道地药材质量评价

null道地药材道地药材是指一定的药用生物品种在特定环境和气候等诸因素的综合作用下，所形成的产地适宜、品种优良、产量高、炮制考究、疗效突出、带有地域性特点的药材 。它是一个约定俗成的、古代药物标准化的概念，它以固定产地生产、加工或销售来控制药材质量，是古代对药用植物资源疗效的认知和评价。道地药材的药名前多冠以地名，以示其道地产区。 常用的道地药材常用的道地药材1.四大怀药：怀地黄、怀菊花、怀牛膝、怀山药。 2.浙八味：杭麦冬、杭菊花、浙元参、延胡索、白术、山茱萸、白芍、浙贝母。 3.其他：山东东阿阿胶、山东莱阳沙参、安徽凤凰山丹皮、广东阳春砂仁、广东新会陈皮 4.四川康定川贝（炉贝）、江西枳壳、宁夏中宁枸杞、江苏太仓薄荷 道地药材的性状评价道地药材的性状评价眼观、手摸、鼻闻、口尝、水试、火试等简单的方法。如宁夏的枸杞以粒大饱满、色红、肉厚、油润、籽少、味甜微苦等性状特征优于其他产地枸杞 。在科学技术不够发达的时期，它对于道地药材的鉴定和发展起了十分重要的作用 。由于性状鉴定主要依靠鉴定者丰富的经验和感觉 ，准确性就不可能很高。 道地药材的显微鉴定道地药材的显微鉴定由于生药的各种组织形态均具有较稳定的显微特征，利用显微镜来观察生药的组织结构、细胞形状及内含物，可以成为生药品种鉴别和质量鉴定的一个重要手段。它弥补了性状鉴定的不足，尤其是在对破碎药材及粉碎后的药材的鉴定中发挥了重要作用。 木香 Radix Aucklandiae木香 Radix Aucklandiae【来源】为菊科 木香Aucklandia lappa Decne. 根 【产地】主产于云南省, 为栽培品。 【采收加工】秋、冬两季采挖2~3年生的根，除去茎叶、须根及泥土。 切段或纵剖为块，晒干或风干，撞去粗皮。null【性状鉴别】【性状鉴别】呈圆柱形或半圆柱形，形如枯骨。 表面黄棕色，可见不规则菱形网纹，有显著纵沟及侧根痕， 质坚，体重，不易折断， 断面形成层环棕色，并可见散在的褐色油点。 老根中心常呈朽木状。 气香特异，味微苦。 【显微鉴别】根横切面：【显微鉴别】根横切面：木栓层由多列木栓细胞组成。 韧皮部宽厚，射线明显，纤维束散在。 形成层成环。 木质部由导管、木纤维及木薄壁细胞组成。 根的中心为四原型初生木质部。 薄壁组织中有大型油室散在，油室常含有黄色分泌物。 薄壁细胞中含菊糖。null粉末：黄棕色。粉末：黄棕色。木纤维多成束，黄色，梭状，纹孔及孔沟明显。 油室碎片内含黄色或棕色分泌物。 菊糖多，有时表面现放射状线纹。 木栓细胞、导管null【成分】【成分】含挥发油：主成分为木香烃内酯、去氢木香内酯、二氢木香内酯、α-木香酸、α-木香醇等。 木香碱（saussurine）、菊糖等。【理化】【理化】 TLC 以木香烃内酯、去氢木香内酯为对照. HPLC测定木香烃内酯、去氢木香内酯的总量不得小于1.8%。川木香（Radix Vladimiriae）川木香（Radix Vladimiriae）【来源】为菊科 川木香Vladimiria souliei (Franch.) Ling 灰毛川木香Vladimiria souliei var. cinerea Ling 的根。【性状鉴别】【性状鉴别】呈圆柱形或有纵槽的半圆柱形； 外皮脱落处可见丝瓜络状细筋脉； 根头偶有黑色发粘的胶状物，习称“油头”。 体较轻，质硬脆，易折断， 断面有深黄色稀疏油点及裂隙，木质部宽广，有放射状纹理； 有的中心呈枯朽状。 气微香，味苦，嚼之粘牙。null【成分】【成分】含挥发油，川木香内酯，菊糖。 炮制 除去油头，洗净，切片；夹草纸烘煨，烘至挥发油渗至草纸上。null 白 术 Radix Atractylodis Macrocephalae） 白 术 Radix Atractylodis Macrocephalae）【来源】为菊科 白术Atractylodes macrocephala Koidz. 的根茎 【产地】主产于浙江、安徽、湖北等省。多为栽培。【采收加工】【采收加工】霜降前后，挖取2~3年生的根茎，除去茎叶及细根，烘干，称烘术；晒干，称晒术。【性状鉴别】【性状鉴别】呈肥厚拳状团块。 表面有瘤状突起。 顶端有残留茎基和芽痕。 质坚硬，不易折断。 生晒术断面略有菊花纹及棕黄色油点。 烘术断面淡黄白色，角质，中央有裂隙； 气清香，味甜微辛，嚼之略带粘性。null【显微鉴别】根茎横切面：【显微鉴别】根茎横切面：木栓层内侧常夹有断续的石细胞环。 皮层、韧皮部及木射线中有大型油室散在。 形成层环明显。 导管群中部有纤维束围绕导管，二者共形成菱形，靠近中央有时亦可见纤维束。 中央有髓部。 薄壁细胞中含菊糖及草酸钙针晶。null粉末：淡黄棕色。粉末：淡黄棕色。草酸钙针晶细小，长10~32µm。 纤维黄色，大多成束，长梭形，壁甚厚，孔沟明显。 石细胞淡黄色，类圆形、多角形、长方形或少数纺锤形，直径37~64µm，胞腔明显，有不规则孔沟。 导管分子较短小，为网纹及具缘纹孔，直径至48µm。 薄壁细胞含菊糖。null【成分】【成分】含挥发油：苍术酮（atractylon）、白术内酯A、白术内酯B、3-β-乙酰氧基苍术酮等多种成分。 