普洱茶生茶抗疲劳作用研究

2010年 23卷3期 V01．23 No．3 西 南 农 业 学 报 Southwest China Journal of Agricultural Sciences 801 文章编号：1001—4829(2010)03—0801—04 普洱茶生茶抗疲劳作用研究 黄业伟，邵宛芳，冷丽影，张冬英 (云南农业大学龙润普洱茶学院，云南 昆明 650201) 摘 要：研究普洱茶生茶对小鼠的抗疲劳作用，为普洱茶保健功效研究提供一定的理论依据。将8O只昆明种小鼠(雌雄各半，体 重25±4 g)随机分为4组(2O只／组)，即空白对照组和普洱茶生茶高、中、低剂量组，分别灌胃0．9％生理盐水和2．0 g／kg．bw、1．0 g／kg．bw、0．5 g／kg．bw的普洱茶生茶。按照小鼠体重给予不同体积的受试物，自由摄食与饮水，连续灌胃30 d，测定小鼠力竭游泳 时间。采血、分离血清并取组织样，测定血乳酸(BLA)、血尿素氮(BUN)、血乳酸脱氢酶(LDH)及肝糖元(LG)、肌糖元(MG)指标。 结果显示：与空白对照组相比，普洱茶生茶中、低剂量组显著延长了小鼠游泳时间(P<0．01)，尤以中剂量组作用明显，增加率达 5O．68％ ；显著降低 了运动后血乳酸(P<0．O1)和血尿素氮(P<0．05)水平，提高了血清乳酸脱氢酶活力(P<0．O1)，肌糖元和肝 糖元的储备量的增加达极显著水平(P<0．01)。因此，普洱茶生茶具有良好的抗疲劳生理活性，以中剂量组作用最明显。 关键词：普洱茶生茶；抗疲劳 中图分类号：s571．1 文献标识码：A Research of Anti-fatigue Effect of Unfermented Pu-erh Tea HUANG Ye-wei，SHAO Wan·fang ，LENG Li—ying，ZHANG Dong-ying’ (College of Longrun Pu—erh Tea，Yunnan A cultural University，Yunnan Kunming 650201，China) Abstract：The anti-fatigue effect of unfermented Pu·-crh tea on mice was studied to provide rome theories on the functionary mechan ism of all- ferm ented Pu—erh tea．80 mice were randomly assigned to blank control group，high dose。middle dose and low dose experimental groups ac- cording to their body weishts．Normal saline of0．9％ was administered in blank control group．Unfermented Pu-erh tea w衄 administered in experimental groupswith doses of2．0，1．0，0．5吕／kg．bw，respectively．Each group wa8 given 88nle food and water．After 30 days，the swimming test were carried out and the death time Was observed and recorded．After the mice swimming for a period，the mice blood was taken for determining blood lactic—acid，blood urea nitrogen(BUN)and lactate dehydrogcnase．The liver and muscle Was taken for detcrmi— ning liver and mu$cle glycogen．The results showed 88 follows：compared with blank control group。