STEINER & STEINER 方法 – 螺旋菌& 军团杆菌
目的:螺旋菌是一种螺旋型的细菌,按体职、形状和鞭毛的不同可分为:密螺旋体引起:梅毒,雅司病和品他病;包柔氏螺旋体引起:莱姆关节炎。幽门弯曲杆菌、肺炎军团杆菌和猫爪抓伤症的病菌也能用此技术染色。
原理:细菌能从银溶液中吸收银,在还原剂的作用下,使用银转变成可见的金属形式。
对照:含有螺旋菌或军团菌的组织。
固定:10% 甲醛。
技术:4-5m石蜡切片。
设备:酸清洗玻璃器皿,染色缸,Whatman #4滤纸和微波炉。
试剂:
0.5% 硝酸铀酰:
硝酸铀酰Uranyl nitrate 0.5 gm
蒸馏水Distilled water 100.0 ml
混合溶解,盛于酸清洗过的瓶中。保存期1年。
警告:剧烈的刺激性,腐蚀性,可能致癌。
2% 对苯二酚:
对苯二酚Hydroquinone 0.5 gm
蒸馏水Distilled water 25.0 ml
新鲜配制。
警告:刺激性,可能致癌。
0.5%硝酸银:
硝酸银Silver nitrate 0.5 gm
蒸馏水Distilled water 100.0 ml
混合溶解,盛于酸清洗过的瓶中。保存期1年。
警告:剧烈的刺激性,腐蚀性,可能致癌。
10% 乳香备用液:
乳香Gum mastic 10.0 ml
无水酒精Absolute alcohol 100.0 ml
放置过夜溶解,#1滤纸过滤,存放于密封瓶中。
警告:易燃性。
2.5% 乳香液:
10% 乳香备用液Gum mastic stock 15.0 ml
无水酒精Absolute alcohol 75.0 ml
Whatman #4滤纸过滤,保存期6个月。
警告:易燃性。
还原液:
2.5%乳香液gum mastic 15.0 ml
2%对苯二酚 hydroquinone 25.0 ml
0.5%硝酸银silver nitrate 0.6 ml
将乳香液加入对苯二酚,然后加入硝酸银。使用前新鲜配制。溶液为白色,不用过滤。用后丢弃。
警告:刺激性,可能致癌。
安全:穿戴手套、护目镜和白大衣。加热和打开盖的溶液保持在通风橱中。避免接触和吸入染料和化学品。
硝酸铀酰:剧烈的刺激性,高度毒性。影响靶器官为肝、泌尿、循环和呼吸系统,吸入粉尘时有放射危险。
硝酸银:对眼睛和皮肤有剧烈的刺激性。氧化剂,摄入可引起严重的胃肠不适。可能致癌,可疑的致癌因子。
对苯二酚:对眼睛和皮肤有刺激性。侵入途径为吸入和摄入。老鼠的慢性毒性实验可引起膀胱癌。
程序:
1. 脱蜡至蒸馏水。
2. 0.5% 硝酸铀酰,微波 70 power, 30 seconds。
3. 热蒸馏水洗数次。
4. 0.5%硝酸银,微波70 power, 40 seconds. 放置90 seconds,摇动。
5. 热蒸馏水洗数次。
6. 95% 酒精 2 changes.
7. 100% 酒精 2 changes.
8. 2.5%乳香 1 minute.
9. 还原液,微波 40 power, 30 seconds。摇动玻片,微波 40 power, 30 seconds. 放置2 minutes,或直至组织变为黄色或黄褐色。
10. 蒸馏水洗 3 changes。
11. 脱水透明和封固。
结果:
螺旋菌、军团杆菌和弧菌:黑色
背景:黄色
注意:
1. 使用酸清洗玻璃器皿,并确保用蒸馏水清洗过。
2. 1000 ml的蒸馏水微波 Hi power 5 minutes预热蒸馏水洗液。
参考文献:
Churukian C, Dept Patho, University of Rochester Medical Center,
Rochester, NY 14642, 1989
Crookham,J, Dapson,R, Hazardous Chemicals in the Histopathology
Laboratory, 2nd ED, 1991, Anatech
程序卡
STEINER & STEINER 方法 – 螺旋菌& 军团杆菌
对照:含有螺旋菌或军团菌的组织。
技术:4-5m石蜡切片。
程序:
1. 脱蜡至蒸馏水。
2. 0.5% 硝酸铀酰,微波 70 power, 30 seconds。
3. 热蒸馏水洗数次。
4. 0.5%硝酸银,微波70 power, 40 seconds. 放置90 seconds,摇动。
5. 热蒸馏水洗数次。
6. 95% 酒精 2 changes.
7. 100% 酒精 2 changes.
8. 2.5%乳香 1 minute.
9. 还原液,微波 40 power, 30 seconds。摇动玻片,微波 40 power, 30 seconds. 放置2 minutes,或直至组织变为黄色或黄褐色。
10. 蒸馏水洗 3 changes。
11. 脱水透明和封固。
结果:
螺旋菌、军团杆菌和弧菌:黑色
背景:黄色
0.5% 硝酸铀酰:
硝酸铀酰Uranyl nitrate 0.5 gm
蒸馏水Distilled water 100.0 ml
混合溶解,盛于酸清洗过的瓶中。保存期1年。
警告:剧烈的刺激性,腐蚀性,可能致癌。
0.5%硝酸银:
硝酸银Silver nitrate 0.5 gm
蒸馏水Distilled water 100.0 ml
混合溶解,盛于酸清洗过的瓶中。保存期1年。
警告:剧烈的刺激性,腐蚀性,可能致癌。
2% 对苯二酚:
对苯二酚Hydroquinone 0.5 gm
蒸馏水Distilled water 25.0 ml
新鲜配制。
警告:刺激性,可能致癌。
还原液:
2.5%乳香液gum mastic 15.0 ml
2%对苯二酚 hydroquinone 25.0 ml
0.5%硝酸银silver nitrate 0.6 ml
将乳香液加入对苯二酚,然后加入硝酸银。使用前新鲜配制。溶液为白色,不用过滤。用后丢弃。
警告:刺激性,可能致癌。
10% 乳香备用液:
乳香Gum mastic 10.0 ml
无水酒精Absolute alcohol 100.0 ml
放置过夜溶解,#1滤纸过滤,存放于密封瓶中。
警告:易燃性。
日期:
技师:
使用限期:
2.5% 乳香液:
10% 乳香备用液Gum mastic stock 15.0 ml
无水酒精Absolute alcohol 75.0 ml
Whatman #4滤纸过滤,保存期6个月。
警告:易燃性。
日期:
技师:
使用限期:
还原液:
2.5%乳香液gum mastic 15.0 ml
2%对苯二酚 hydroquinone 25.0 ml
0.5%硝酸银silver nitrate 0.6 ml
将乳香液加入对苯二酚,然后加入硝酸银。使用前新鲜配制。溶液为白色,不用过滤。用后丢弃。
警告:刺激性,可能致癌。
日期:
技师:
使用限期:
0.5% 硝酸铀酰:
硝酸铀酰Uranyl nitrate 0.5 gm
蒸馏水Distilled water 100.0 ml
混合溶解,盛于酸清洗过的瓶中。保存期1年。
警告:剧烈的刺激性,腐蚀性,可能致癌。
日期:
技师:
使用限期:
0.5%硝酸银:
硝酸银Silver nitrate 0.5 gm
蒸馏水Distilled water 100.0 ml
混合溶解,盛于酸清洗过的瓶中。保存期1年。
警告:剧烈的刺激性,腐蚀性,可能致癌。
日期:
技师:
使用限期: