复方参芪五味咀嚼片的质量标准研究

复方参芪五味咀嚼片的质量研究 复方参芪五味咀嚼片的质量标准研究 安徽农业科学,JournalofAnhuiAgri.Sci.2011,39(11):6389—6391编辑刘群燕责任校对李岩 复方参芪五味咀嚼片的质量标准研究 李文韬,史国兵,孙学惠,何静,赵明宏(1.沈阳军区_总医院药剂科,辽宁沈阳110840;2.辽宁医学院,辽宁锦州121001) 摘要[目的]研究控制复方参芪五味咀嚼片的质量标准的方法.[方法]采用薄层色谱法鉴别复方参芪五味咀嚼片中的人参皂苷Rg, (人参),五味子醇甲(五味子)和黄芪甲苷(黄芪),麦冬药材;采用高效液相色谱法样品中人参皂苷Rg.,五味子醇甲和黄芪甲苷含量进 行测定.『结果]在选择的薄层色谱条件下,各样品斑点显色清晰;复方参芪五味咀嚼片中人参皂苷.,五味子醇甲和黄芪甲苷分别在 2.5,17.5,2.4,12.0,4.6,32.2g/ml的线性范围内,与峰面积线性关系良好.人参皂苷Rg,,五味子醇甲和黄芪甲苷的平均加样回 收率分别为98.1%,97.2%,97.7%,RSD值分别为2.O%,1.4%,1.2%.[结论]所建立的方法准确,重现性好,可以作为控制复方参芪 五味咀嚼片的质量标准的方法., 关键词复方参芪五味咀嚼片;质量标准;薄层色谱法;高效液相法 中图分类号S567文献标识码A文章编号O5l7—6611(2011)l1—06389—03 StudyonQualityStandardofCompoundShenqiWuweiChewableTablets LIWeu.taoetal(DepartmentofPharmacy.GeneralHospitalofShenyangMilitaryDistrict,S henyang,Liaoning1】0840) Abstract 『0biective]T0establishthequalitystandardofcompoundShenqiWuweichewabletablets. [Method]GinsenosideRgl(RADIXET RHIZOMAGINSENG).schizandrin(FRUCTUSSCHISANDRAECHINENSIS),astrag alosideIV(RADIXASTRAGALI)andRADIXLIRIO— PESwereidentifiedbythinlayerchromatography(TLC),andcontentsofginsenosideRgl,sc hizandrinandastragalosideIVweredetermined bvHPLC.『Resuhs]TheTLCspotswerefairlyclear.Intherangeof2.5—17.5,2.4一 l2.0and4.6—32.2ml,ginsenosideRgl,schi— zandrinandastragalosideIVshowedagood1inearrelationshiptopeakarea,respectively.The reeoveryratesofginsenosideRgl,schizandrin andastragalosideIVwere98.1%.97.2%and97.7%respectivelywithRSDvalueof2.0%,1.4 %and1.2%,individually.【Conclusionl Thismethodisaccurate.reproducibleandsensitive.whichcanbeusedforthequalitycontro1o fcompoundShenqiWuweichewabletablets. KeywordsCompoundShenqiWuweichewabletablets:Qualitystandard;TLC;HPLC 复方参芪五味咀嚼片由人参,黄芪,五味子,麦冬4味药 材的提取浸膏加辅料压片而成…,是益气养阴,补虚扶正的 中药制剂.该方由古方生脉饮演变而来,生脉饮的处方来源 于金元时期张元素所着的《医学启源》,人参,麦冬,五味子3 味药一补一滋一敛,配伍极为严谨,具有益气复脉,养阴生津 之功效..