发酵法制备透明质酸

日 用 化 学 工 业 {乙 量 塞 是发酵生产的。发酵法生产 HA，是利用细菌将廉价 的葡萄糖转化为 HA，不 依赖于动物原牡 产量不受 限制 碱本也低 发酵镀 中的 HA量 j 分离纯 化 ，产 品纯度 高。我们参般国外有关文献资料 ，对发酵法制 簖 ,HA避骨 r实验研竞．井取得初步结果 ，现报告如 下 · H 的发醋 过 程 莲种 ：腹多种罐 璋藩筛选得到 ，编号 HF—l19】， 为国外趟。；]翻秘 i 2 仪器 ：H 丸菱 MDL一500型台式 电脑 自拄发 酵罐 ，WDP 瓴培养箱 ．Y『一875型超净工作台 1 0 a．菌种培养：配制摇瓶培养渡 lOOml，组成为葡 萄精 ，牛 晦膏0．5 蛋 白胨 1 ，磷 酸氢二 钠 0．2 及少埔锅锌镁微量元素 ，120c灭菌 1 5分钟 ， 冷却层接种帛 面菌种 ，37C摇瓶培养 l2小时 ．无菌 取 样进行盟微镜观察 ，确认生长 良好 ，达到一 定密 度 井无杂菌后 ．待接种于发酵罐中 I 发酵培群：发酵培养谊的组成睬将葡萄糖提 高到 j 外 ，其它同摇瓶培养液 配制 3L培养浦加 入发酵罐中 ．120c灭菌 I5分钟，砖却后接种摇瓶培 养的菌种棱 】OOml，在温度 37℃、通 气量 0．1～5L／ rain(根据谘氧需要进行控制J搅拌速度 Z0Orpm的 条件下进行发酵。在发酵过程中菌体不仅产生 HA， 而且也产生 酗、乙酸 等有机醴 ，需不断加^氢氧化 溶液堆{卑pH值 6．9～7．1。发酵过程中每间隔 2～ 4小时，取样测定发酵涟 的葡萄糖 含量 ．OD660 (6~0nm，处的光吸收度，反映菌体生长情况)，HA古 量，以及显檄镜观察等，跟踪各种参数柏变化，在葡 萄槠耗 尽时终 I!：发酵 ，发酵时 间一般 为 35～40小 蹦。围 1是一发发酵实验审 ，三种参数随时!司的变化 曲线，说明HA主要在对数生长期产生，葡萄糖耗尽 后 ．HA 的含量不再增加 2 发酵液中 HA的分离 将发酵渡加一倍 量术稀释 ，用三氧 乙酸调 H 值 4．0，用高遵冷冻离心机 13000×g离心 2O分钟 ， 上清藏用 0 2urn徽孔滤膜过滤 ，滤液加一倍量巍仿 髓拌乳他 4小时，离心分离出上层液，用氢氧化钠溶 !}奔 科 【h． 图 1 HA 的发酵 曲线 在相同条件下 ，进行了5次发酵 实验 ．分别制得 i0．8，l0．3 l1．5，10．7，11．9gilAt产率稳定在 3．5～ 4．0g／L发酵液 3 HA的理化 3．1 葡萄糖醛酸含量测定 采用改良的咔唑法，葡萄糖醛酸为品 3．2 蛋 白质古量测定 采用 Lowry等的福林酚法 ，牛血清 白蛋 白作为 标准品。 3 3 分子量测定 采用 Laurent等 的 Limidng viscosity法 ，使 用 奥 氏粘 度计 ，测定 温度 为z5℃ ，根 据替 式 [1]一 0．036M。 ，计算HA分子量 3．4 吸水率测定 取 HA样品及对照品甘油于五氧化二磷真空干 燥器中 ．干燥 24小时，精密称重 ．分别在 20℃，相对 湿度 (RH)33 的环境中放置 48小时 ，再精密称量。 根据下面公式计算吸水率 吸水率 ： ×1∞ wa——放置后的样品重 Wb——放置前的样 品重 · 茁项 日于 199Z年 n 月通过 山东者科委鉴定．