高效液相色谱法测定紫苏子油中的VE

(1．杭州商学院食品科学与工程系 310035；2 浙江大学药学院 杭州 ‘310029) 摘要：用高效液相色谱法对紫苏子油中的 d—v 舍量进行 了科定，井研竞 『 v 作为扰氧化帮在紫 苏子油储存进程 中的舍量变化。高效液相 邑谱 系兢 采用正相硅肢柱 ．正己烷／异 丙醇(99．8／0．2)作流 动相 ．流速为0．8mL／min，采用荧光检洲嚣，激发光 波长为 292nm，发射光波长为 325nm。 — 在 4 J 0～1024 O~g／g呈 线 性 ，线 性 方 程 为 Y= l00 16X一3600．73(r=0 9996)。分析方法 中 n— v 的三个水平的平均回收率为79．71％，井具有较 好的精 密度【天内RSD2 lI％(n=5)]。a—V 最低 检测 浓度 为 7 421xg／g．定 量浓度 为 14 84p．g／g。 schaal烘葙击 (63±l℃)的实验表明，紫 苏子油中 作为抗氧化弃0加入的 a— v ，其音量随实验 时间的 延长，将逐渐减少。0 01％、0．03％、0．05％三个暾 的 ，其随时问增扣 紫苏子油 0 前言 紫苏系唇形科多年生草本植物 ．在我国具有极为广 泛的赍源 ，它属于第一批被 中国卫生部确定的既是食品 又具有医药保健功能的物质[1．21。紫苏种子中的 d～亚 麻酸含量高达 卯％以上，高含量 n～亚麻 酸使其成为 高种植率和高利用价值的油料作物资源。但是 ，由于紫 苏子油中古有多种不饱和脂肪酸，极易氧化 ．这使紫苏 子油也易发生氧化 、酸败。紫苏子油氧化 、酸败的产物 会改变油的质量 ．对人体健康产生不利的影响 ．因此研 究其氧化、酸败曲过程耐开发紫苏子油产品是很有必要 的。a～v 是一种天然抗氧化剂 ．它既是具有特殊生物 活性的营养物质，又具有抗氧化的作用 ，紫苏子油 中本 身古有一定量的 vE，但是紫苏子油经过精箭后其原有 的 V 有一定损失 ，如果人为地加入一定量的 不仅会 保持紫苏子油的物理化学性质及其生物括性．还能延长 紫苏子油的保存期。本文将 a～ 在紫苏子油的氧化 过程中的变化作为重点之一，建立一个能准确测定紫苏 子油中V 古量变化的检测方法 ，对研究 vz在紫苏子油 及其它油陷中的性质均有重要意义。 1 实验仪鼍和材料 1 1 倪暑 高效液相 色谱系统 ： 高效液相色谱仪 Waters 5lo(美国沃特斯公司)； 液相色谱柱：Waters P0RAs口 一27477，3 9ram× 30cm(美国祆特斯公司)； 。 荧光检测器 ：Shimaklzu RF一540(日本岛津公司)。 1．2 试桐 d—v 对照品 (瑞士生产 ，含量大于 99％)；其它试 剂均为分析纯。 2 实验方法 2 1 紫苏子油的制备 紫苏子经电磨机粉碎后 ，加入正己烷浸泡 (比倒为 1：1)，爱提时间为 24h，温度 35℃。爱提 3次后 ，合并浸 提 渡井抽滤，滤液用旋转蒸发仪减压蒸 出溶剂 ，得黄色 透明紫苏子粗油。 2 2 高效藏相色谱条件 流动相 ：正己烷／异丙酵 (99．8／0．2，V／V)； 流 速 ：0．8mL／min； 进样 口 ：7725型 ，loop 20 L； 检测器 荧光检测器 ，激发光波长： =292nm，发射 光波 长 ： 325nm； 色谱柱 ： POPL~ 一27477，3 9ram×39era。 2．3 的高效蔼相色谱分析方法 取从紫苏子油 中提取 vl样品 ．用 10mL棕色容量 瓶定容 ．HPI~流动相稀释并定容。以0．45pan的散孔撼 膜过滤后 ．注入高效液相色谱仪 ，记录色谱 圈，并甘算峰 面积 ；另取 a—Ve对照品，用 HPLC流动相配成一定浓 度的 a～V 溶液 ，同法测定 ，按外标法计算。 