竹叶提取物对亚硝化反应的抑制

第 19巷第 6期 2000年 11月 无 锡 轻 I 大 学 学 报 Jomma!of W axi University of Light Industry V。l 19．No．6 NOV ，2000 文章柚号：1009—038X(2000)06—0583—04 一 圭拍 竹叶提取物对亚硝化反应的抑制 塑 1 津 (杭州商学院食品科学与系，浙江杭州 310035) z 7 、 g ， 摘 要：研究了竹叶提取物对亚硝胺合成的阻断作用和亚硝酸钠的消除作用，并选择j最佳提取 条件．结果显示，最佳提取条件为：55％的丙酮于80℃水浴回流 1 h，此提取物具有较高阻断亚硝 胺合成及清除亚硝酸钠的效果 关蕾调：丛 ；旦 ；清 耍硝辑电啥 ．卫--4丹, 量6句 中圈分类号：O61 文献标识玛；A Inhibiting Nitrosation by Extract of Bamboo Leaves XU Gang，ZHANG Hong，PANG Jie (Department of Food Science and Engineering，Hangzhou Imtjtme of Comme~e，Hangzhou 310035) Abstract：This paper deals w h the optimum extract conditions of bamboo Ieaves and capabilities of disconnecting nitrosodimethylamin(NDMA)comp~t and scavenging sodium nitrite by extract of barn— boo leaves The result showed that the optimum condition is 55％ acetone extract for one hour in wa— ter bath at 80℃ ．The extract has high capabilities of disconnecting NDMA compost and scavenging sodium nitrite． Key words；extract of bamboo leaves；disconnecting ；scavenging 竹叶是禾本科(Poaceae)竹亚科(Bambusoldeae) 多年生常绿植物．我国是竹子的中心产区之一，竹 叶的医疗保健作用早已为我国人民所认识，(本草 求真)曰；竹叶“轻能解上．辛能散郁，甘能缓脾．凉 能入心，寒能疗热 ”竹汁含有丰富的营养物质并具 有清热解毒，镇痰止渴，延缓衰老，防癌抗癌等功 效[ ． 亚硝胺是当前最令人关注的一类化学致癌物 质，它能引起人和动物的肝脏等多种器官的恶性慢 性肿瘤．正常情况下，人们直接从食物中摄入的亚 硝胺量是檄乎其微的，但形成 N．硝胺类的前体物质 却大量存在于食物中以及食物在体内的代谢过程 收稿日期：2000—01—24；修订日期：2000—09—13 作者柏介：许锕(1958一)，女，浙江杭州人．工学学士，实验师 中 J亚硝酸盐与仲胺无论在实验室和自然条件下 还是在人体和动物体内均能反应合成亚硝胺，尤其 在人和动物的胃中更适于合成亚硝胺 】 因此，阻 断亚硝胺合成或消除亚硝胺的前体是防治癌病 因 产生的有效途径之一．竹叶防癌活性表现的一个方 面是清除亚硝酸盐和阻断亚硝胺的合成——即对 亚硝化反应的抑制作用，而有关天然产物抑制亚硝 化反应方面的研究几乎未见报导。本文从有利发 挥防癌活性方面考虑，找出从竹叶中提取抑制亚硝 化反应的活性物质的最佳条件，初步研究竹叶提取 物消除亚硝酸盐及阻断亚硝胺合成的浓度效应。旨 在探讨竹叶资源在防癌抗癌领域中的应用． 维普资讯 http://www.cqvip.com 584 无 锡 轻 I 大 学 学 报 第 19卷 1 实验材 料 1．1 原料 浙江慈攫产的四季竹，鲜叶洗挣后，自然阴干 机器磨碎成粉状备用． 1．2 主要试剂 无水乙醇、甲醇、丙酮、醋酸、盐酸、0 5 mol／I pH 3．0的柠檬酸钠一盐酸缓冲液l4】、亚硝酸盐钠、二 甲胺、碳酸钠、对氨基苯磺酸、a萘胺、萘基盐酸 ：氨 基乙烯，所有试剂均为分析纯． 1．3 主要设备 日产岛津 uv一1601型紫外可见分光光度计．日 产岛津 AEL-160型电子分析天平，日超音渡工业会 社产 uT．52超声波发生器．上海申科机械研究所生 产的R．201型旋转蒸发仪，上海产紫外分析仪．