【理化鉴别】 TLC以对照药材为对照, 应显一桃红色主斑点（苍术酮）。苍术（Radix Atractylodis）苍术（Radix Atractylodis）【来源】菊科 茅苍术Atractylodes lancea (Thunb.) DC. 北苍术Atractylodes chinensis (DC.) Koidz. 根茎null【产地】茅苍术主产于江苏、湖北、河南等省。北苍术主产于华北及西北地区。 【采收加工】春、秋两季挖取根茎，除去茎、叶、细根、泥土，晒干，撞去须根。【性状鉴别】【性状鉴别】茅苍术 呈不规则连珠状或结节状圆柱形。 断面有橙黄色或棕红色油点，习称“朱砂点”，暴露稍久，可析出白毛状结晶，习称“起霜”。 香气特异，味微甘、辛、苦。nullnull北苍术 呈疙瘩块状或结节状圆柱形。 表面棕黑色，除去外皮者黄棕色。 质较疏松，断面有油点，无白毛状结晶析出。 香气较淡，味辛、苦。null【显微鉴别】茅苍术根茎横切面：【显微鉴别】茅苍术根茎横切面：木栓层内夹有石细胞带1至数条。 皮层、射线和髓部散有油室。 形成层成环。 薄壁细胞含有菊糖和细小的草酸钙针晶。null粉末：棕黄色。粉末：棕黄色。石细胞常和木栓细胞连在一起。 纤维梭状，常成束，有的一端钝圆，腔较大。 导管节较短，主为网纹，也有具缘纹孔。 草酸钙针晶细小，长5~30μm，不规则地充塞于薄壁细胞中。 油室碎片多见。 菊糖表面常现放射状纹理。【成分】 【成分】 茅苍术根茎含挥发油：茅术醇（hinesol）、β-桉油醇（β-eudesmol）、苍术素及苍术酮（atractylol）。 北苍术根茎含挥发油3%~5%：苍术素、茅术醇、β-桉油醇、苍术醇及苍术酮。【理化鉴别】【理化鉴别】TLC检苍术素 以对照药材为对照品，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点并应显有一相同的污绿色主斑点。（检查苍术素）石菖蒲 Rhizoma Acori Tatarinowii石菖蒲 Rhizoma Acori Tatarinowii【来源】为天南星科　石菖蒲 Acorus tatarinowii Schott　的根茎 【产地】 主产于四川、浙江、江西等省。 【性状鉴别】【性状鉴别】呈扁圆柱形。 表面有环节，节间长0.2~0.8cm，节上有须根或根痕； 叶痕呈三角形，左右交互排列，有的有鳞毛状的叶基残余。 质硬，易断。 断面纤维性，可见内皮层环及棕色油细胞点。 气芳香，味苦，微辛。null【显微鉴别】 根茎横切面：【显微鉴别】 根茎横切面：表皮细胞外壁增厚，棕色，有的含红棕色物。 皮层宽广，散有纤维束及叶迹维管束；叶迹维管束外韧型，维管束鞘纤维成环，木化。 内皮层明显。 中柱维管束周木型及外韧型。纤维束及维管束鞘纤维周围细胞中含草酸钙方晶，形成晶纤维。 薄壁组织中散有类圆形油细胞；并含淀粉粒。null【成分】【成分】含挥发油：β， α ，γ—细辛醚 (β-asarone) 62.38％、l-烯丙基-2，4，5三甲氧基苯18.24 %、顺-甲基异丁香油酚、甲基丁香油酚。 【理化】TLC 以石菖蒲对照药材为对照。　　　　　　　　　　　　　　　　　　　【附注】１.水菖蒲【附注】１.水菖蒲为天南星科水菖蒲　Acorus calamus L.的根茎。 较粗大，长5~20cm，直径1~1.5cm，节间长0.2~1.5cm。 上侧有较大的类三角形叶痕，下侧有凹陷的圆点状根痕。 折断面海绵样，可见一明显的环，多数小空洞及维管束点。 气较浓烈而特异，味辛。 有圈链状通气组织null２.九节菖蒲２.九节菖蒲为毛茛科　阿尔泰银莲花 Anemone altaica Fisch. ex C. A. Mey. 根茎 根茎较细小纺锤形。 表面棕黄色，具多数半环状突起的节，其上有鳞叶痕小根痕。 质坚脆，断面白色，显粉性。 气微，味微酸而稍麻舌。 双子叶植物根茎正常结构。null道地药材指纹图谱鉴定道地药材指纹图谱鉴定中药指纹图谱是指某些中药材或中药制剂经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示其化学特征的色谱图或光谱图。 中药指纹图谱是一种综合的，可量化的鉴定手段，它是建立在中药化学成分系统研究的基础上，主要用于评价中药材以及中药制剂半成品质量的真实性、优良性和稳定性。“整体性”和“模糊性”为其显著特点。 中药指纹图谱建立的必要性 中药指纹图谱建立的必要性 中药及其制剂均为多组分复杂体系，因此评价其质量应采用与之相适应的，能提供丰富鉴别信息的方法，但现行的显微鉴别、理化鉴别和含量测定等方法都不足以解决这一问题，建立中药指纹图谱将能较为全面地反映中药及其制剂中所含化学成分的种类与数量，进而对药品质量进行整体描述和评价。这也正好符合中医药整体学说。 中药指纹图谱建立的必要性中药指纹图谱建立的必要性中药是中医防病治病的物质基础，其质量直接影响中医的临床疗效和中药的实验研究，也是关系到用药安全的大事。因此，中药的质量控制一直是中药研究和生产领域里的重要研究课题。