为国 内首创 维普资讯 http://www.cqvip.com 匕 ，÷驭 镥 ‘ 卟文 日 用 化 学 工 业 1 994年 以上四项测定结果见 1 丧 l 五玻发酵所得 HA 的理化舟析结果 3．5 HA 样品的红外光谱分析 仪器为 PE1720FTL~型红外分光光度计．采用 演化钾 压片法 同时测定 HA 标准品(sigm8产品) 的红外吸收光谱，与之比较 结果见图 2，样品的红 外吸收光谱与 HA标准品完全一致 光谱祭析如下： 3430cm (OH．NH)．2925cm (CH)，l616cm (C = O，COO一)，156ocm叫 (NH)。 圉 2 HA 的红外吸收光谱 4 结语 本研究制得 HA ，已达到每升 3．5～4．0g的发 酵产率 ．并具有工业生产价值，若采用 l0吨发酵罐， 每批产量按 35kg计，产值为 ～45万元，综合成本 在 6万元以下，而从鸡冠提取同样量的HA，仅原料 鸡冠的成本就高达 14万元。所以从经济效益上讲， 发酵法具有不可比拟的优越性和竞争力}此项研究 运用到生产，将对我国HA生产的发展起到很大的 推动作用。 (dJ东省商业科学研究所 郭学平 王春喜 崔大鹏 济南市 250014) 激光测粒技术在气雾剂产品杈 』 J 测试中的应甩 、 ’、 揩 懂 鸱 爹 珠 随着科学授未以爱^民生活水平的不断提高， 各种气雾剂产品已成为各家庭生活的必备之物。近 年来，国内市场上每年巳有近亿罐、上百种牌号的产 品在生产和市场上流通，在国外，它的应用更为普 遍 气雾剂产品的雾化性能．也就是它喷射出来的 雾漓大小和尺寸分布直接影响着它的使用效果 根 据我国目前正在编制的 气雾剂产品测试的方法”． 已将这一参数作为评价气雾荆产品性能的一十重要 指标。不同类别的气雾剂产品根据使用功能曲不同 应有不同雾滴大小 气雾剂喷射出来的雾漓直径分布很宽．最大和 最小直径之 比有可 能超过 100 1，雾滴的密度(即 单位容租中的雾漓数目)很高且具有很大的速度 此 外 ．在喷射过程 中还会伴随着蒸发和聚集 ，使雾滴直 径随时问及空间位置而变化 ，这些都绐 雾漓大 小的 测定造成了很大的困难。许多能对固体颗粒进行测 量的方法和手段，都无法用来对雾漓进行测量．传统 的雾滴取样观寨或光学成像法不能给出可靠的测量 结果 近年来出现的激光全息摄影法叉困设备投资 大、技术要求高 、数据处理复杂 、测量时问长等原目- 不能得到很好的推广。 7o年代后期．在激光技术、光 电技术及计算机 技术飞速发展和广泛应用的基础上，以激光为光源， 基于光散射原理的微粒测量技术有了迅速的发展 其中衍射式激光测粒仪应用于雾滴直径的测量获得 了很大成功。它无需采样，可在喷雾的葡时进行在线 的测量 。它的测量范匿宽，测量速度快 ，使测量结果 更为可靠，并保证有较高的精度 我们应用上海机械 学院所研制生产的FAM激光测粒仪对多种类型气 雾剂的雾化性能进行了测量，取得了十分满意的结 果．其性船与国外 8o年代末同类型铡粒仪相当 l 衍射式激光瑶I粒仪的基本原理 衍射式激光测粒仪由激光器、接收透镜、光电探 测器及计算机等部件组成，如图 1所示。来 自氮一氖 激光器的光柬经扩束校直后照射到测量区t测量区 中待测雾满在激光的照射下产生光的散射，散射光 的强度及空间分布与雾滴大小及分布状态有关。散 射光被位于接收透镜后焦平面上的多元光电探测器 所接收，转换成电信号后经放大和 A／D转换送人计 维普资讯 http://www.cqvip.com