狂犬疫苗

狂犬疫苗 人用狂犬病疫苗效价测定法(NIH法) NIH法 是1990年规程要求使用的疫苗效力，将结检疫苗及参考疫苗分别以不同浓度的疫苗免疫小鼠，求50%有效剂量ED50。再按公式计算:待检苗EDED50/参考苗ED50*待检苗安瓶装量=待检苗相对效价。 本法系将供试品免疫小鼠后，产生相应的抗体，通过小鼠抗体水平的变化测定供试品的免疫原性。 试剂 稀释液(PBS) 量取0.9%磷酸二氢钾溶液75ml、2.4%磷酸氢二钠(NaHPO?12HO)溶液425ml、8.5%氯化钠溶液500ml，混合后加水至5000ml，242 调pH值至7.2,8.0。 -2攻击毒株CVS制备 启开毒种，稀释成10悬液，接种11,13g小鼠，不少于8只，每只脑内接种0.03ml，连续传2,3代，选择接种4,5天有典型狂犬病症状的小鼠脑组织，研磨后加入含2%马血清或小牛血清制成20%悬液，经每分钟1000转离心10分钟，取上清液经病毒滴定(用10只18,20g小鼠滴定)及无菌检查符合规定后作攻击毒用。 参考疫苗的稀释 参考疫苗用PBS稀释成1?25、1?125和1?625等稀释度。 供试品溶液的制备 供试品用PBS做5倍系列稀。测定法用不同稀释度的供试品及参考疫苗分别免疫12,14g小鼠16只，每只小鼠腹腔注射0.5ml，间隔1周再免疫1次。 小鼠于第一次免疫后14天，用经预先测定的含5,100个LD的病毒量进行脑内50 0-1-2-3攻击，每只0.03ml。同时将攻击毒稀释成10 、10、10 和 10进行毒力滴定，每个稀释度均不少于8只小鼠。小鼠攻击后逐日观察14天，并死亡情况，统计第5天后死亡和呈典型脑症状的小鼠。 计算供试品和参考疫苗ED值。 50 计算相对效力 P,T/S×d/d×D TS 式中P为供试品效价，IU/ml; T为供试品ED的倒数; 50 S为参考疫苗ED的倒数; 50 d为供试品的一次人用剂量，ml; T d为参考疫苗的一次人用剂量，ml; S D为参考疫苗的效价，IU/ml。 【附注】(1)动物免疫时应将疫苗保存在冰浴中。 (2)各组动物均应在同样条件下饲养。 0(3)攻击毒原病毒液(10 )注射的小鼠应80%以上死亡。 ,,，,,方法，效力测定狂犬病是由狂犬病毒引起的一种严重危害人类健康且致死率很高的病毒性传染病，迄今为止最有效的控制方法仍是进行狂犬病疫苗的预防接种。 人用狂犬病疫苗已广泛使用多年，生产工艺和疫苗质量都有了明显的改进和提高。国内目前使用的狂犬病疫苗为灭活原代地鼠肾细胞培养疫苗，并从一九九四年开始推广使用浓缩疫苗以期获得较高的免疫保护效果。 多年来狂犬病疫苗的效力试验一直用,，,动物法，由于其试验周期长，且易受试验动物质量、动物个体差异、试验者技术程度等因素的影响，并不能真正现疫苗中的病毒抗原含量。 通过用单克隆抗体制备双抗体夹心ELISA,快速检测狂犬病疫苗中狂犬病毒糖蛋白(G)的含量,将狂犬病疫苗的检定时间由28天缩短至2个工作日,以此缩短疫苗库存待检时间,提高疫苗的生产和销售效率,并最终替代NIH动物法.将待 ,检的狂犬病疫苗样品在同一性别12,14g昆明鼠体内作效力检定试验(NIH)同时用双抗体夹心ELISA检测狂犬病疫苗中狂犬病毒G蛋白含量,用Microsoft Office Excel做出标准品和各样品疫苗的线性关系图并计算出疫苗效力值E-NIH. 结果用双抗体夹心ELISA所得的E-NIH与对应的小鼠效力试验所得结果M-NIH之间呈正相关性;同一批狂犬病疫苗分次测得E-NIH值在2.41,5.85之间,而相应的M-NIH值在5.11,10.19之间.从而得出E-NIH与相应的M-NIH之间存在明显的线性关系;与NIH法比较,ELISA具有重复性好、成本低、快速等优点;用双抗体夹心ELISA替代小鼠效力试验是可能并可行的.