建立科学、合理和可行的中药质量控制体系对中药事业的发展具有重要的意义。 中药指纹图谱建立的意义中药指纹图谱建立的意义中药指纹图谱是中药现代化的突破口之一，也是它的关键技术之一 。 中药指纹图谱技术已被世界发达国家所认可，我国的中成药生产只要按照指纹图谱技术进行全面质量控制，那么中成药走向世界将指日可待。美国食品药品管理局（FDA）允许草药保健品申报资料中提供色谱指纹图谱；世界卫生组织（WHO）在1996年草药评价指导原则中也规定，如果草药的活性成分不明确，可以提供色谱指纹图谱以证明产品质量的一致；欧共体在草药质量指南中亦称，单靠测定某种有效成分考查质量的稳定性是不够的，因为草药及其制剂是以整体为活性物质 中药鉴定常用的指纹图谱技术中药鉴定常用的指纹图谱技术薄层扫描（TLCS）、 高效液相色谱法（HPLC）、 气相色谱法（GC）和高效毛细管电泳法（HPCE）等色谱法 紫外光谱法（UV）、红外光谱法（IR）、质谱法（MS）、核磁共振法（NMR）和X—射线衍射法等光谱法。 中药指纹图谱的特色中药指纹图谱的特色中药指纹图谱的研究以反映中药的整体化学特征为立论依据，提出以解决两个关键技术为突破口，实现指纹图谱技术在中药质量控制方面的应用。它的特色主要表现在三个方面： 1、用化的程序获得中药特征性总成分提取物，并用HNMR、HPLC、UV、IR等多种手段表征其组成和结构。核心的问题在于这种特征性总成分提取物要有真正的特征性，它的组成和结构要能真正代表这种中药 。 中药指纹图谱的特色中药指纹图谱的特色2、由于同时采用多种检测手段来表征中药特征总提物的结构和相对组成方式，因此，方便了各部门在质量控制方面可以根据自己的实际情况选择应用。其中，由于HNMR具有操作简便、快速、检测成本低、重现性好和信息量大等优点，更是中药指纹图谱研究的主要特色之一。 3、中药指纹图谱的解析研究以及中药特征总提物和各单体成分的生理活性研究体现了这一技术的科学性。 色谱法色谱法色谱法也叫层析法，它是一种高效能的物理分离技术，将它用于分析化学并配合适当的检测手段，就成为色谱分析法。    色谱法的最早应用是用于分离植物色素，其方法是这样的：在一玻璃管中放入碳酸钙，将含有植物色素（植物叶的提取液）的石油醚倒入管中。此时，玻璃管的上端立即出现几种颜色的混合谱带。然后用纯石油醚冲洗，随着石油醚的加入，谱带不断地向下移动，并逐渐分开成几个不同颜色的谱带，继续冲洗就可分别接得各种颜色的色素，并可分别进行鉴定。色谱法也由此而得名。 色谱分离基本原理 色谱分离基本原理 在色谱法中存在两相，一相是固定不动的，我们把它叫做固定相；另一相则不断流过固定相，我们把它叫做流动相。 色谱法的分离原理就是利用待分离的各种物质在两相中的分配系数、吸附能力等亲和能力的不同来进行分离的。  使用外力使含有样品的流动相（气体、液体）通过一固定于柱中或平板上、与流动相互不相溶的固定相表面。当流动相中携带的混合物流经固定相时，混合物中的各组分与固定相发生相互作用。 由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中先后流出。与适当的柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的分离与检测。 　 色谱法的种类 色谱法的种类 色谱分析法有很多种类，从不同的角度出发可以有不同的分类方法。 从两相的状态分类： 色谱法中，流动相可以是气体，也可以是液体，由此可分为气相色谱法（GC）和液相色谱法（LC）。固定相既可以是固体，也可以是涂在固体上的液体，由此又可将气相色谱法和液相色谱法分为气-液色谱、气-固色谱、液-固色谱、液-液色谱。　　 薄层色谱薄层色谱薄层层析又叫薄层色谱（Thin Layer Chromatography，常用TLC表示 ），是色谱法中的一种，是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，属固—液吸附色谱，它兼备了柱色谱和纸色谱的优点，一方面适用于少量样品（几到几微克，甚至0.01微克）的分离；另一方面在制作薄层板时，把吸附层加厚加大，将样品点成一条线，则可分离多达500mg的样品。因此，又可用来精制样品，此法特别适用于挥发性较小或较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物质。此外，薄层色谱法还可用来跟踪有机反应及进行柱色谱之前的一种“预试”。 薄层色谱法的操作方法薄层色谱法的操作方法薄层色谱是在被洗涤干净的玻板（10×3cm左右）上均匀的涂一层吸附剂或支持剂，待干燥、活化后将样品溶液用管口平整的毛细管滴加于离薄层板一端约1cm处的起点线上，凉干或吹干后置薄层板于盛有展开剂的展开槽内，浸入深度为0.5cm。待展开剂前沿离顶端约1cm附近时，将色谱板取出，干燥后喷以显色剂，或在紫外灯下显色。 薄层层析法操作注意事项薄层层析法操作注意事项铺板用的匀浆不宜过稠或过稀：过稠，板容易出现拖动或停顿造成的层纹；过稀，水蒸发后，板表面较粗糙。匀浆配比一般是硅胶G:水=1：2～3，硅胶G:羧甲基纤维素钠水溶液=1:2。