样品 中d～VE的含量 {p-g／g)={A ／A )xC#x V#／W#×稀释倍敦 ’ A ：样品中 d～ v 的峰面积； A ：d～VE对照品的峰面积 ； C ：d～v 对照品的浓度 ； v#：样品体积； W#：样品重量。 3 结果与讨论 3 l 检测波长的选择 将 旷一ve对照品的流动相溶液，在荧光光度甘上进行 扫描，根据激发光谱图，激发光最大峰值波长在 292衄 ，而 荧光光谱中的荧光峰值波长为325nm。因此荧光植潮蒜的 嘞 黼 ，啪 一 选 一高 维普资讯 http://www.cqvip.com ：塑 ： — — — — —— 激发渡长选择 =292nm，发射渡长选择 ^=325nm。 3．2 q—v 测定方法的选择 从 vE的结构可知 ．a— vl的苯环上含肴三个甲基， 8、 vE的苯耻 均含有两十甲基，但甲基的位置不同． 8一 的苯环上含有一个甲基。正是由于四种 v 结构上 的差异，因而产生冼脱顺序的不同。在正相高效}葭相色谱 法测定 v 时，首先是 口一vl被洗出，其后是 B—vl、r v ，最后是 s—_v ；而在反相高效液相色谱法测定 时， 刚正好相反，最先流出的是 8_-vE．其后是 和 r vs，n—v 将最后被诜出。正相与反相商效液相色谱法相 比．前者四种 vl的分离度较好，特别是 B、 两种异构体 在正相高效液相色谱中能完全分开《见困 1和图 2)．这对 进一步研究天然 vE中各种异构体的抗氧性质具有重要 意义。因此，本研究采用正相高教液相色谱法测定 。 图 1显示的是 、口、 和 6四种 V 异构体在正相 硅胶桂止韵 HP 色谱 图 (流动相 ：正 己烷／异 丙酵 99．810 2，荧光检测器，澍赛光涟长 ：^ =292nm，发射 光波长； 曲=325nm)，d、B、 和 8四种 v 异构体在此 条件下可以完垒分离；图 2显示的是 a 8、 和 8四种 异梅体在 0Ds柱上的反相 I'[PLC色谱图(流动相 ：甲 醇／水 ．98．5／0．2；紫外测器，^ =292nm) 3．3 标准曲蟪的培倒和蛙性菇固 表 1 『一VE的标准曲线 40．96 102．4 4O9．6 512．0 1024．0 698．77 7923．07 35833．73 46932．97 99841．30 精密许取q— 对照品51 2mg．曲流动相溶掖适 量，使其藩解并定容至 50mL．精密吸取上述对照品藩液 适量．置于 25mL害量瓶中，加流动相溶液定容 ．摇匀，按 实验方法2．3薪述进行高效液相色谱分析．结果见表 1。 线 性 回 归 方 程 为 ： 100 16x一3600．73fr： 1999年第六期 {量 0．9996)，试验结果表明 ：a—V 在 41 0～1024．0p,g／ mL范围内线性 良好。 3．4 精密度试验 将含 q—v 浓度为 98．0p,g／mL左右的样品十份， 按照设定的色谱条件进行测定，计算五次进样的色谱峰 峰面积和 RSD值(结果见表 2)。天内 RSO值等于 2．Il， 天闻 RSD值等于 3 9I。后者 RSD值较高主要是受 Ⅱ一 v 稳定性的影响。 墨 != 箜 墨堕童墨 一 VE色谱峰峰 面积 平均值 RSD％(n=5) 3 5 回收率试验 精确称取已知 d—v 含量的样品 ．并分别加人与 各样品含量相 当的 a— vl对照品，按上述实验方法分 三十水平测定其 中a—V 含量，并计算回收率，试验结 果见表 3。Ⅱ一vl样品的平均回收率为 79 71 V~／g(P,SD 为 3．13％)。 表 3 一v 的回收窜 3．6 检谢限与定量限 检铡限是信噪比三倍时的被测物质浓度，定量限是 信噪比十倍 时的赦测物质浓度。测得 q—v 检 测浓度 维普资讯 http://www.cqvip.com 骤冷处理结合木霉制剂骂尹茄的双重保鲜研究 煎曼 拶 张渭 (贵州大学 贵阳 ·550025) 摘要 ：把刚采收的埠熟番茄果实经木霉制剂赴理 后 ，再王于一10一一5qc的冷空气中分别骤冷处理 如、40、60和 120rain．