Unferm ented Pu·erh tea of middle dose andlow dose experimental groups Can significantly prolong swimmingtime(P(O．O1)，reducelactic·acid(P<0．O1)and bloodilrea nitrogen level(P<0．05)，increase lactate dehydrogenase level(P<0．01)and increase liver glycogen and muscle glycogen storage(P<0．O1)after swi mming．So，Unfermented Pu．erh tea CRrl alleviate physical fatigue of mice，and the middle dose experimental groups had significant anti· fatigu e effect． Key words：Unferm ented Pu--erh；Anti-fatigue 云南是世界茶树原产地之一，历史悠久 川。普 洱茶是云南特有的茶，其独特的内含成分，具有它茶 类所无法比拟的功效。 如今，人的工作、生活和学习压力越来越大，持 久或过度劳累后会造成身体不适及工作效率减退， 收稿日期：2009一l1—2o 基金项目：国家科技支撑课题“普洱茶功能成分与保健功效的 研究”(2007BAD58B04) 作者简介：黄业伟(1985一)，男，在读硕士。研究方向：茶叶生化 分析与功效，E—mail：Iiehuangyewci100@163．corn，·为通讯作 者，E-mail：zhangdongying365@yahoo．COi~'I．cn o 即疲劳感。长期以来，众多学者期望能寻找到一种 安全、有效、无毒副作用的良方来有效延缓疲劳发生 和加速消除疲劳。随着现代科学发展，新分析手段 的应用，普洱茶的与众不同，广泛引起了国内外专 家、学者的特别关注。到目前为止，有关普洱茶在降 血脂、健齿护牙、抗氧化、抗衰老及抗癌防突变等方 面，已开展了较广泛、深入的保健功效研究。大量研 究明普洱茶具有显著的降脂抑菌、降糖降压、抗辐 射、改善心血管疾病等多种保健功效 J。有关茶 叶抗疲劳方面的研究有杨志博、松井阳吉、林智等对 西 南 农 业 学 报 23卷 乌龙茶抗疲劳的研究 J以及马森、陈培珍、游玉琼 等对武夷岩茶抗疲劳抗氧化作用的研究 J，而关于 普洱茶的抗疲劳作用研究鲜有报道。普洱茶生茶是 由没有经过后发酵工艺的云南晒青毛茶压制而成 的，故其更接近绿茶类产品 J。浙江大学茶学系学 者研究显示茶多酚清除活性氧 自由基效率高达 90 ％以上，显著优于 VitC和 VitE。13本学者的试验则 指出，VitE防止脂质过氧化的作用为4％，而富含 茶多酚的绿茶效果达 74％ ，可见绿茶具有 良好 的抗氧化作用，而抗氧化与抗疲劳之间有着密切联 系。那么，究竟普洱茶生茶是否具有抗疲劳作用，其 剂量关系又如何，至今尚未见相关资料报道。本试 验选用具有代表性的普洱茶生茶样品，通过动物小 鼠模型探讨普洱茶生茶抗疲劳效果，以期更深刻地 了解普洱茶生茶的抗疲劳功效，为普洱茶保健作用 机制提供一定的理论依据，以推进普洱茶产业的健 康发展，为中国茶产业作出贡献。 1 与方法 1．1 主要实验材料与试剂 选用 3个厂家生产的普洱茶生茶，分别由勐海 县云茶科技有限责任公司、云南龙润茶业集团和云 南省思茅茶树良种场生产。乳酸测试盒、乳酸脱氢 酶测试盒、血尿素氮测试盒、肝／肌糖元测试盒，购自 南京建成生物工程研究所。实验动物为健康昆明种 小鼠，由昆明医学院动物中心提供，雌雄各半，体重 25±4 g。 1．2 茶汤制备 茶汤制备工艺 J：茶样 沸水浸提(茶水 比为 1：20；1：20；1：10；浸提时问分别为 20、2O、l0 rain) 用抽滤机过滤一合并 3次浸提茶汤 减压 浓缩(60℃)一茶汤浓缩液一装瓶灭菌(120 cc，20 min)一其浓度相当于 lg茶／mL的茶汤浓缩液一低 温冷藏(4 cI=)。 1．3 动物分组及给药 将小鼠按体重随机分为4个剂量组：空白对照 组、普洱茶生茶低、中、高剂量组，每组20只小鼠，雌 雄各半。根据日本东京桑也研究推荐成人每日平均 用茶量 6 g，我国男女总平均体重6O kg，则成人每 日 用茶量为0．1 g,／kg．bwl9 J。根据保健食品功能评价 的要求，各种动物至少应设3个剂量组，其中1个剂 量组应相当于人体推荐摄人量(折算为每千克量) 的5倍(小鼠)，且最高计量不超过人体推荐的30 倍l1 。在此基础上，本实验采用昆明种小鼠按人体 推荐量的5倍作为最低剂量，中、高剂量分别为人体 推荐量的 l0倍，20倍，即低、中、高剂量组分别给予 普洱生茶0．5、1．0、2．0 g／kg．bw；空白对照组给予生 理盐水(0．9％)。每周称重 1次，每天早上(9：00— 11：00)根据体重(0．02 mL／g．bw)经口灌 胃给药 1 次，连续给药30 d。 1．4 小鼠负重游泳试验 每组随机选取 10只小鼠(雌雄各半)，末次灌 胃30 min后，置小鼠在游泳箱中游泳。水深 30 cm， 水温(30±1)oC，距尾尖 1 cm处用细棉绳系 5％体 重的铅皮。记录小鼠自游泳开始至沉下水不再浮起 的时问，作为小鼠的游泳时间(s)。 1．5 生化指标测定 给药 30 d的昆明种小鼠在末次灌 胃前空腹 12h，于末次给药 30 min后，在不负重的情况下将小 鼠置于温度为(30 4-1)cC水中游泳 30 min，休息 10 rain后眼球采血，离心，制备血清，备用。将采血后 的小鼠立即取肝脏和后腿部的肌肉，经生理盐水漂 洗后用滤纸吸干，保存，备用。按照试剂盒提供方法 测定血乳酸(BLA)、血尿素氮(BUN)、血乳酸脱氢 酶(LDH)及肝糖元(LG)、肌糖元(MG)指标。 1．6 统计学处理 采用 Spassl1．5统计软件进行处理，所有数据 均以 4-s表示，并进行方差分析。 2 结果与分析 2．1 普洱茶生茶对小鼠体重的影响 由表 1可知，普洱茶生茶高、中、低剂量组的小 鼠在实验结束时的平均体重与实验开始时的平均体 重相比分别增加了 15．71％、17．89％和 23．75％， 阴性对照组则增加了 31．37％。从外观上看，高剂 量组和中剂量组小鼠体型较为瘦长。表明低剂量、 中剂量和高剂量的普洱茶(生茶)对小鼠体重的增 长均具有显著的控制作用。 2．2 普洱茶生茶对小鼠耐力的影响 由表 2可知，与空白对照组相比，普洱茶生茶 低、中、高剂量组的小鼠负重游泳时问均有所延长。 其中普洱茶生茶中剂量组小鼠力竭游泳时间增加的 趋势最为明显(P<0．01)，较空白对照组增加了5O． 表1 对小鼠体重的影响 Table 1 Effect of unfermented Pu．erh tea Oil weight of micefn= 20， ±s) 注：与空白对照组比较：a．P<0．05，b．P<0．01。下同。 Note：Comparingwith blank control group：a．P<0．05。b．P <0．01 The sarr a8 below． 3期 黄业伟等：普洱茶生茶抗疲劳作用研究 8O3 表2 普洱茶生茶对小鼠负重游泳时间的影响 Table 2 Effect of unfermented Pu·-erh tea On forced--swimming time ofmice(n：10，：±5) 表3 普洱茶生茶对小鼠BLA、BUN的影响 Table 3 Effect ofunfermented PL】一erh tea on blood lacnc acid and urea nitrogen in mice(n=10， ±5) 68％；普洱茶生茶低剂量组增加趋势稍缓(P<0． 05)，较空白对照组增加了32．88％。这说明低、中 剂量组的普洱茶生茶均能显著提高小鼠运动耐力。 2．3 普洱茶生茶对运动后小鼠血 BLA和血 BUN 含量的影响 在不负重的情况下小鼠游泳30 min后，BLA与 BUN的含量见表 3。与空白对照组相比，普洱茶生 茶中、低剂量组小鼠运动后血清乳酸的含量分别降 低了19．7％、21．6％，均呈极显著差异(P<0．01)。 表明中、低剂量的普洱茶生茶能显著降低小鼠运动 后血清乳酸的含量。 研究表明，机体对负荷适应能力越差，BUN增 加越明显，机体 BUN含量随运动负荷的增加而增 加u¨ 。普洱茶生茶各剂量组对小鼠BUN含量的影 响，与空白对照组相比，普洱茶生茶中剂量组小鼠运 动后血清尿素氮(BUN)的含量比空 白对照组降低 了 12．