研磨匀浆的时间，根据经验来定，与空气湿度有关，一般通过拿起研棒时匀浆下滴的情况来判断，越稠越难下滴。匀浆的稀稠除影响板的平滑外，也影响板涂层的厚度，进一步影响上样量。涂层薄，点样易过载；涂层厚，显色不那么明显。通常，板的质量对薄层鉴别的影响不是很大，影响最大的是展开剂的配制和展开系统的饱和。 薄层层析法操作注意事项薄层层析法操作注意事项点样 　　尽量用小的点样管。如果有足够的耐性，最好只用1微升的点样管点样，点的斑点较小，展开的色谱图分离度好，颜色分明。样品溶液的含水量越小越好，样品溶液含水量大，点样斑点扩散大。样品溶液的溶剂一般是无水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。点好样的薄层板用电吹风的热风吹干或放入干燥器里晾干。 薄层层析法操作注意事项薄层层析法操作注意事项展开剂配制 　　选择合适的量器把各组成溶剂移入分液漏斗，强烈振摇使混合液充分混匀，放置，如果分层，取用体积大的一层作为展开剂。绝对不应该把各组成溶液倒入展开缸，振摇展开缸来配制展开剂。混合不均匀和没有分液的展开剂，会造成层析的完全失败。各组成溶剂的比例准确度对不同的分析任务有不同的要求，尽量达到实验室仪器的最高精确度，比如：取1ml的溶剂，应使用1ml的单标移液管，移液管应符合计量认证要求，尽管多数时候这不是必须的。 薄层层析法操作注意事项薄层层析法操作注意事项　展开系统的饱和 　　一般使用的是双槽展开缸，一槽用来放展开剂，另一槽可加入氨水或硫酸。把待展开的板放入两槽间的平台，斜架着，盖上展开缸的盖子。让展开剂的蒸气充满展开缸，并使薄层板吸附蒸气达到饱和，防止边沿效应，饱和时间在半小时左右。展开时难免要打开盖子把薄层板放入展开剂中，不过对薄层板与蒸气的吸附平衡影响不大，当然动作应该尽量轻、快。 薄层层析法操作注意事项薄层层析法操作注意事项温湿度的控制 　　温湿度对薄层影响都很大。不冻结的前提下，通常温度越低分离越好，较难的分离需在低温下分离，例如人参皂苷。湿度的影响，估计主要是影响薄层板的吸附能力，导致选择性（容量因子）的变化，湿度应根据实际情况确定。温度控制使用空调器或冰柜，湿度控制是通过在另一展开槽放置相应浓度的硫酸。 显色 　　喷显色剂显色最重要是有好的雾化器。 薄层色谱(TLC)指纹图谱 薄层色谱(TLC)指纹图谱 TLC具有快速、经济、可靠、操作简单、适用范围广、重现 性好等优点，为国内外学者最快接受和广为使用。用固定波长对薄层展开的各斑点作薄层扫 描的扫描图谱比目测的层析图谱更为客观准确，因而具有更好的指纹鉴别意义。 如：用经过优化的溶剂系统在双槽 展开箱中用硅胶薄层板作两次展开，对黄连所含原小檗碱型生物碱进行薄层色谱分离，在控 制条件下得到的商品黄连样品 TLC 中可检出包括微量生物碱在内的 9～11 个斑点，其荧光 及紫外扫描图可作为黄连药材的指纹图谱，以此确定不同黄连样品中主要生物碱的分布。 薄层层析法鉴别玄参薄层层析法鉴别玄参取本品10g，加丙酮4Oml，加热回流lh，滤过，滤液挥干，残渣加丙酮lml使之溶解，作为供试品溶液。同法制成玄参阴性对照液。另取玄参对照药材2g，加丙酮20ml，同法制成对照药材溶液。吸取上述三种溶液各10μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(3：1)为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。而阴性对照液无相应的斑点 null三七的薄层指纹图谱null高效液相色谱仪的组成和工作原理高效液相色谱仪的组成和工作原理高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。 高效液相色谱仪的应用高效液相色谱仪的应用高效液相色谱法只要求样品能制成溶液, 不受样品挥发性的限制,流动相可选择的范围宽,固定相的种类繁多,因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的、以及各种分子量范围的物质。与试样预处理技术相配合,HPL C 所达到的高分辨率和高灵敏度, 使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能,能够分离复杂相体中的微量成分。随着固定相的发展, 有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离。HPL C 成为解决中药质量问题最有前途的方法之一。 高效液相色谱 (HPLC) 指纹图谱 高效液相色谱 (HPLC) 指纹图谱 HPLC 由于具有分离效能高、分析速度快等优点，近期已广为普及用于中药的定量分析。在中药的定性鉴别中亦能发 挥 很好的作用。 如洪筱坤等对 3 种正品大黄的 9 个样品进行 HPLC 分析，将相对保留值 α 和相对峰面积 Ar 两者结合起来，建立了大黄样品的 HPLC-相对保留值指纹图 谱 ，反映了该中药的化学组成及其含量分布状况，其特征可作为鉴别中药的依据。 