犬甲状腺素(T4)ELISA Kit

犬甲状腺素(T4)ELISA Kit 犬甲状腺素联免疫分析(T4) ELISA 试剂盒使用 本试剂盒仅供研究研究使用 产品编号:E0452c 预期应用 ELISA法定量测定犬血清、血浆、或其它相关液体中T4含量。 概述 T4是甲状腺分泌的二种主要激素之一，分子量777D，全部由甲状腺产生。其主要作用是促进合成和能量代谢，使基础代谢率和耗氧量增加，促进生长和发育。在血液循环中主要以与甲状腺结合蛋白质结合的形式存在。T4的合成和分泌主要受下丘脑和垂体的控制。是甲状腺功能主要诊断指标。 实验原理 本试剂盒应用竞争抑制酶标免疫分析法测定标本中T4水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，固相抗体与一定量的生物素标记的T4和非标记抗原(标本或标准品)进行竞争抑制反应，待测定的标本量越多，抗体与生物素标记的T4结合就越少，反之结合就多。最后再加入HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的T4呈负相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。 试剂盒组成 1( 酶联板:一块(96孔) 2( T4标准品:1ml/瓶×6瓶。其浓度依次为400 ng/mL，200 ng /mL ，100 ng /mL，50 ng /mL和 25ng /mL，0 ng/mL。 3( 检测溶液A:1×10 ml 4( 检测溶液B:1×10 ml 5( 底物溶液A:1×10 ml 6( 底物溶液B:1×10 ml 7( 浓洗涤液:1×30ml，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 8( 终止液:1×20ml。 标本的采集及保存 1(血清:标本请于室温放置2小时或4?过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20?保存，但应避免反复冻融。 2(血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8? C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20?保存，但应避免反复冻融。 注:标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 操作步骤 各试剂在使用前平衡至室温。 1( 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。除空白孔外，余孔分别加标准溶液或待测 样品50μl，以及检测溶液A 50μl，轻轻混匀，37?，60分钟。 2( 洗板3-5次，350μl/每孔，甩干。 3( 每孔加检测溶液 B 50μl，37?，30分钟，洗板3-5次，甩干。 4( 依序每孔加底物溶液A、B各50μl，37?避光显色15分钟。 5( 依序每孔加终止溶液50μl，终止反应。用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度 (OD值)。 注: 1( 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及2NHSO4。2测量时先用此孔调OD值至零。 2(为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内。 洗板方法 手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层 吸水纸，酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.4ml注入孔内，浸泡1-2分钟，根据需要，重复此过程数次。 自动洗板:如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。 特异性 本试剂盒可同时检测重组或天然的犬T4，且与其它相关蛋白无交叉反应。 检测范围: 0.15 ng /mL -1000 ng /mL 计算 以标准物的浓度为横坐标(对数坐标)，OD值为纵坐标(普通坐标)，在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项 1( 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。 2( 一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 3( 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。 4( 如标本中T4含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。 5( 底物请避光保存。 6(温育反应过程中请帖粘胶板 说明 1(试剂盒保存:-20?(较长时间不用时);2-8?(频繁使用时)。 2(有效期:6个月 3(浓洗涤液会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 4(中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。 5(不同批号试剂不能混用。