9％，呈显著差异(P<0．05)，表明中剂量的 普洱茶生茶能显著改善小鼠运动后的 BUN水平。 2．4 普洱茶生茶对小鼠LDH的影响 剧烈运动后，动物体内的乳酸脱氢酶会增加，以 加快血乳酸的消除，从而降低运动动物机体的疲劳。 表 4 普洱茶生茶对小鼠 LDH的影响 Table 4 Effect of unfermented Pu—erh tea on lactate dehydrogenase in mice(n=10， ±s) 表5 普洱茶生茶对小鼠运动后糖元含量的的影响 Table 5 Effect ofunfermented Pu-erhtea onliver glycogen andmu— s1e glycogen in mice(n=10， ±5) 普洱茶生茶对小鼠LDH活性的影响见表4。 与空白对照组相比，普洱茶生茶中、低剂量组小 鼠运动后血清乳酸脱氢酶活力(LDH)均有明显增 高趋势。其中低剂量组小鼠的血清乳酸脱氢酶活力 (LDH)比空白对照组增高了23．6％，呈极显著差 异(P<0．01)；普洱茶生茶中剂量组小鼠的血清乳 酸脱氢酶活力(LDH)比空白对照组增高了 15．5 ％，呈显著差异(P<0．05)。表明中、低剂量的普洱 茶生茶能显著提高小鼠运动后血清乳酸脱氢酶活力 (LDH)的水平。 2．5 普洱茶生茶对小鼠运动后肌糖元(MG)和肝 糖元(LG)含量的的影响 从表 5可知：与空白对照组相比，普洱茶生茶 中、低剂量组小鼠运动后肌糖元的含量均有增高趋 势。其中中、低剂量组小鼠的肌糖元含量分别比空 白对照组增高了25．3％、25．6％，均呈极显著差异 (P<0．01)。表明中、低剂量的普洱茶生茶能明显 提高小鼠运动后肌糖元的储备量。 普洱茶生茶各剂量组小鼠运动后肝糖元的含量 均高于空白对照组。其中中剂量组小鼠的肝糖元含 量比空白对照组增高了24．0％，呈极显著差异(P <0．01)；低剂量组小鼠的肝糖元含量比空白对照 组增高了 l5．7％，呈显著差异(P<0．05)。表明 中、低剂量的普洱茶生茶能显著提高肝糖元储备。 3 讨 论 疲劳的产生与高强度或长时间运动或作业后体 内能量物质如肝／肌糖元等减少、代谢产物如乳酸蓄 积等因素有关。疲劳的最直接和最客观的表现是运 动耐力的下降，而负重游泳时间一直以来被作为反 映运动耐力的重要指标 引¨。实验结果表明中、低剂 量的普洱茶生茶能显著地延长小鼠负重游泳时间， 表明中、低剂量的普洱茶生茶可明显提高小鼠的运 动耐力。 长时间的剧烈运动将导致机体相对缺氧和糖酵 解作用加快，进而产生大量的乳酸。乳酸浓度增加 使肌肉中H 和无机磷( )堆积，导致肌肉组织内 的pH值下降。而肌肉组织的pH值降低是导致疲 西 南 农 业 学 报 23卷 劳产生的一个主要因素 ¨。因此，血清乳酸水平也 是反映机体的有氧代谢能力和疲劳程度的重要指 标。本研究结果显示，运动后低剂量组和中剂量组 小鼠的血清乳酸水平均显著低于空白对照组，说明 中、低剂量的普洱茶生茶可以通过减少运动中乳酸 的生成，达到延缓疲劳产生的效果。 机体在运动时，体内能量平衡遭到破坏，肌糖元 消耗，血糖降低，蛋白质及氨基酸的分解代谢加强。 尿素氮(BUN)是蛋白质的代谢产物，与人的身体机 能、疲劳程度以及负荷量的大小呈密切正相关。通 常血清尿素氮含量随运动负荷增加而升高，身体对 负荷适应性越差，则尿素氮产生越多L1 。本实验结 果表明，运动后中剂量组小鼠的 BUN水平均显著 低于空白对照组，说明中剂量的普洱茶生茶可以提 高机体对负荷的适应性，达到抗疲劳的效果。 LDH能催化乳酸生成丙酮酸进行进一步的代 谢转变，清除肌肉中过多的乳酸，可延缓和消除疲 劳。动物体内LDH活力越高，则抗疲劳能力越强。 本研究结果表明，运动后低剂量组和中剂量组小鼠 的LDH水平均显著高于空白对照组，中、低剂量组 之间差异不显著，说明中、低剂量的普洱茶生茶可以 通过提高运动中LDH水平，达到抗疲劳的效果。 糖是肌肉组织的重要能量来源。体内的糖储备 包括肌糖元、肝糖元和血糖三类，较长时间剧烈运动 可使体内糖元储备耗竭Ll引。而糖元耗竭可影响运 动能力，特别是耐久力。大量的研究表明运动导致 的体力衰竭总是和肌糖元的耗竭同时发生的。随着 肌糖元消耗的不断增加，机体为维持血糖水平，将动 用肝糖原而导致肝糖元减少。