笔者为控制本品的质量,采用薄层色谱法对制 剂中人参皂苷Rg,五味子醇甲和黄芪甲苷,麦冬药材进行鉴 别,同时采用高效液相色谱法对咀嚼片中人参皂苷Rg,五味 子醇甲和黄芪甲苷进行了含量测定. 1与方法 1.1材料 1.1.1供试药材.五味子,人参,黄芪,麦冬,均购自安徽省 健药业. 1.1.2主要试剂.五味子醇甲对照品(批号:110857— 200709),人参皂苷.对照品(批号:110703—200726),黄芪 甲苷对照品(批号:l10781—200613),均购自中国药品生物制 品检定所;乙腈,甲醇,均为市售色谱纯;其他试剂均为市售 纯. 1.1.3主要仪器.HPLC专用超声清洗仪,由沈阳医疗设备 厂生产;AEL一160电子分析天平,南日本互惠交易株式会社 生产;Waters510HPLC泵,Waters484紫外检测器,均由美国 Waters公司生产;Sedex75蒸发光散射检测器,伊利特 P230HPLC泵,均由大连依利特分析仪器有限公司生产. 1.2方法 1.2.1薄层定性鉴别. 1.2.1.1人参的鉴别.取样品20片,研细,称取20.0g,加 基金项目 作者简介 收稿日期 "十一五"国家科技重大专项(2009zxJo9oo44)74). 李文韬(1981一),男,辽宁凌源人,硕士研究生,研究方向 药剂学,E-mail:lywtlee@sina.coln.$通讯作者,主任药师 博士,E-mail:sysgb@126con. 2O11.0l—l4 甲醇100ml,回流1h,放冷,滤过,用少量甲醇洗残渣3次,合 并滤液,回收溶剂,加40m1水溶解,乙醚萃取2次,每次4O n1l,然后用水饱和正丁醇萃取2次,每次5Oml.合并正丁醇 层,再用氨试液洗2次,每次40mI,正丁醇层回收溶剂至干. 残渣用1Om1水溶解,移至D101大孔吸附树脂柱(内径1.5 Cnl,长12.0em,经过4%NaOH预处理),用50m1水洗脱,弃 去水液,然后用30ml4o%乙醇洗脱,弃去洗脱液,续用70% 乙醇洗脱,收集洗脱液,浓缩至1ml,作为供试品溶液.另取 按处方配比未加人参的阴性对照,同法制成阴性对照液.取 人参皂苷Rh,人参皂苷Re及人参皂苷Rg.对照品,加甲醇 制成浓度为2.0OOmg/ml的混合溶液,作为对照品溶液.吸 取上述3种溶液各l0l点于同一硅胶G板上,以氯仿一乙 酸乙酯一甲醇一水(15:40:22:10,,下同)的下层溶液为展 开剂,展开,晾干,喷10%硫酸一乙醇液,在105?下使斑点 清晰. 1.2.1.2五味子的鉴别.取样品20片,研碎,称取10.0g, 加入80ml氯仿回流30min,滤过,浓缩至2ml,作为供试品 溶液.另取按处方配比未加五昧子的阴性对照,同法制成阴 性对照液.取五味子醇甲对照品,加氯仿制成浓度为1.000 mg/ml的溶液,作为对照品溶液.分别吸取上述3种溶液各 1Ol点于同一硅胶GF,薄层板上,以石油醚(30,60?)一 甲酸乙酯一甲酸(15:5:1)的上层溶液为展开剂展开,晾干,在 紫外254nm下检视. 1.2.1.3黄芪的鉴别.取样品2O片,研细,称取12.0g.加 甲醇100ml,超声处理30rain,滤过,滤液回收溶剂至于,残渣 加20ml水溶解,用乙醚萃取2次,每次3Oml,弃去乙醚液, 用饱和正丁醇萃取3次,每次20ml,合并正丁醇液,用氨试 液洗涤2次,每次15m1.取正丁醇液回收溶剂至干,残渣加 1ml甲醇溶解,作为供试品溶液.另取按处方配比未加黄芪 的阴性对照,制成阴性对照液.取黄芪甲苷对照品加甲醇制 6390安徽农业科学2011盎 成浓度为1.000mg/ml的溶液,作为对照品溶液.按照薄层 色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验,吸取上述3 种溶液各l0点于同一硅胶G板上,以氯仿一甲醇一水 (13:6:2)的下层溶液为展开剂展开,晾干,喷10%硫酸一乙 醇液,在105C下使斑点清晰,在紫外365nm下检视. 1.2.1.4麦冬的鉴别.取咀嚼片20片,研细,称取20.0g, 加30Inl水,3ITIl盐酸,煮沸2min,滤过,用30ml氯仿萃取, 回收溶剂至干,再加入1ml氯仿溶解,作为供试品溶液.取 按处方配比未加黄芪的阴性对照,同法制成阴性对照液.