然后旁刺蓑八豪 己烯薄膜袋 ． 放在温度 20—22℃、相对湿度 80％ ．85％的条件 下贮蕞。贮蕞姑果表明：经木霉制荆协 同骤冷处理 的果实未发生冷害．腐烂率七对照低 4％ ．10％． 后熟正常，埠熟果实转缸时间比对照延迟 4，lOd． 达到食用成熟度的时间七对j醺推迟 8，22d．且成 熟后 果实鲜缸 ，色泽均匀．风味同对麒一样 良好。 美-词螅 曼苎：!坚 ；爰芝；j￡主 绿熟番茄果实。但绿热番茄果实在常温 (20。，25℃)下贮 藏 8一lOd就完全成熟．故贮期很短，意义不大。而番茄在 8℃以下贮藏又易遭受生理冷害，使果实局部或全部呈水 畏状软烂、果实表面出现褐色小圆斑、不能正常后熟、易 感病而腐烂“j。为了探索一种既能克服绿熟番茄在低温下 贮藏易发生冷害、又能使绿熟番茄在常温下延长贮藏期 ， 同时既能避开使用果蔬化学防腐剂带来的残毒问题 、 又 能降低腐烂率的方法 ．我们于 1992，1996年间在贵州农 学院食品科学系进行了生物木荤制剂结合骤冷处理对绿 热番茄果实的贮藏保鲜研究，w期为木荤制荆协同骤玲 处理对延长绿热番茄果实的正常后熟和商业贮运期、降 低绿熟番茄果实的贮藏腐烂率提供依据和参考。 1 材料与方法 11 材料 试验用木霉 由贵州大学生物技术学院食品科学系 。塑 堡野 促立戳成熟后的番茄果实难 于贮轰，旺擎的番茄果羹茵遣 热、腐烂等造成的损失极大，故商业上贮运番茄一般采用 为 7．42p,,l／g，定量浓度为 14．1411,,!／E。 3．7 IL—Vc在肇苏子油中的变化 表 4所 示为用黄 苏子 油捧 品进行 schnl烘箱法 (63±lqc)实验时，不同时间中所畏I得的 日一v。含量(作 为抗氧化剂加^到紫苏子油中，口_-v。的加^量分别为 0-01％、0·03％ 、0．05％)。袁 4中的数据均为三次测定 的平均值。 图 3是以在紫苏子 油中 旷一vl含量减少的百分比 来表示的。AklIt3中可以看出随实验时间的增加 ， q～ Ve在 紫 苏子 油 中的 含量 逐 渐减 少 ， 且 在 o．01％ 、 0_03％、0’05％三个浓度的添加量中．浓度较高的．其相 对损失量较少。 —_ ：．=-— —重芸—茎堑塑!堑!=坠鱼苎竖 墨 空白 0．01％ 0．03％ 0．05磊■ 0h 3 38 — 24h 49 ． 00 165．93 226 ．63 48h 24 ． 55 125．36 173 28 72h 22 ． 59 94．30 168 29 94h 13 ． 25 88．44 155 24 — 卫堕—一 ．!Q：!皇 塾：墅 !堡 21 4 小螭 剃用正相高效液相色谱测定 口一v。的方j击 ， 具有 方法简便、回收率和精密度良好等优点．如果将此方法 与过氧化值测定方法结合使用 ，可较好地掌握紫苏子油 及其它油脂的氧化过程，对研究 n—v。在油脂氧化过 程中的消耗情况具有非常重要 的作用。另外此方j击也 可用于测定油脂 中的 p、竹6一Ve，可为进一步研究天然 抗氧化剂一Ve在油脂中抗氧化行为提供详细的数据 。 参考文献： 【1JCuiKai， Din$Xiaolln．BasicStudie5onthenm loD — meatand Utilization ofd—Linolenic in Perillnoil from China．Proceedings： Intemtttiona]Symposium of New Approaehe~toFunction Cered~and Oils ． 1997， 27～275 [2]Hyo一~13／1Shin．JAOCS．1994． 71：619～623 [3J王晶，班向东 ．紫苏子油的应用和提取 ． 食品科 学，1996．(6)：59，60 、 维普资讯 http://www.cqvip.com