因此，肝糖元和肌糖 元的含量是反映疲劳程度的敏感指标。结果显示， 中、低剂量组小鼠运动后肝糖原和肌糖元均显著高 于空白对照组，说明中低、剂量的普洱茶生茶能够维 持运动后小鼠的肝糖元和肌糖元含量，从而为机体 提供较好的能量储备。但普洱茶生茶是通过增加 肝、肌糖元储备，还是通过减少运动时对肝、肌糖元 的消耗，或者两者兼有之，仍有待进一步研究。 据杨志博等人报道 J，乌龙茶具有较为明显的 抗疲劳作用，乌龙茶中主要的抗疲劳成分为茶氨酸、 咖啡因等。而普洱茶生茶中也含有这些功能性成 分，故普洱茶生茶具有抗疲劳的物质基础。一般认 为茶多酚(TP)是茶叶抗氧化作用的主要成分，也有 报道还有VitC的作用。TP是一组以儿茶素为主的 多羟基酚类化合物，分子结构中具有活泼的羟基氢， 一 方面它们利用自身提供的 H 直接使机体内的氧 自由基转变为过氧化氢和氧分子，使 OH一转变为 水分子，清除了多余的自由基；另一方面它们能及时 修复 SOD和 GSH—Px的结构，使其恢复活性l5 J。也 有报道称 L一茶氨酸具有较为明显的抗疲劳作用，L 一 茶氨酸是谷氨酸的衍生物。目前研究发现 L一茶 氨酸几乎只在茶叶中存在。并且有许多生理功能， 如降血压作用、改善记忆力作用等。其中尤其值得 注意的是L一茶氨酸还对人脑电波产生影响，使人 的情绪放松，减少紧张【】 。 根据1996年颁布的《保健食品功能学评价程序 和检验方法》 若 1项或 1项以上的耐力运动实验 (负重游泳和爬杆)和 2项或 2项以上的生化指标 (血乳酸、血清尿素氮、肝／肌糖原等)为阳性，即可 判定受试物具有抗疲劳活性。因此，可以认为普洱 茶生茶有明显的抗疲劳作用，以中剂量组作用最明 显。普洱茶生茶抗疲劳的机制可能是与其抗氧化、 改善机体物质代谢及提高机体有氧代谢能力有关， 但具体机制尚需进一步研究。 参考文献： [1]陈开心．茶树起源在临沧 [J]．茶叶通报，2007，29(1)：29—3O． [2]黄桂枢．中国普洱茶文化研究[M]．昆明：云南科技出版社， 1994． [3]梁海燕，古德祥，刘 昕，等．茶提取物对胶原蛋白 一D一核糖的 蛋白质糖基化反应的抑制作用[J]．中国食品学报，2001，1(1)：1 — 4． [4]杨志博，松井阳吉，林 智，等．乌龙茶抗疲劳作用[J]．福建茶 叶，2000(4)：4-4—46． [5]马 森，陈培珍，游玉琼，等．武夷岩茶抗疲劳抗氧化作用研究 [J]．食品科学，2oo7，28(08)：484—486． [6]周 健，成 浩，叶 阳，等．滇青、青饼和普洱茶(熟饼)近红外 指纹图谱分析[J]．核农学报，2009，23(1)：110—113． [7]空山翠．茶的保健功效[J]．食品与药品，2005，7(4B)：64—67． [8]刘勤晋，陈文品，白文祥．普洱茶急性毒性安全性评价研究 [J]．茶叶科学，2oo3。23(2)：141—145． [9]陈宗道，周才琼，董华容．茶叶化学工程[M]．重庆：西南师范大 学出版社，l999． 【10]于守洋．中国保健食品的进展[M]．北京：人民卫生出版社， 2oo1．958． [11]张建国，陈 良，金扶正．化瘀补肾法对老年小鼠耐力运动中抗 缺氧和抗疲劳作用[J]．中国临床康复．2oo2，6(3)：351—352． [12]何来英，严卫星，楼密密，等．保健食品抗疲劳作用试验方法研 究[J]．中国食品卫生杂志，1997，9(4)：1． [13]Xu G G，ho Q M．A study on the rel 0nship beaten blood acid lactic in m~ion md hemo~obin saturation densi~a new hemo~ binme~[J]．J wuhn Institute Physi Edu，2o01，35(3)：4|D． [14]郑文甫．疲劳是健康的大敌[J]．解放军保健医学杂志，2005，7 (1)：62—63． [15]陈吉棣．运动营养学[M]．北京：北京医科大学出版社 ，2o02． 65． [16]王小雪，邱 隽，宋 宇，等．茶氨酸的抗疲劳作用研究[J]．中 国公共卫生，2oo2，18(3)：315—317． [17]国家卫生部卫生法制与监督司．保健食品功能学评价程序和检 验方法[M]．北京：国家卫生部，1996，10． (责任编辑 王家银)