白带中白色念珠菌蛋白酶的测定及药敏结果分析

白带中白色念珠菌蛋白酶的测定及药敏结果分析 临床医学论文-白带中白色念珠菌蛋白酶的测定及药敏结果 分析 【摘要】 目的 评价白带中白色念珠菌的致病性和指导抗真菌药物的合理使用。方法 对大庆市中医医院2003年1月至2004年12月白带标本中分离的300株白色念珠菌进行蛋白酶测定,同时测定氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑的最低抑菌浓度:MIC:。结果 300株白色念珠菌全部检出蛋白酶,其中蛋白酶活力高、中、低检出率分别为83〃7%:251株:、12〃7%:37株:、4〃0%:12株:。4种抗真菌药物的耐药率分别是17〃3%、11〃3%、63〃3%和44〃6%。结论 白带中白色念珠菌具有致病性,临床应密切关注。 【关键词】白色念珠菌;白带;蛋白酶;耐药性 白色念珠菌是人体正常菌群之一,主要寄生于人体的体及口腔咽喉等部位,是引起女性生殖道感染的常见菌。笔者对我院2003年1月至2004年12月300株白带标本分离的白色念珠菌酸性蛋白酶:acid proteinase,AP:以及白色念珠菌对氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑的耐药性进行,以期阐明白带中白色念珠菌的致病性和耐药性,指导临床合理治疗。 1 资料与方法 1〃1 材料 1〃1〃1 菌珠 我院检验科2003年1月至2004年12保存的白带标本中分离的白色念珠菌300株。经形态学、芽管生成、假菌丝、厚膜孢子、糖同化等试验系统鉴定,确定为白色念珠菌。 1〃1〃2 培养基 哥伦比亚血平板:重庆市庞通科贸有限公司:;产酶培养 基:葡萄糖20〃0 g/L,酵母粉1〃0 g/L,KH2PO41〃0 g/L,蛋白胨20〃0 g/L,pH4〃5[1];YGM-牛奶培养基:葡萄糖20〃0 g/L,酵母粉1〃0 g/L,KH2PO41〃0 g/L,琼脂10〃0 g/L,pH4〃5[1]。灭菌后冷却到50?加脱脂牛奶:浓度为1〃0%:。培养基厚度:9 cm直径平板准确加入25 ml培养基,约4〃0 mm厚。 1〃1〃3 药敏测定板 法国生物梅里埃公司生产的酵母真菌药敏测定板ATB?FUNGUS2。 1〃2 方法 2〃1 AP活力的恢复 用产酶培养基37?增菌24 h,转种于哥伦比亚血 1〃 平板37?培养24 h,用来恢复白色念珠菌的产酶等生物学活性,保存于4?备用。 1〃2〃2 白色念珠菌AP活力测定[1]试验菌株点种于YGM-牛奶平板上,37?培养72 h后,用游标卡尺测量菌落及其周围透明环的直径,以透明环直径/菌落直径:R:来判断酶活力的大小。 1〃2〃3 抗真菌药物耐药性测定 严格按照说明书进行操作,结果按照美国临床实验室标准化委员会:NCCLS:标准进行敏感、中介和耐药的判定,两性酶素B最低抑菌浓度:MIC:?2 mg/L为耐药。 1〃3 统计学方法 采用WHONET5〃2统计学软件进行统计分析。 2 结果 2〃1 白色念珠菌AP活力 300株白色念珠菌在其菌落周围均出现透明环,R的范围是1〃61,6〃29,按R大小将试验菌株分为高活力:R?3〃0:251株,占83〃7%;中等活力:2〃0?R，3〃0:37株,占12〃7%;低等活力:R，2〃0:12株,占4〃0%。 2〃2 300株白色念珠菌对常用抗真菌药物的耐药性 300株白色念珠菌对氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑的耐药率为17〃3%:52/300:、11〃3%:34/300:、63〃3%:190/300:、44〃6%:134/300:。 3 讨论 AP的检测方法有多种,其中牛奶平板检测法具有简单、灵敏、不需染色可直接观察结果等优点。本实验采用YGM-牛奶平板法,检测了300株从白带标本分离的白色念珠菌AP,结果其产酶率达到100%,且高活力达83〃7%,而低活力仅为4〃0%,中度活力占12〃7%,与国内外相关报道一致。 、荚膜及黏附性、芽管生成和疏水性等构成。其 白色念珠菌的致病性由AP 中AP为主要的致病因子,有文献报道白色念珠菌AP的活性与毒力:r=0〃994 6:、黏附:r=0〃994 4:密切相关[1]。菌体表面的疏水性是白色念珠菌重要的毒性因子,疏水性白色念珠菌较亲水性白色念珠菌产生芽管的速度快,其黏附组织、塑料、导管和人造瓣膜的能力强。 笔者测得白带标本中白色念珠菌对氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑的耐药率分别是17〃3%、11〃3%、63〃3%、44〃6%,明显高于呼吸道中的白色念珠菌[2-4],说明白带中白色念珠菌对氟康唑、伊曲康唑的耐药性已相当严重,这可能与临床局部使用过多唑类制剂,抗真菌药物选择压力增大有关。因此,临床对治疗白色念珠菌阴道炎时应慎用抗真菌药物,避免耐药性的积累。真菌耐药除与选择压力有关外,目前研究认为白色念珠菌耐药性的产生原因为:?麦角甾醇生物合成通路中关键靶酶的变化;?真菌胞膜内药物浓度的降低;?生物被膜的形成等。现已发现许多白色念珠菌感染的发生与生物被膜形成有关[5]。 本研究通过对白带标本中白色念珠菌AP的测定和对常用抗真菌药物耐药性分析,证明白色念珠菌具有相当的致病性,且对常用抗真菌药物已产生不同程度 的耐药,说明在白带标本中白色念珠菌分离培养和药敏分析十分重要。 参考文献 ,1, 黄长武,李兴禄,邱君风,等〃白色念珠菌在呼吸道中致病性的研究〃中华医院感染学杂志,2004,14:7::721-723〃 ,2, 刘晓敏,林婷〃189株肺部酵母样真菌的鉴定及E-test法药敏分析〃中国医学检验杂志,2004,5:2::108-109〃 ,3, 沈翠芬,张晓祥〃临床标本的真菌培养和药敏分析〃中华医院感染学 13:4::382-383〃 杂志,2003, ,4,江艳〃93例呼吸道白色念珠菌感染的临床调查与耐药现状分析〃四川省卫生管理干部学院学报,2003,22:3::196-197〃 ,5, Douglas LJ〃Candida biofilms and their role in infection〃Trends Microbiol,2003,11:1::30-36〃