另 取药材6.0g,同法制得对照品溶液.,吸取上述3种溶液各 10点于硅胶G板上,以氯仿一甲醇(20:1)为展开剂展开, 晾干,喷10%硫酸一乙醇液,在105oC下使斑点清晰. 1.2.2人参皂苷Rg.的含量测定. 1.2.2.1HPLC色谱条件.DikmaDiamonsil.c】8柱(200.0 mmx4.6mm,5m);柱温为室温;流动相为乙腈一水 (20:80,V/V);进样量为20l;流速为1.0ml/min. 1.2.2.2供试品溶液,阴性对照品溶液和人参皂苷Rg.对 照品溶液的制备.取样品20片,研细,约称取20.0g,加甲醇 100ml,回流1h,放冷,滤过,用少量甲醇洗残渣3次,合并滤 液,蒸干.残渣加40ml水溶解,乙醚萃取2次,每次40ml, --- 用水饱和正丁醇萃取2次,每次40ml,合并正丁醇层,氨试 液洗2次,每次40rnl,用正丁醇层蒸干溶剂.残渣加10mI 水溶解,移至DIO1大孔吸附树脂柱(内径1.5em,长12.0 em,经过4%NaOH预处理),以水50?ll洗脱,弃去水液,再 用30?d4o%乙醇洗脱,弃去洗脱液,用70%乙醇洗脱,收集 洗脱液,回收溶剂,用l0rnl甲醇定容,作为供试品溶液.取 按处方配比未加黄芪的阴性对照,同法制成阴性对照液.另 精密称取人参皂苷Rg,对照品适量,置于容量瓶中,用甲醇 制成浓度为0.225mg/ml的对照品溶液. 1.2.2.3阴性干扰试验.按照常规制备缺黄芪的阴性对照 品样品溶液,进行检测,在与黄芪甲苷对照品色谱峰相应的 位置上,供试品溶液有相同保留时间的色谱峰,而黄芪阴性 液在此位置上无色谱峰. 1.2.2.4样品中人参皂苷Rg含量的测定.取3批样品,按 "1.2.2.2"中供试品溶液制备方法制备,进样,测定峰面积, 计算含量., 1.2.3五味子醇甲的含量测定. 1.2.3.1色谱条件.色谱柱为DikmaDiamonsil—C.柱(200.0mlnX4.6mm,5m);柱温为室温;流动相为甲醇一 .水(57.5:42.5,V/V);流速为1.0ml/min,进样量为20l;检 测波长为250rim. 1.2.3.2供试品溶液,阴性溶液,阴性对照品溶液和五味子 醇甲对照品溶液的制备.取样品20片,研细,约称取5.0g, 加入100ml乙酸乙酯回流30min,放冷,滤过.用30?l1乙酸 乙酯分次洗涤滤渣及容器.合并滤液,蒸干,残渣用10ml甲 醇溶解并定容,作为供试品溶液.取按处方配比未加五味子 的阴性对照,同法制成阴性对照液.另精密称取五味子醇甲 对照品适量,置容量瓶中,加甲醇制成浓度为0.300mg/rnl 对照品溶液.按处方制备不含五味子药材的咀嚼片,按供试 品溶液制备方法制成阴性液,备用. 1.2.3.3样品中五味子醇甲含量的测定.取3批样品,分别 按供试品溶液制备方法制备,进样,测定峰面积,计算含量. 1.2.4黄芪甲苷的含量测定. 1.2.4.1色谱条件.色谱柱为DikmaDiamonsil.C,.(5n, 250.0mm×4.6/nlqo/);柱温为室温;流动相为乙腈一水 (31:69,V/V);流速为1.0ml/min;进样量为20l. 1.2.4.2供试品溶液,阴性对照品溶液和黄芪甲苷对照品 溶液的制备.取样品2O片,研细,约称取20g,置于索氏提取 器中,加甲醇40ml,冷浸过夜,然后加甲醇适量,加热回流4 h,提取液回收溶剂并浓缩至干.残渣加水20rnl微热使溶 解,再用水饱和正丁醇萃取4次,每次30ml,合并正丁醇液, 用氨试液洗涤2次,每次30ml,弃去氨试液,正丁醇液蒸干 残渣加l0ml甲醇溶解并定容,作为供试品溶液.另取按处 方配比未加黄芪的阴性对照,同法制成阴性对照液.精密称 取黄芪甲苷对照品适量,置于容量瓶中,加甲醇制成浓度为 0.280mg/ml的对照品溶液. 1.2.4.3阴性干扰试验.照常规制备缺黄芪的阴性对照品 样品溶液,同法检测,在与黄芪甲苷对照品色谱峰相应的位 置上,供试品溶液有相同保留时间的色谱峰,而黄芪阴性液 在此位置上无色谱峰. 1.2.4.4样品中五味子醇甲含量的测定.取3批样品,分别 按"1.2.4.2"中供试品溶液制备方法制备,进样,测定峰面 积,计算五味子醇甲含量. 1.2.5方法学考察. 1.2.5.1线性关系考察.