检测血清和精液中HBV-DNA的临床意义

检测血清和精液中HBV-DNA的临床意义 临床医学论文-检测血清和精液中HBV-DNA的临床意义 作者:石龙 石铭 韩博 许琳婧 【关键词】 精液 【摘要】 目的 了解男性感染乙型肝炎病毒:HBV:后,精液中是否携带HBV经受精卵传给子代形成父婴传播。 采用核酸扩增:PCR:技术,检测血清和精液中的HBV-DNA。 结果 血清HBV标志物HBsAg、HBeAg、抗-HBc皆为阳性者,无论是血清或是精液均能100%检测出HBV-DNA。HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性者,血清和精液中HBV-DNA阳性检出率为53.3%和33.3%。89例血清和精液中HBV-DNA阳性检出率分别为49.44%和40.45%,P>0.05,差异无显著性,不能说明血清与精液HBV-DNA阳性检出率不同。 结论 如果说HBV感染的传播途径除主要的血液暴露、性接触、日常生活接触和母婴传播外,经精液传播HBV也极具潜在的危险性,则通过父亲将HBV传染给子女成为可能。因此,男性更应该积极参与负责任的生育、性和生殖行为,避免给家庭和子女带来不幸。 关键词 精液 垂直传播 乙型肝炎病毒 Clinical significance of HBV-DNA in the serum and semen 【Abstract】 Objective To study the male infected by hepatitis B virus :HBV:,whether the spermoblast takes the HBV or not,was passed by fertilized egg the filial generation,the formation father with baby's Hybricomb diagnostic kit for transmission.Meth-ods The technique PCR- hepatitis B virus was used to detect HBV-DNA in the serum and semen.Results The serum HBsAg,HBeAg,anti-HBc all were positive.HBV-DNA of the serum anti-HBe,the anti-HBc were and semen positive rates were100%.HBsAg, positive.HBV-DNA of the serum and semen pos-itive rate were53.3%and33.3%.Detection of HBV-DNA in the serum and semen positive rate were49.44%and40.45%did not show the difference:P>0.05:.Conclusion If the transmission of the HBV infection mainly is a blood to expose,sex contact, the daily life gets in touch with vertical.By semen transmitted the HBV has the latent risk very much.The father passing to the HBV infected to the male even should participate to be the children possibly.Therefore, responsible actively of grow,sexual and generation.Avoid bringing misery for family and son and daughter. Key words semen vertical transmission hepatitis B virus 在我国乙型肝炎病毒:HBV:感染的传播途径主要是血液和体液传播,而垂直 传播也在HBV感染的过程中起着十分重要的作用。从传统意义上讲,有关HBV的 垂直传播问,人们往往将注意力偏重于母婴传播上,却忽视了男性参与生殖健 康和性行为方面所起的作用。事实上在日常生活与性接触中,一直缺乏足够的证据,证实HBV是否在父婴间一定没有传染性。因此,潜在的父婴传播HBV的危险性也是不可忽视的途径之一。为了解HBV在父婴间传播的可能性,我们采用核酸 DNA,以加深对父婴间传播的认识,扩增:PCR:技术检测男性血清和精液中的HBV- 现将检测结果如下。 1 资料与方法 1.1 一般资料 标本来源于2003年8月,2005年2月本院门诊,按照自己的意愿,要求做生殖健康检查的男性89例,年龄23,39岁,平均:25.5?2.3:岁。 1.2 标本采集 1.2.1 血清标本 用一次性真空采血器,采集静脉血5ml,置于无菌试管中离心分离血清。 1.2.2 精液标本 在医生指导下用避孕套采集,置于无菌试管中。采集到的所有标本放置-20?保存待检。 1.3 方法 1.3.1 血清HBV标志物检测 采用山东潍坊三维生物集团有限公司酶联免疫试剂盒。 1.3.2 HBV-DNA检测 采用上海克隆生物高技术有限公司HBV核酸扩增:PCR: 杂交梳检测试剂盒。仪器为美国Perkin Elmer480基因扩增仪。 1.3.3 HBV-DNA检测原理 采用聚乙二醇:PEG:沉淀法浓缩标本中的乙型肝炎 ,用生物素标记引物对HBV-DNA进行PCR扩增。