北 京长安科学仪器厂生产的恒温水浴锅． 2 内容与方法 2．1 正交设计 为系统考察竹叶防癌活性物质提取的最佳条 件，根据已有资料和实际情况，设计实验如下：实验 分为水浴试验组和超声试验组 水浴试验组选用浸 提剂、浸提剂体积分数、水浴温度和水浴时间作为 考察因素，以测得的提取样品对亚硝胺台成的阻断 率为考察指标，选用 I4(3 )正交表试验 超声试验 组选用浸提剂、浸提剂体积分数、超声时间和液固 比作为考察因素，也以测得的样品对亚硝胺台成的 阻断率为考察指标，选用 (3 )正交表试验 因素 水平分别见表 1～2． 衰 1 水浴试验因素一水平表 Tab．1 Levels and factors 0f water bath 衰 2 超声试验因素一水平衰 lab．2 Le vels and factors of supenonic tesL~ 水浴试验组：称取竹叶样品 5 g’按表 1及表 3 的要求进行提取，提取液经抽滤后用旋转蒸发仪挥 干溶剂，浓缩液用少量热水洗下，定容至 10 mI 得 到样渡，备用 超声试验组：称取竹叶样品 5 g，按表 2及表 4 的要求进行提取，后处理与水浴同，得到样液，备 用 将获得的18个提取液分别进行二甲基亚硝胺 合成的阻断试验 】：取 0 5 tool／I pH 3 0的柠檬酸 钠 盐酸缓冲液 5．0 mI ，加入 1 mmol／I 的亚硝酸钠 0 5 mI ，竹叶提取样液 1．0 mL，再加 1 mmol／I 的 =甲胺 0 5 m L-然后将反应体系定容到 10 mI ．37 ℃保温 1 h取 1．0mL反应的溶液至约 7 em 的玻 皿中，加入 0 5 mI 0．5％碳酸钠溶液，紫外灯照射 15rain，加入 1％对氨基苯磺酸和 0．1％a 萘胺各 1 5 mI ，加水 至溶液 体积精 确 为5 0 mL．放置 15 min，显色后在波长 525 nm处比色测定，结果见 表 3． 表 3 水浴正交试验设计硬结果 Tab．3 Results or or／hogonM design c extraction by winter broth 注：按菠固比为 15 1浸泡 17 h后水浴 2．2 亚硝酸盐清除率和 N．亚硝胺(NDMAl合成阻 断率的浓度梯度试验 为 搞清提取液最佳体积分数对亚硝胺的阻 断效果及对亚硝酸盐的清除效果，本研究作了浓度 梯度试验．用2 1正交设计所确定的最佳条件对竹 叶进行提取，准确吸取样液0，0．02，0．04，0．1．O．5， 维普资讯 http://www.cqvip.com 第 6期 许钢等：竹叶提取物对亚硝化反应的抑制 1．0．1，5．2．0．2．5，3．0 mL(相当于一组浓度梯度)， 按二甲基硝胺合成阻断试验项操作测定阻断率 另 外，准确吸取样液0，0．02，0．04．0．1，0．5，1．0，1．5， 2 0 mI (相当于一组浓度梯度)，按亚硝酸钠标准曲 线的绘制项操作测定清除率，结果见表 4． 寰 4 超声正交试验设计厦结果表 T丑b．4 R~ullts of~-thogonal designfexl~ct|on by supersonic： ；：。2。3。4吸光度 序号 l ⋯一 阻断率／％ 3 结果与分析 3．1 最佳提取条件的确定 从表 3，4的直观分析可知：水浴浸提比超声提 取效果 好．水浴 浸 提 4种 因素 的晟 佳组 合为 A 3BlC1Dl，即用55％的丙酮，在 80℃下浸提 1 h 的提取物起阻断作用的效果最好；超声提取4种因 素的最佳组合为 A 2BlC2D2，即用 55％的甲醇超声 20 rain．液固比为 10：1时效果最好． 从表 3的直观分析和表 5的方差分析可知：水 寰 5 水浴试验组方差分析袁 Tab-5 Anal,~ls of vDx|an~ in bathtest 注：F0。l(2，2)=99．0，F0 05(2，2)=19 0， 】0(2，2)： 9 0，表中*·和 ·分另 表示 P<0．05和 0．05A> C>D．B、A因素有极显著影响，C的影响较显著． 而 D的作用不明显． 从表 4的直观分析和表 6的方差分析可知：超 声提取的4种因素对结果影响的大小依次为 A>B >c>D，但 A、B、c、D因素的影响都不明显 寰 6 超声试验组方差分析寰 Tab．6 Analys~ of V aⅡce in s~ nic lests 注：Fn 01(2，2)=99 0，F0 05(2，2)=19 0， -0(2，2)= 9 0。表中**和 *分别表示 P<0 05和 0．05