分别精密吸取浓度为1.520 mg/ml的人参皂苷Rg,对照品溶液2,4,6,8,10,12,14,浓 度为0.800mg/ml的五味子醇甲对照品溶液3,5,7,9,11,13, 15LLl,浓度为2.300mg/ml的黄芪甲苷对照品溶液2…466, 10,l2,14l,分别进样分析,以各对照品溶液的浓度(C)为 横坐标,以色谱峰面积()为纵坐标,绘制标准曲线,考察各 对照品的线性关系. 1.2.5.2精密度.精密吸取同一供试品溶液,按供试品溶 液制备方法制备,连续进样6次,分别计算人参皂苷Rg.,五 味子醇甲,黄芪甲苷峰面积相对标准偏差值(RSD). 1.2.5.3重复性.取同一批号样品6份,分别按供试品溶 液制备方法制备,分别计算人参皂苷Rgi,五味子醇甲,黄芪 甲苷峰面积RSD值. 1.2.5.4稳定性.取各供试品溶液,分别于配制后第0,2, 4,6,8h进样,分别计算人参皂苷Rg,五味子醇甲,黄芪甲苷 峰面积RSD值. 1.2.5.5回收率试验.精密称取人参皂苷Rg含量为0.18 mg/g的参芪五味咀嚼片(批号:091025)3份,每份为各10.0 g,分别置于具塞锥形瓶中,分别精密加入人参皂苷Rg对照 品1.08,0.90,0.72mg;精密称取五味子醇甲含量为0.64 mg/g的参芪五味咀嚼片(批号:091025)3份,各2.5g,分别 置于具塞锥形瓶中,分别精密加入五味子醇甲对照品0.38, 0.32,0.26mg;精密称取黄芪甲苷含量为0.48mg/g的参芪 五味咀嚼片(批号:091025)3份,各10.0g,分别置于具塞锥 形瓶中,精密加入黄芪甲苷对照品0.29,0.24,0.19mg.分 别按各供试品溶液制备方法制备,检测,计算各成分平均回 39卷11期李文韬等复方参芪五味咀嚼片的质量标准研究6391 收率及RSD值. 2结果与分析 2.1各成分薄层鉴别结果各成分分别在对照品相应的 位置上显相同颜色的斑点,阴性对照无干扰. 2.2方法学考察结果 2.2.1线性关系考察.计算得人参皂苷Rg回归方程为:4 =293853C一23027,r=0.9995;五味子醇甲的回归方程为: A=3535008C+1571264,r=0.9996;计算得黄芪甲苷回归 方程为:A=1.0106C一5.6344,r=0.9997.结果明,人参 皂苷Rg在2.5,17.5ml范围内,五味子醇甲在2.4, 12.0ml范围内,黄芪甲苷在4.6,32.2g/ml范围内,线 性关系良好. 2.2.2精密度.计算得人参皂苷Rg.,五味子醇甲,黄芪甲 苷峰面积RSD值分别为2.0%,1.6%,2.0%,表明仪器精密 度良好. 2.2.3重现性.计算得人参皂苷Rg,五味子醇甲,黄芪甲 苷峰面积RSD值分别为1.8%,1.6%,1.9%,表明方法的重 现性较好. 2.2.4稳定性.计算得人参皂苷Rg,五味子醇甲,黄芪甲 苷峰面积RSD值分别为1.8%,1.6%,1.8%,表明供试品溶 液8h内稳定. 2.2.5回收率试验.计算得人参皂苷Rg,五味子醇甲,黄 芪甲苷的平均回收率分别为97.33%,97.2%,97.7%,RSD 值分别为1.3%,1.4%,1.2%. 2.3各成分含量测定结果结果表明,复方丹参五昧咀嚼 片中人参皂苷Rg含量分别为0.181,0.182,0.180mg;五 味子醇甲含量分别为0.650,0.660,0.620mg/g;黄芪甲苷含 量分别为0.470,0.480,0.480mg/g. 3结论与讨论 人参皂苷Rg,五味子醇甲,黄芪甲苷,麦冬药材各薄层 色谱中供试品分别在对照品相应的位置上,显相同颜色的斑 点,阴性对照无干扰.. 试验采用的人参皂苷Rg,五味子醇甲,黄芪甲苷3种成 分含量测定的方法准确,重现性好,可以作为控制复方参芪 五味咀嚼片的质量标准的方法. 试验中薄层鉴别参照文献[4—10],从而得到了理想的 斑点效果测定人参皂苷Rg含量时分别考察了乙腈一水配 比为18:82,20:80,22:78,25:75,30:70为流动相时对分离结果 (上接第6388页) 参考文献 [1]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志:28[M].北京:科学出 版社,1980. 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