将扩病毒颗粒,碱变性法提取DNA 增产物与固定在梳齿上的探针进行反向杂交。探针捕获的生物素和碱性磷酸酶标记的链霉亲和素:SA-AP:特异性结合后,碱性磷酸酶催化底物显色,在梳齿上显出蓝色线条,判断其乙型肝炎病毒核酸的存在。检测灵敏度为420拷贝/ml:10fg/ml:。试剂中使用dUTP和UNG酶,能够有效消除扩增产物污染对检测结果的干扰。 1.3.4 统计学方法 对不同的检测资料类型,采用样本构成比的比较。两组间差异采用配对计数资料比较。 2 结果 2.1 血清HBV标志物与HBV-DNA检测结果 血清HBV标志物检测结果显示:HBsAg、HBeAg、抗-HBc:+:27例,占所检测标本的30.3%。HBsAg、抗-HBe、抗-HBc:+:15例,占16.9%。抗-HBs、抗-HBe、抗-HBc:+:16例,占18.0%。 单项抗-HBc:+:10例,占11.2%。血清HBV标志物皆为阴性21例,占23.6%。血清HBV-DNA检测结果显示:27例HBsAg、HBeAg、抗-HBc:+:,HBV-DNA:+:检出 。15例HBsAg、抗-HBe、抗-HBc:+:,HBV-DNA:+:8例,检出率53.3%。率100% 16例抗-HBs、抗-HBe、抗-HBc:+:,HBV-DNA:+:5例,检出率31.3%。单一抗-HBc:+:10例,HBV-DNA:+:3例,检出率30.0%。21例HBV标志物均为:-:, :+:1例,检出率4.8%。见表1。 HBV-DNA 2.2 血清HBV标志物与精液HBV-DNA检测结果 27例 HBsAg、HBeAg、抗-HBc:+:,精液HBV-DNA均为阳性。15例HBsAg、抗-HBe、抗-HBc:+:,精液HBV-DNA:+:5例,检出率为33.3%。三抗体阳性,单一抗-HBc阳性者,精液HBV-DNA检出率分别为18.8%和10.0%。血清HBV标志物为阴性者,精液HBV-DNA皆为阴性,见表2。 2.3 血清与精液HBV-DNA检测结果 89例标本中,血清HBV-DNA:+:44例,精液HBV-DNA:+:36例,检出率分别为49.4%和40.4%。经配对计数资料比较:χ 2 =1.453,P>0.05:,差异无显著性,不能说明血清和精液HBV-DNA检测结果不同。表明血清中能够检测出HBV-DNA,精液中就有HBV-DNA存在的可能性,见表3。 表1 血清HBV标志物与HBV-DNA阳性检出率:略: 表2 血清HBV标志物与精液HBV-DNA阳性检出率:略: 表3 血清与精液HBV-DNA检测结果相关性比较:略: 3 讨论 我国是HBV感染的高流行区,在1亿多人口中有慢性感染。总的说来,患病人数南方多于北方,农村多于城市 ,1, 。HBV总感染率男女相近,男性感染HBV后容易发病,且转为慢性肝炎,而女性则以病毒携带状态居多。所以,育龄妇女携带HBV,可经妊娠期的垂直传播,或以后的水平传播传染给婴儿,形成母婴传播 ,2, 。而男性感染乙型肝炎后,受染的精液是否携带HBV通过受精卵增殖复制、分裂发育、着床生长并将HBV传给子代,知之甚少。为此,我们采用PCR技术检测男性血清和精液中的HBV-DNA,试图揭示父婴传播问题。 对于HBV感染的实验室诊断,最普及和经济的方法是酶联免疫法:ELISA: ,3, 。该方法虽简单易行,但对于低水平HBV感染:国产试剂盒的灵敏性仅能检出ng/ml水平: ,2, ,隐匿性HBV感染者难以检出,或是反应性很弱的试剂配体,较易出现假阳性,有时出现一些不常见或不典型的结果,难以做出合理解释或导致错误解释。自从PCR技术应用于临床以来,由于PCR技术所具有的高灵敏性、特异性和可重复性,操作简便,整个标本处理、检测过程4,5h内即可完成,可检出1,10fg/ml的HBV-DNA。HBsAg:-:的HBV感染已得到更广泛的鉴定,其检测结果常超出过去人们长期形成的传统概念,十分适合于临床应用 ,4, 。 为了保证每一检测结果的准确性,在PCR检测技术引入人感染性病原体诊断的初始阶段,本实验室已获得了卫生部准许开展PCR检测工作的资格认证。并在长期的工作中积累了一些PCR检测技术方面的经验,建立起了一套较完备的质量控制机制和污染预警体系,以保障实验结果真实可信。 、抗-HBc皆为阳性者,无 本文检测结果证实,血清HBV标志物HBsAg、HBeAg 论是血清或是精液均能100%检测出HBV-DNA。HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性者,在血清和精液中分别检出HBV-DNA53.3%和33.3%为阳性。结果提示,如果说HBV感染的传播途径除主要的血液暴露、性接触、日常生活接触和母婴间传播外 ,5, ,经精液传播HBV也极具潜在的危险性,则通过父源将HBV传播给婴儿成为可能。因此,有HBV感染史的家庭夫妻双方本着对后代负责的态度,应该高度重视生殖前检查,尽可能精确地鉴定出是否有HBV感染,而不是传统观念中的以女性检查为主,更应强调男性应分担的,积极参与负责任的生育、性和生殖行为,避免给家庭和子女带来不幸。 参考文献 1 陈崇柏.我国病毒性乙型肝炎的流行特征及预防.中国公共卫生,1997,6-8. 2 陈素良,孙永德,谢永富,等.人群HBV围产期传播和水平传播危险性的比较研究.现代预防医学,1995,22:224-225. 3 陶义训.免疫学检验基础.北京:人民卫生出版社,1999,84. 4 骆抗先.乙型肝炎基础和临床.北京:人民卫生出版社,1997,342-344. 性乱人群乙型肝炎和丙型肝炎病毒感染的血 5 张冠群,陈思东,连建华,等. 清流行病学研究.中华流行病学杂志,1995,16:213-215.