【doc】贴梗海棠组培快繁技术研究

【doc】贴梗海棠组培快繁技术研究 贴梗海棠组培快繁技术研究 ? 生物技术?北方园艺2008(8):186,187 贴梗海棠组培快繁技术研究 陈罡,叶景丰,马冬菁,潘文利,范俊岗 (辽宁省林业科学研究院,辽宁沈阳110032) 摘要:以贴梗海棠带芽茎段为材料,研究了贴梗海棠组织培养和快速繁殖的适宜条件,结 果表明:茎尖和半木质化茎段在MS+6一BA1mg/L+N从0.2mg/L中的诱导率均在90以上; 筛选出的最佳继代增殖培养基为:MS+6一BA0.5rag/L+N从0.5mg/L,增殖系数为7.2;生根 培养基为:1/2MS+IBA0.3mg/L+N从0.2mg/L,生根率达93. 关键词:贴梗海棠;组织培养;快速繁殖 中图分类号:S685.99文献标识码:A文章编号:1001--0009(2008)08—0186—02 贴梗海棠(Chaenomelesspeciosa(sweet)Nakai)别名 木梨,铁角梨,皱皮木瓜,蔷薇科木瓜属,落叶灌木,原产 于我国西南地区,喜阳光,抗逆性强,耐寒,--20?低温越 冬无冻害,在较贫瘠与盐渍土壤都能生长.贴梗海棠花 色艳丽芳香,可以广泛用于城乡绿化,庭院美化,既有生 态效益又有经济效益,在生态建设中具有广阔的市场前 景.另外,其果实为常用中药,有舒筋活络,驱风止痛之 功效,是一种优良的具有多用途的园林绿化植物. 目前,贴梗海棠常用扦插,分株,压条等方法进行繁 殖,为了突破繁殖材料数量上的限制,加快推广速度,近 年来开展了贴梗海棠组织培养快繁研究,已取得一定成 果,并建立了该树种的快繁体系,为该品种的开发推广 奠定了技术基础. 1材料与方法 1.1试验材料 辽宁省林业科学研究院示范基地种植的2,3a生 的贴梗海棠移栽至室内培养2,3个月,剪取幼嫩枝条 作为外植体. 1.2试验方法 1.2.1外植体消毒将外植体减掉叶片,用清水冲洗 2,3h,将其切成5,7cm的茎段,再用蒸馏水冲洗2,3 次后转至无菌室.在超净工作台上将切好的茎段用 70乙醇浸泡30s,无菌水冲洗3次,然后用0.1升汞 浸泡6,8min,再用无菌水冲洗5次以上,无菌滤纸吸干 水分后,切成1.0,2.0CITI的单芽茎段备用. 1.2.2培养基诱导培养为MS十6一BA1mg/I十NAA 第一作者简介:陈罡(1980一),男,硕士,助理工程师,主要从事植物 生物技术研究工作.E-mail:~gang1625@163.com. 基金项目:沈阳市科技局农业应用技术攻关资助项目(1063227— 3-00). 收稿日期:2008一O2—21 186 0.2mg/L;继代选取MS,1/2MS,B5,Nitsch4种基本培 养基,均附加6-BA0.5rag/L和NAA0.2rag/L,培养 30d后统计各培养基中新芽个数,芽均高,筛选最适合 的培养基;以最适合的继代培养基为基础,分别添加6一 BA(0.1,0.5,l_0mg/L)和N从(0.1,0.3,0.5rag/L)共 9个处理,各接种30个新芽茎段,培养30d后统计增殖 系数.生根培养基以1/2MS为基础,添加?(0.1,0. 3,0.5mg/L)和N从(0.1,0.2,0.3mg/L)共9个处理, 30d后观察生根情况,统计生根率.上述培养基加蔗糖 30L,琼脂7g/L,pH值5.8,培养温度(25?2).C,光照 12h/d,光强2000Ix. 2结果与分析 2.1芽的诱导分化 在诱导培养基上接种10d后芽开始萌发,20d左右 茎尖变绿,伸长生长,30d后芽可长至3,4cm高,同时 基部长出许多小不定芽,形成芽丛.对不同取材部位的 诱导情况进行了统计,茎尖和半木质化茎段的诱导率均 在909/6以上,明显高于木质化茎段(见表1). 表l不同取材部位对贴梗海棠芽诱导分化的影响 2.2不同培养基对芽继代增殖的影响 选择的4种继代培养基中,在1/2MS,135,Nitsch中 的继代增殖培养均不理想.接种1/2MS苗芽长势弱, 容易萎蔫死亡;在B5培养基中生长速度相对较慢,苗 矮,节间距小;接种Nitsch中苗矮壮,叶膨大生长,丛生 芽少;MS培养基在芽生长和芽增殖上均优于以上3种 培养基(见表2). 2.3不同激素浓度对芽继代增殖的影响 由表3可以看出,NAA对芽的生长有一定的影响. 