三七及其混淆品的HPLC指纹图谱鉴定 三七及其混淆品的HPLC指纹图谱鉴定 仪器:WatersTm 600E高效液相色谱仪，WaterSTM2487UV检测器，WaterSTM Millennium“色谱工作站，BRNASON5200超声仪器。 1.2 试剂:乙腈HPLC级，甲醇分析级，均为Sigma公司购买，对照品人参皂苷Rg,,Rb ,,R d ，三七皂苷R,(中国药品生物制品检验所购买)。 1.3 药材:三七的药材样品采自云南文山 1.4 测定方法: 1.4.1 色谱条件:分析柱Nova-PakC18(3 .9mm×300mm);流动相:CH3CN-50mmol/L KH2P04·H20(20:80)，二元梯度洗脱;流速:1. 0 mL/min;UV检测器，检测波长203 nm。 。 三七及其混淆品的HPLC指纹图谱鉴定 三七及其混淆品的HPLC指纹图谱鉴定 1.4.2 对照品溶液的制备:分别取人参皂苷Rg1,Rb1,R d，三七皂苷R1,标准品1m g，甲醇配成1mg/mL对照品溶液。 1.4.3 供试样品溶液的制备:取待测样品5g，加人50 mL 70%甲醇溶液，超声提取2 h, 4 000 r/min 离心，取上清液，过0. 2um滤膜，滤液为供试样品溶液。 1.4.4 稳定性试验:取同一份样品溶液，分别在0，1,2,4,8,12,24,36,48 h进行测定，考察色谱峰面积和保留时间的一致性。 1.4.5 精密度试验:取同一份供试样品溶液，连续进样5次，考察色谱峰面积和保留时间的一致性。 1.4.6 重现性试验:取5份样品，按测定方法测定，考察色谱峰面积和保留时间的一致性。 nullnullnullnullnullnullnull四川产芎10个指纹图谱叠加示意图 null采用指纹图谱鉴别中药材(中药饮片或中成药)的真伪具有明显优势。本试验条件下三七有4个明显的特征峰，我们把它作为三七“共同特征”的三七皂苷HPLC指纹图谱，可以清楚地表达三七指纹图谱鉴别的专属性，与人参属的其他种和三七的2个混淆品的指纹图谱比较，可以十分明显地看出他们之间的差异，很容易地将三七与其他混淆品区别开。本试验条件下的三七指纹图谱作为三七药材和饮片的鉴别无疑是一种可靠的方法。 气相色谱气相色谱   利用试样中各组份在气相和固定液液相间的分配系数不同，当汽化后的试样被载气带入色谱柱中运行时，组份就在其中的两相间进行反复多次分配，由于固定相对各组份的吸附或溶解能力不同， 因此各组份在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定的柱长后，便彼此分离，按顺序离开色谱柱进入检测器，产生的离子流讯号经放大后，在记录器上描绘出各组份的色谱峰。 气相色谱 (GC) 指纹图谱 气相色谱 (GC) 指纹图谱 GC 具有高效、高选择性、高灵敏度、用量少和分析速度 快等优点。气相色谱分离是利用试样中各组分在色谱柱中的气相和固定相间的分配系数不同，当汽化后的试样被载气带入色谱柱中运行时，组分就在其中的两相间进行反复多次（103-106）的分配（吸附－脱附－放出）由于固定相对各种组分的吸附能力不同（即保存作用不同），因此各组份在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定的柱长后，便彼此分离，顺序离开色谱柱进入检测器，产生的离子流信号经放大后在记录器上描绘出各组份的色谱峰。 气相色谱仪工作原理气相色谱仪工作原理气相色谱仪分析基本流程：样品由载气吹动 ——> 样品经色谱柱分离——>　检测器检测成分——>工作站打印分析结果。　 高效毛细管电泳高效毛细管电泳毛细管电泳（capillary electrophoresis，CE）又称高效毛细管电泳（high performance capillary electrophoresis，HPCE），是一类以毛细管为分离通道、以高压直流电场为驱动力的新型液相分离技术。 毛细管电泳实际上包含电泳、色谱及其交叉内容，它使分析化学得以从微升水平进入纳升水平，并使单细胞分析，乃至单分子分析成为可能。长期困扰我们的生物大分子如蛋白质的分离分析也因此有了新的转机。nullnullnullnull毛细管电泳色谱图nullnull图1 毛细管电泳仪器简图 1－温度控制系统；2－高压电源；3－高压电极槽；4－毛细管；5－检测器；6－低压电极槽；7－铂丝电极；8－记录/数据处理检测器毛细管电泳法的优点毛细管电泳法的优点（1） 高效 塔板数目在105-106 片/m 间，当采用CGE 时，塔板数目可达107 片/m 以上； （2） 快速 一般在十几分钟内完成分离； （3） 微量 进样所需的样品体积为nL 级； （4） 多模式 可根据需要选用不同的分离模式且仅需一台仪器； （5） 经济 实验消耗不过几毫升缓冲溶液，维持费用很低； （6） 自动 CE 是目前自动化程度较高的分离方法 。毛细管电泳-影响分离因素毛细管电泳-影响分离因素1 缓冲液 ：缓冲试剂的选择主要由所需的pH决定，在相同的pH下，不同缓冲试剂的分离效果不尽相同，有的可能相差甚远。