凝胶制备溶液配方 溶液 配制方法 分报A散F窍2骂街贯l放储g 掖ZL要Z冲冲被穰 取 Tris 56. 75 g 加 200mL蒸馈水，用浓盐酸询 pH 为吕.9 ， im蒸馆水lfJj 250 mL 取丙烯自tH贵 93.75 g , N，i'J'亚甲基双丙烯IE-i'按 2 ， 50 g榕于蒸烧水中，定容到 250mL 取过硫酸接 17. .5 lllg，溶解到 10mL水中 取 Tris 5. 98 g JJO 80ml 蒸惚水，浓盐酸调 pH为 6.7 ，)][1蒸馈水 ~j }\)O mL C. 22 分离胶和浓缩胶的制备 用 7.5%分离胶和 2.5%浓缩胶制成聚丙烯酸胶垂直板凝胶。凝胶制备配方见表 C.20 表 C. 2 凝胶制备配方 7.5%分离胶 2.5%浓缩胶 妇二 ，分离胶缓冲液，~L l 胶储液， μI ?一l一 6C 拉雪里缓冲卒，μL i~J乙斗 |ιAP ， uL I TEl'vlED(N ， N，町， Nf?阴甲基乙二股， μL M 水，严 L 日再二L … ( C. 3 电极缓冲液 30Cη!ι疑胶储液，μL 335 1500 ! AP'!lL 24 i TEMEDCN ， N.N' ， N'--四甲基乙 ::::.??安 IIL 2C 987f 纯水 .tj IJ 3 320 川00 I 总体积，μL 500C 南极缓冲j夜分上槽电极缓冲浪母液和Il才需电极缓冲浓母液，电泳时分 别稀释 10 倍和 5 倍，其自己方 ww w. bz fx w. co m sc 1093-2007 见表C. 3 。 表C. 3 电极缓冲液制备 溶 液 ; 配制方法 I J:槽市极缓被母液 I ~_町 内仁;工 rr !取 Tris 6. 00 g，甘氨酸 28.80 g.hü蒸储水定容到 1000 mL IpH-'8. 可电泳时稀释 10倍尸 YF槽电假缓冲液母液(电泳时稀释吕俯 I J取 rr??s 56.75 g加 200mL水， 用浓盐酸调 pHj年 8.9.加蒸饵水到 250mL C4 同工酶染色液的配哥哥 先配制染色用各溶液见表 C.4.再配制j染色液见表C. 50 表C. 4 染色用溶液配方 溶 液 配制方法 1. 5 moL/ L Tris-HCl 染色缓冲液 CpH= i 取丁'ris18 I. 71g溶于 900 rnL 蒸铺水中，用盐酸调节至 pH 为 9.5 ，再用 9.5 蒸饱水稀释到 1000 rnL !氯化硝基因氮略'lI1.' (NBT 取 250 mg N'BT溶于 250mL蒸烧水中 忡嚓甲幽硫酸盐 i 34-.5 mg溶于 1? mL棚水中 i 取 203.76 rnL 乳酸，加入 700 mL 蒸馆水混合，用 NaOH 调节 pH 为 乳酸钝 i |7.0，再用蒸馆水定容到 1000 mL 表C. 5 染色液配方 1. 5 mol/ LTris-HCl 辅酶 I l氧化硝基叫蓝( 盼嚓甲自旨硫酸盐 乳酸锅 蒸馆水 染色缓呻液(pH~9. 5)mL mg (;\IBT) 旦L rnL mL '1.5 15 15 5 a ,17.5 10