野油菜黄单胞菌原生质体分泌黄原胶的电镜观察

野油菜黄单胞菌原生质体分泌黄原胶的电镜观察 ( ) 接 要 : 经透射电镜观察首次发现野油菜黄单胞菌 Xanthomonas campestris 原生质体在以 蔗糖为底物的高渗营养液中 , 能合成并分泌丝状黄原胶 。 关键词 : 野油菜黄单胞菌原 , 原生质体 , 黄原胶 () 中图分类号 : Q93 文献识标码 : A 文章编号 : 025322654 20010520018203 S TU D Y ON S EC R E T ED XA N T HA N B Y T H E P RO TO PL AS T O F XANTHOMONAS CAMPESTRIS DIAO Hu2Xin L IANG Xing2J ie L IANG Feng2L ai L IU Ru2Lin ( )The dep artment of Microbiology , Nai Kai University , TlanJ in 300071 A bs t r ct : we first find that the protoplast of Xanthomonas campestris can synthesize and secret Xanthan in the high permeable nutrition containing sucrose as substrate . Ke y w o r d : Xanthomonas campestris , Protoplast , Xanthan ( ) ( ) 黄原胶 Xanthan是野油菜黄单胞菌 Xa nthomonas campestris 合成并分泌的一种 用途十分广泛的微生物胞外多糖 。研究发现 , 处于对数生长期的菌体细胞不合成分泌 [ 1,3 ] 丝状黄原胶 , 只有终止生长的细胞才合成分泌丝状黄原胶。控制菌体细胞壁多糖 和黄原胶胞外多糖合成的共同的糖基载体脂是存在于细胞膜的十一聚类异戊二烯醇磷 [ 1 ] 酸脂。膜内该物质含量甚微时 , 首先用于胞壁多糖合成促使细胞生长 , 待细胞终止 [ 4 ] 生长后才用于黄原胶合成 。最新研究明, 黄原胶分子是在终止生长的菌体细胞膜 的糖基载体脂上合成的 , 糖基载体脂将其运往膜外 , 使细胞分泌丝状黄原胶 。据此 , 我们认为人工制备的无生长能力的野油菜黄单胞菌原生质体 , 在适宜的高渗营养液中 培养 , 能合成并分泌丝状黄原胶 。但该研究国内外尚未见报道 。我们在制备原生质体 的基础上 , 进行了其黄原胶合成与分泌的初步探讨 , 本文报道其结果 。 1 与方法 111 菌种 ( ) 野油菜黄单胞菌 X . campestris N1 K201 , 由南开大学微生物系分离并保存 。 112 液体培养基与培养条件 培养 基 : 蔗 糖 10g , 蛋 白 胨 5g , 牛 肉 膏 3g , 酵 母 膏 1g , 蒸 溜 水 配 制 定 容 1L , p H710 。培养条件 : 250mL , 锥形瓶分装 50mL , 8 层纱布扎瓶口 , 灭菌 。接种 N. K201 菌苔 5 环 , 置于 220r/ min 旋转摇床 28 ?培养 16h , 菌体细胞处于对数生长期 , 不合成分 泌黄原胶 。培养至 24h , 合成并分泌黄原胶 。 113 原生质体制备与高渗培养液培养 将处于对数生长期且不合成分泌黄原胶的 N. K201 菌体细胞 , 用 0105mol/ L EDTA μ和 011 %SDS 处理 , 溶解除外壁层脂多糖 , 用高渗溶液悬浮菌体细胞 , 加入 10g/ mL 溶 菌酶液 , 30 ?酶解 30min , 溶解消化内壁层肽聚糖离心收集原生质体 。将未合成分泌黄 原胶的 , 原生质体置于以蔗糖为底 物 的 高 渗 培 养 液 培 养 中 , 70r/ min 、28 ?振 荡 培 养 72h , 用透射电镜观察该原生质体是否合成分泌黄原胶 。 114 透射电镜观察 将制备的各种待观察样品 , 用重蒸水适当稀释 , 沾铜网 , 7角真空喷镀钯铱合?金 , 或用钼酸铵负染色 , 用透射电镜观察 。 2 结果 211 处于对数生长期菌体细胞与终止生长菌体细胞透射电镜观察结果 图 1 是两类不同菌体细 胞经钼酸铵负染色透射 电 镜 显 微 照 片 。从 图 1A 看 到 , 处 于 对 数 生 长期分裂的菌体细胞不 合成 分 泌 丝 状 黄 原 胶 ; 而从 图 1B 看 到 , 对 数 生长期后终止分裂的菌 体细胞合成分泌丝状黄 原胶 。 