CE中常用的缓冲试剂有：磷酸盐、硼砂或硼酸、醋酸盐等。 2 pH值：缓冲体系pH的选择依样品的性质和分离效率而定，是决定分离成败的一大关键。 3 分离电压：在CE中，分离电压也是控制电渗的一个重要参数。 4 温度 ：温度影响分离重现性和分离效率，控制温度可以调控电渗流的大小。 5 添加剂：在电解质溶液中加入添加剂，例如中性盐、两性离子、表面活性剂以及有机溶剂等，会引起电渗流的显著变化。 6 进样：CE的常规进样方式有两种：流体力学和电迁移进样。 毛细管电泳-应用 毛细管电泳-应用 CE具有多种分离模式（多种分离介质和原理），故具有多种功能，因此其应用十分广泛，通常能配成溶液或悬浮溶液的样品（除挥发性和不溶物外）均能用CE进行分离和分析，小到无机离子，大到生物大分子和超分子，甚至整个细胞都可进行分离检测。它广泛应用于生命科学、医药科学、临床医学、分子生物学、法庭与侦破鉴定、化学、环境、海关、农学、生产过程监控、产品质检以及单细胞和单分子分析等领域。 CE分析技术在药品检验领域的应用 CE分析技术在药品检验领域的应用 一、原药的定量、原药中杂质的测定、药剂分析以及对它们稳定性的评价等以药品质量管理为目的的测定方法。这些方法要求有良好的选择性、适当的分析灵敏度和可靠的准确度等； 二、对进入人体内的药物或代谢物的吸收、分布、代谢、排泄等体内动态的研究，即临床药物分析。 CE在中药分析中的应用 CE在中药分析中的应用 中药品种繁多、药材产地各异、成分复杂，无论是药材还是成药的分析，都是一项非常艰难的任务。随着CE技术对中药材及其有效成分的鉴别与分析的快速发展，建立在此基础上的中成药和中药复方制剂中有效成分的定性、定量分析已有进展，且有希望解决长期困扰中药质量控制中的重大难题。近年，报道CE分析中药材已有18种、成药70种和有效成分120个以上。 毛细管电泳应用展望毛细管电泳应用展望CE技术的研究和应用，给药物分析领域和药品检验工作带来了生机与活力，无疑将对该专业技术的发展及提高起着重要的推动和促进作用。尤其以对基因工程药物、中成药复方制剂的分析和中药材种属的鉴定，令人瞩目。但任何事物都有两面性，它也有弱点和不足，如有的药物用CE分析精确度还不够高；有的灵敏度很高，但专属性界定尺度又不易掌握；CE仪器昂贵，很难普遍推广等等，都需要不断研究解决。尤其以如何巧妙地与其它方法和技术（如HPLC、MS等）联合使用，以收到更好的效果。 红外光谱法红外光谱法红外光谱定量分析是通过对特征吸收谱带强度的测量来求出组份含量。其理论依据是朗伯-比耳定律。 由于红外光谱的谱带较多，选择的余地大，所以能方便地对单一组份和多组份进行定量分析。  此外，该法不受样品状态的限制，能定量测定气体、液体和固体样品。因此，红外光谱定量分析应用广泛。但红外光谱法定量灵敏度较低，尚不适用于微量组份的测定。 红外光谱法的定量分析方法红外光谱法的定量分析方法 1. 选择吸收带的原则     （1）必须是被测物质的特征吸收带。例如分析酸、酯、醛、酮时，必须选择>C=O基团的振动有关的特征吸收带。     （2）所选择的吸收带的吸收强度应与被测物质的浓度有线性关系。     （3）所选择的吸收带应有较大的吸收系数且周围尽可能没有其它吸收带存在，以免干扰。   2 . 吸光度的测定     （1）一点法      该法不考虑背景吸收，直接从谱图中分析波数处读取谱图纵坐标的透过率，再由公式lg1/T=A计算吸光度。     （2）基线法     通过谱带两翼透过率最大点作光谱吸收的切线，作为该谱线的基线，则分析波数处的垂线与基线的交点，与最高吸收峰顶点的距离为峰高，其吸光度A=lg（I0/I）。 定性分析 定性分析 1 . 已知物的鉴定     将试样的谱图与标准的谱图进行对照，或者与文献上的谱图进行对照。如果两张谱图各吸收峰的位置和形状完全相同，峰的相对强度一样，就可以认为样品是该种标准物。如果两张谱图不一样，或峰位不一致，则说明两者不为同一化合物，或样品有杂质。如用计算机谱图检索，则采用相似度来判别。使用文献上的谱图应当注意试样的物态、结晶状态、溶剂、测定条件以及所用仪器类型均应与标准谱图相同。 2 . 未知物结构的测定     测定未知物的结构，是红外光谱法定性分析的一个重要用途。如果未知物不是新化合物，可以通过两种方式利用标准谱图进行查对： （1） 查阅标准谱图的谱带索引，与寻找试样光谱吸收带相同的标准谱图； （2） 进行光谱解析，判断试样的可能结构，然后在由化学分类索引查找标准谱图对照核实。 定性分析定性分析谱图解析一般先从基团频率区的最强谱带开始，推测未知物可能含有的基团，判断不可能含有的基团。再从指纹区的谱带进一步验证，找出可能含有基团的相关峰，用一组相关峰确认一个基团的存在。对于简单化合物，确认几个基团之后，便可初步确定分子结构，然后查对标准谱图核实。 3.几种标准谱图 　　（1）萨特勒（Sadtler）标准红外光谱图 　　（2）Aldrich红外谱图库 　　（3）Sigma Fourier红外光谱图库 红外波段的划分红外波段的划分红外光谱仪的组成 红外光谱仪的组成 红外光谱仪与紫外-可见分光光度计的组成基本相同，由光源、样品室、单色器以及检测器等部分组成 光源 ： 能斯特灯　　能斯特灯的是稀土氧化物，作成圆筒状(20x2 mm)，两端为铂引线。