北方园艺2oo8(8):186,187?生物技术? 6-BA浓度一定时,随着NAA浓度的增加,继代苗的平 均株高有所增加.芽的增殖受6-BA浓度的影响较大, 随着6-BA浓度的增加,继代苗的增殖系数明显增大;当 6-BA浓度达到1.0mg/L时,可观察到其茎段基部有愈 伤组织产生,虽然芽数增多,但茎芽伸长生长有所减慢, 且芽质量下降,玻璃化苗增多.综合考虑,当6-BA浓度 为0.5mg/L,NAA浓度为0.5mg/L时增殖效果最好, 增殖系数达到7.2,芽高度适中,健壮. 表2不同培养基对贴梗海棠芽继代增殖的影响 表4不同激素浓度对贴梗海棠苗生根的影响 NAA/mg?L-1生根率/平均根长/cm平均根数 2.4不同激素浓度对贴梗海棠苗生根的影响 将继代增殖培养生成的丛生芽进行切割,保留基部 1.5cm切断,接种到生根培养基上,15d左右,茎段基部 产生根原基,30d后长出4,5条白色嫩根.由表4可以 看出,生根培养基以1/2MS十IBA0.3mg/I十NAA 0.2mg/L最好,长出的根粗壮,且苗长势好. 3讨论 在对外植体进行消毒时,发现将室外生长的贴梗海 棠移栽至室内培养一段时间后,再对其进行外植体消毒 处理,诱导培养过程中组培苗的污染率明显降低;在对 外植体进行芽诱导时,以茎尖和半木质化茎段的诱导效 果最好,诱导率均在90%以上,而且易消毒,接种后污染 率低,因此在取材时,尽量取幼嫩的茎尖和半木质化 茎段. 在继代增殖培养过程中发现,当培养温度超过28? 时,容易产生玻璃化现象,温度超过3O.C时,玻璃化现象 可达40.出现玻璃化的组培苗不能将其进行扩繁或 生根.当产生玻璃化时,根据不同情况,可采用暗培养, 加大培养温度的昼夜温差,降低激素浓度等方法进行玻 璃化苗转化,然后再进行继代培养. 在生根培养前,先在MS,培养基中培养20d左右再 转入生根培养中,可以提高生根率.原因可能是组培苗 在继代培养时体内已经积累一定浓度的生长素,直接接 入含有一定浓度生长素的生根培养基中,根原始体形成 后,较高浓度的生长素的继续存在,不利于幼根的生长 发育. 对于污染不严重的组培苗,可将材料上部未感菌的 部分和叶片剪下,用70酒精和0.19/6升汞对其进行重 新消毒后,再进行生根培养,尽可能减少损失. StudiesonTissueCultureandRapidPropagationTechniqueof Chaenomelesspeciosa(sweet)Nakai CHENGang,YEJing-feng,MADong~ing,PANWen-ti,FANJun-gang (LiaoningResearchAcademyofForestrySciences,Shenyang,Liaoning110032,China) Abstract:ByusingstemswithbudsofChaenomdesspeciosa(sweet)Nakaiasmaterials,theexperimentwasmadetofind outthebestcultureprocessandproperculturemedium.Thetechnicalsystemoftissuecultureforrapidpropagationwas established.Theresultswereasfollows:Therateofinitiationofshootapexandhalf— lignificationstemsinMS十6-BA lmg/L十NAA0.2mg/Lwereallover90;Theoptima1subculturemediumwasMS十6一 BA0.5mg/L十NAA 0.5mg/L,themultiplicationrateofshootclumpscouldbeupto7.2:Theproperrootingmediumwas1/2MS十IBA 0.3mg/L十NAA0.2mg/L,andtherootingratecouldbeupto93. Keywords:Chae71omeZesspeciosa(sweet)Nakai;Tissueculture;Rapidpropagation 晕 一一 一一一?????????一一,,??一,一 4917247O2 1122122 %化?跗g;舌;跎吣鸺