212 原生质体透射电镜观察结果 图 2A 是 对 数 生 长 期菌体细胞原生质体钼 酸铵负染色透射电镜显 微照 片 : 图 2B 是 该 类 原生质体在蔗糖为底物 的高渗培养液中继续振 荡培养后 , 其原生质体 7角?真空喷镀钯铱合金 后 透 射 电 镜 显 微 照 片 。 从图 2A 看 到 , 对 数 生 长期菌体细胞原生质体 不合成分泌黄原胶 。而 该类原生质体在蔗糖为底物的高渗培养液中继续培养能合成分泌丝状黄原胶 ,如图 2B - 野油菜黄单胞菌是 G细菌 , 细胞壁主要由脂多糖和肽聚糖组成 。先由 EDTA 和SDS 消化脂多糖 , 再用溶菌酶在适宜条件下去除肽聚糖是制备原生质的好方法 。 本研究 首次发现野油菜黄单胞菌原生质在蔗糖为底物的高渗培养液中继续培养 ,合成 并分泌黄原胶 。这一发现 ,不仅直观地证明了 Leipi . L 等提出的黄原胶分子在膜内糖基载体脂上合成并从膜内运送到膜外的科学论断 ,而且证明原生质体失去合成细胞壁能力后其膜 内的糖基载体脂完全用于胞外多糖黄原胶的合成 ,故原生质体合成分泌黄原胶 。 参 考 文 献 1 Sutherland I W. Advance in microbial Physiology , 1982 , 18 : 143,213 . 2 刁虎欣 , 梁凤来 , 刘如林 , 等. 南开大学学报 , 1988 , 2 : 34,43 . () 3 刁虎欣 , 赵大健. 微生物学杂志 , 1990 , 10 1 2: 136,141 . () 4 LeiPi L , Couso R , Dan KERT M. Jounal of Bacteriology , 1993 , 175 9: 2490,2500 . 一株地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶的研究 I. 12 2222 黄红英方海红刘爱民夏 颍吕正兵张林普 12( ( ) ) 江苏省农业科学院土壤肥料研究所 南京 210014安徽师范大学生命科学院 芜湖 241000 摘 要 : 从皖北盐碱地土样中分离到 011 菌株 , 对其进行了菌种鉴定以及胞外碱性蛋白酶的初 步研究 。结果表明 : 011 菌株符合地衣芽孢杆菌种的特征 , 但该菌芽孢端生 、孢囊膨大 、中度 耐盐 、高度耐碱 ,可在 NaCl 浓度为 13 %和 p H11 的培养基中生长 ,这些特征又不同于该种几个 模式株 ,因而将 011 菌株鉴定为地衣芽孢杆菌的一个亚种 ,命名为地衣芽 孢 杆 菌 砀 山 亚 种( ) Bacillus lichenif ormis subsp . dangshanensis。该菌在发酵培养基中能产生较高产量的胞外碱性 () 蛋白酶 725u/ mL 。酶的最适作用条件 :60 ?、p H9. 0 ,该酶在 p H6. 0,11 范围内稳定 。 关键词 : 地衣芽孢杆菌亚种 , 菌种鉴定 , 碱性蛋白酶 () 中图分类号 : Q93 文献标识码 : A 文章编号 : 025322654 20010520020205 S TU D Y ON T H E AL KAL I N E P RO T EAS E S EC R E TI N G F RO M A BACILL US L ICH ENI FO RMIS I . HUANG Hong2Ying FANG Hai2Hong L IU Ai2Ming XIA Ying L üZheng2Bing ZHANG Lin2Pu ( )Institute of Soil and Fertilizer , J iangsu Academy of Agriculture Science , Nanjing 210014 ( )College of Life Science , Anhui Normal University , Wuhu 241000 A bs t r a ct : Strain 011 isolated from salt2soda soil in the north of Anhui province was identified , and its alkaline pro2 tease was studied . Results indicated it p ossesses characters common to Bacillus licheniformis , but differs from known typical strain of Bacillus licheniformis in sp orange shape 、sp ore location and tolerant degree to salt and alkalinity .