其工作温度为1200-2200K。此种光源具有很大的电阻负温度系数，需要预先加热并电源电路能控制电流强度，以免灯过热损坏。 碳化硅棒　　尺寸为50x5mm,工作温度1300-1500K。与能斯特灯相反,碳化硅棒具有正的电阻温度系数,电触点需水冷以防放电。其辐射能量与能斯特灯接近,但在>2000cm-1区域能量输出远大于能斯特灯。 白炽线圈　　用镍铬丝螺旋线圈或铑线做成。工作温度约1100K。其辐射能量略低于前两种，但寿命长。　　 一般近红外区的光源用钨灯即可，远红外区用水银放电灯作光源。 检测器 检测器 红外检测器有热检测器、热电检测器和光电导检测器三种。前两种用于色散型仪器中，后两种在傅立叶变换红外光谱仪中多见。 热检测器：热检测器依据的是辐射的热效应。辐射被一小的黑体吸收后，黑体温度升高，测量升高的温度可检测红外吸收。以热检测器检测红外辐射时，最主要的是要防止周围环境的热噪声。一般使用斩光器使光源辐射断续照射样品池。 热电检测器热电检测器使用具有特殊热电性质的绝缘体，一般采用热电材料的单晶片，如硫酸三甘氨酸酯TGS(triglycine sulfate,氘代或部分甘氨酸被丙氨酸代替)。在电场中放一绝缘体会使绝缘体产生极化，极化度与介电常数成正比。但移去电场，诱导的极化作用也随之消失。而热电材料即使移去电场，其极化也并不立即消失，极化强度与温度有关。当辐射照射时，温度会发生变化，从而影响晶体的电荷分布，这种变化可以被检测。热电检测器通常作成三明治状。将热电材料晶体夹在两片电极间，一个电极是红外透明的，容许辐射照射。辐射照射引起温度变化，从而晶体电荷分布发生变化，通过外部连接的电路可以测量。电流的大小与晶体的表面积、极化度随温度变化的速率成正比。 光电导检测器 光电导检测器 光电导检测器采用半导体材料薄膜，如Hg-Cd-Te或PbS或InSb，将其置于非导电的玻璃表面密闭于真空舱内。则吸收辐射后非导电性的价电子跃迁至高能量的导电带，从而降低半导体的电阻，产生信号。Hg-Cd-Te缩写为MCT，该检测器用于中红外区及远红外区，需冷至液氮温度(77K)以降低噪声。这种检测器比热电检测器灵敏，在FT-IR及GC/FT-IR仪器中获得广泛应用。　　此外，PbS检测器用于近红外区室温下的检测。傅立叶变换红外光谱仪的优点 傅立叶变换红外光谱仪的优点 大大提高了谱图的信噪比(throughput or Jaquinot advantage)。FT-IR仪器所用的光学元件少，无狭缝和光栅分光器，因此到达检测器的辐射强度大，信噪比大。 波长(数)精度高(±0.01cm-1)，重现性好。 分辨率高。 扫描速度快(multiplex or Fellgett advantage)。傅立叶变换仪器动镜一次运动完成一次扫描所需时间仅为一至数秒,可同时测定所有的波数区间。而色散型仪器在任一瞬间只观测一个很窄的频率范围,一次完整的扫描需数分钟。 由于傅立叶变换红外光谱仪的突出优点，目前已经取代了色散型红外光谱仪。 红外光谱的应用 红外光谱的应用 红外光谱主要用于有机化合物的结构鉴定。如果从样品的出处可以大致推测结构，则确认特定原子团或原子团间的结合就比较容易。通过测定已知物与待测样品的红外光谱进行比较，两者应一致。但需要注意以下几点： 即使同一物质，其红外谱图的测定条件(如测定方法，样品状态、浓度，仪器操作条件等)不同，谱图也有所差别。 特征吸收受分子整体的影响会略有偏移。这种偏移在得出结论时要考虑。如相邻基团的状态，与溶剂的作用等。 如果有部分不一致，还应考虑杂质60的存在。 对于完全未知的样品，则需进行谱图解析。但完全依靠红外光谱来进行化合物的最后确认相当困难，需要结合其他谱图信息(核磁共振，质谱，紫外光谱等) 核磁共振谱技术核磁共振谱技术NMR技术即核磁共振谱技术，是将核磁共振现象应用于分子结构测定的一项技术。对于有机分子结构测定来说，核磁共振谱扮演了非常重要的角色，核磁共振谱与紫外光谱、红外光谱和质谱一起被有机化学家们称为“四大名谱”。目前对核磁共振谱的研究主要集中在1H和13C两类原子核的图谱。目前对核磁共振谱的研究主要集中在1H和13C两类原子核的图谱。 核磁共振的方法与技术核磁共振的方法与技术核磁共振的方法与技术作为分析物质的手段，由于其可深入物质内部而不破坏样品，并具有迅速、准确、分辨率高等优点而得以迅速发展和广泛应用，已经从物理学渗透到化学、生物、地质、医疗以及材料等学科，在科研和生产中发挥了巨大作用。 核磁共振是1946年由美国斯坦福大学布洛赫(F.Block)和哈佛大学珀赛尔(E.M.Purcell)各自独立发现的，两人因此获得1952年诺贝尔物理学奖。50多年来，核磁共振已形成为一门有完整理论的新学科。核磁共振应用核磁共振应用磁共振适合于液体、固体。如今的高分辨技术，还将核磁用于了半固体及微量样品的研究。核磁谱图已经从过去的一维谱图（1D）发展到如今的二维（2D）、三维（3D）甚至四维（4D）谱图，陈旧的实验方法被放弃，新的实验方法迅速发展，它们将分子结构和分子间的关系表现得更加清晰。 核磁共振的应用核磁共振的应用早期的核磁共振谱主要集中于氢谱，这是由于能够产生核磁共振信号的1H原子在自然界丰度极高，由其产生的核磁共振信号很强，容易检测。随着傅立叶变换技术的发展，核磁共振仪可以在很短的时间内同时发出不同频率的射频场，这样就可以对样品重复扫描，从而将微弱的核磁共振信号从背景噪音中区分出来，这使得人们可以收集13C核磁共振信号。 近年来，人们发展了二维核磁共振谱技术，这使得人们能够获得更多关于分子结构的信息，目前二维核磁共振谱已经可以解析分子量较小的蛋白质分子的空间结构。 质谱技术质谱技术质谱（ Mass SPectrometry）是带电原子、分子或分子碎片按质荷比（或质量）的大小顺序排列的图谱。质谱仪是一类能使物质粒子高化成离子并通过适当的电场、磁场将它们按空间位置、时间先后或者轨道稳定与否实现质荷比分离，并检测强度后进行物质分析的仪器。质谱分析法是通过对被测样品离子的质荷比的测定来进行分析的一种分析方法。被分析的样品首先要离子化，然后利用不同离子在电场或磁场的运动行为的不同，把离子按质荷比（m/z）分开而得到质谱，通过样品的质谱和相关信息，可以得到样品的定性定量结果。 质谱分析的基本原理 质谱分析的基本原理 待分析的样品分子（或原子）在离子源中离化成具有不同质量的单电荷分子离子和碎片离子，这些单电荷离子在加速电场中获得相同的动能并形成一束离子，进入由电场和磁场组成的分析器，离子束中速度较慢的离子通过电场后编转大，速度快的偏转小；在磁场中离子发生角速度矢量相反的偏转，即速度慢的离子依然偏转大，速度快的偏转小；当两个场的偏转作用彼此补偿时，它们的轨道便相交于一点。与此同时，在磁场中还能发生质量的分离，这样就使具有同一质荷比而速度不同的离子聚焦在同一点上，不同质荷比的离子聚焦在不同的点上，其焦面接近于平面，在此处用检测系统进行检测即可得到不同质荷比的谱线，即质谱。通过质谱分析，我们可以获得分析样品的分子量、分子式、分子中同位素构成和分子结构等多方面的信息。 质谱分析技术的应用质谱分析技术的应用最初的质谱仪主要用来测定元素或同位素的原子量，随着离子光学理论的发展，质谱仪不断改进，其应用范围也在不断扩大，到20世纪50年代后期已广泛地应用于无机化合物和有机化合物的测定。现今，质谱分析的足迹已遍布各个学科的技术领域。 质谱技术在生命科学领域的应用，更为质谱的发展注入了新的活力，形成了独特的生物质谱技术。 实验仪器实验仪器傅里叶变换红外光谱仪 型号：Vector22 厂家：德国BRUKER 紫外-可见分光光度计 型号：CARY100 厂家：美国VARIAN 旋转蒸发仪 型号： RE52CS 厂家：上海亚荣生化仪器厂 药品与试剂药品与试剂层析用硅胶（青岛海洋化工厂），石油醚（沸程：60—90℃），乙酸乙酯，无水乙醇，苯，甲醇等均为分析纯（广州化学试剂一厂） 所有丹参样品均在广州清平中药市场购买，由广州中医药大学中药鉴定研究室 鉴定，均为Salvia miltiorrhiza Bge. null图1.不同丹参粉末的红外图谱null γ/cm-1γ/cm-1γ/cm-1γ/cm-1ABS ABSABSABS图2.丹参粉末的红外吸收峰相对强度－波数图表1. 不同丹参粉末的红外特征吸收表1. 不同丹参粉末的红外特征吸收丹参硅胶柱层析丹参硅胶柱层析null图3. 湖北栽培丹参的五条色带的红外吸收比较null（*:Vi表示第i个色带洗脱出来所用的淋洗液的体积）表2. 不同产地丹参的硅胶柱层析分离情况 null图4. 不同丹参的第四条色带的红外吸收比较柱状图γ/cm-1γ/cm-1γ/cm-1γ/cm-1ABSABSABSABSnull 表3. 不同丹参的红外特征吸收色带和特征吸收峰位置薄层层析薄层层析层析条件层析条件　吸附剂为硅胶G(60型)，CMC-Na的浓度为0.5%，薄层板为20cm×20cm，厚为0.5mm，110°C活化0.5h。置干燥器中备用，展开剂为氯仿-甲醇-浓氨水(8∶2∶0.3)，展距约12cm，取出晾干，将全板浸入硫酸乙醇溶液中，迅速取出吹干，于110°C烘5分钟，显色，见一紫红色斑点，见图1。 null样品的含量测定样品的含量测定　精密吸取供试品溶液6μl，对照品溶液2μl、5μl间隔点样于同一硅胶G薄层板上，按标准曲线项下操作，测其积分值，用外标两点法计算含量。测试结果如图3、图4。 null表4. 不同丹参的薄层展开比移值 表4. 不同丹参的薄层展开比移值 欧氏聚类分析欧氏聚类分析可以将七种丹参分为三大类：四川丹参为一类，河北、湖北和湖南的栽培丹参为一类，安徽、山西的栽培丹参和山西野生丹参为一类。图5. 不同丹参的欧氏聚类结果表5. 模糊模式识别结果表5. 模糊模式识别结果三 结论三 结论红外无损分析可以建立一种药材道地性检验以及品种识别的方法 硅胶柱层析，根据洗脱不同色带的淋洗液用量初步判定产地，然后通过不同特征色带红外吸收进一步鉴别 根据不同丹参薄层层析的色带情况以及Rf的不同，实现对丹参产地的分类鉴别