鱼胆草提取液中獐牙菜苦苷的稳定性考察

鱼胆草提取液中獐牙菜苦苷的稳定性考察 鱼胆草提取液中獐牙菜苦苷的稳定性考察 2009年8月第29卷第4期 Aug.2009Vo1.29No.4 湖南中医药大学 JournalofTCMUniv.ofHu— na— n47 鱼胆草提取液中獐牙菜苦苷的稳定性考察 ,刘诗青 彭买姣.夏新华?,李淑辉,杨平 (湖南中医药大学药学院,湖南长沙410208) (摘要】目的探讨鱼胆草提取液浓缩干燥过程中不同因素对獐牙菜苦苷稳定性的影响规律.方法采用HPLC 法测定獐牙菜苦苷的含量,考察溶剂,温度,pH值等对獐牙莱苦苷稳定性的影响.色谱拄为ApolloC(250mmx 4.6nltln,5m】;流动相为甲醇一乙腈一水(II:4:85);流速为lmL/min;柱温为30?;检辨I波长为237nnl.结果 温度在5O6ooC时,獐牙莱苦苷含量为0.98一1.O5g;在pH5,6时,獐牙莱苦苷含量在0.9884—0.9479g之间, 干燥时.獐牙菜苦苷含量在0.1795--0.1749g之问,说明此条件下獐牙菜苦苷降解较少.结论温度在50-60? 与pH5之间对獐牙莱苦苷稳定性影响较大,为鱼胆草制剂生产工艺的研究提供参考. [关键词】鱼胆草;獐牙菜苦苷;稳定性;I-IPI.~法 【中圈分类号】R284.1(文献标识码】B[文章编号】1674_cr70X(2009)o4-0o47-03 Studyonstabilityofswertiamarininextract ofHerbaSwertiaeDavidi PENGMai-jiao,XIAXin-hua,LIShu-hui,YANGPing,LIUShi-qing (TCMUniversit)rofHunan,Changsha,Hunan410208,China) [Keywords}HerbaSwertiaeDavidi;swertiamarin;Stability;HPLC 鱼胆草Swert/aday/d/Franch.系龙胆科獐牙菜属植 物,又名川东獐牙菜,以全草入药,性寒,味苦,是湘西土 家族苗族自治州民间常用于治疗肝炎,胆囊炎,结膜炎, 痢疾等疾病的草药旧.獐牙菜苦苷(sweaiamarin)是其中的 主要有效成分四.自20世纪七,八十年代国内就有不少科 研院所对鱼胆草的成分进行研究,少见对鱼胆草提取工 艺及稳定性的深入探讨.獐芽菜苦苷的裂环环烯醚萜结 构很不稳定,在酸,碱,高热环境很容易降解,从而影响其 功效.因此,本文首次考察了温度,溶剂,pH值等对獐牙 菜苦苷稳定性的影响.以便为鱼胆草制剂的生产与质量 控制提供实验依据. 1实验材料 1.1仪器 岛津LC一1OAT型高效液相色谱仪(shimadzucorpora. tionassembledinChina).岛津sPD一10A型紫外器 (shimadzucorporationassembledinChina).N一3OOO色谱 工作站(浙江大学智能研究所);METrLERTOLEDOSG2 型pH计(梅特勒一托利多仪器有限公司);RE一52A型旋转 蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);SHB一3型循环水多用真 空泵(郑州杜甫仪器厂);DK一$22电热恒温水浴锅(上海 精宏实验仪器设备有限公司);8o_l型离心沉淀机(江苏 金坛市中大仪器厂). 1.2试药 獐牙菜苦苷对照品(批号:0785-200203,由中国药品 生物制品研究所提供);鱼胆草药材购自湖南省医药公 司;乙腈,甲醇(szChemicalsUisan680—160.Korea)为色 谱纯;其余试剂均为纯. (收稿日期】20o8一l2—3O (作者简介】彭买姣(1984._),女,湖南娄底人,硕士研究生,主要从事中药新制剂工艺 与质量标准的研究. [通讯作者】夏新华,男,教授,博士研究生导师,E-mail:xlaxinhua001@163.com. 湖南中医药大学2009年第29卷 2方法与结果0.3909g,说明温度越高,其含量下降越明显(见图2). 2.1鱼胆草浓缩液的制备 称取鱼胆草适量.剪碎,加50%乙醇浸泡0.5h,加热 回流提取2次,加醇量分别为药材的lO,8倍量,提取时 间分别为1.5,1.0h,收集提取液,真空浓缩至相对密度为 1.15(生药浓度为0.3rdmL),即得. 2.2獐牙菜苦苷的含量测定 色谱条件参照药典2005版第二部青叶胆片中獐芽 菜苦的含量测定I|l. 2.2.1色谱条件ApolloCl8色谱柱(250minx4.6lnln, 5);甲醇一乙腈水(11:4:85)为流动相;检测波长为 237rim;流速为1mlJmin;柱温30?.理论板数以獐牙 菜苦苷峰计算应不低于2000. 2.2.2对照品溶液的制备精密称取獐牙菜苦苷对照品 适量,加甲醇制成每1mL含0.126nag的溶液. 2.2-3供试品溶液的制备与测定精密量取提取液 5mL,加入甲醇4mL,离心20rain(3000r/rain),放冷, 用甲醇定容至10mL,摇匀,0.45Izm微孔滤膜滤过,取续 滤液,即得.精密量取对照品溶液与供试品溶液适量,注 入高效液相色谱仪,测定峰面积,计算獐牙菜苦苷含量. 2.3不同溶剂对獐牙菜苦苷稳定性的影响 取鱼胆草浓缩液30mL,分成3等份,其中2份加乙 醇使含醇量分别为50%,7O%,第3份直接加水,均定容至 相应体积,并置于60?恒温水浴中,于第3天取样测定 含量.结果明,獐牙菜苦苷在不同溶剂中的稳定性差异 不大,水中獐牙菜苦苷含量为300.07mg,而在醇溶液中 含量为243.82nag.在水溶液中的稳定性略高于在醇溶液 中的稳定性观察见图1. 一4O 图1溶剂对獐牙菜苦苷的影响柱形图 2.4不同温度对獐牙菜苦苷稳定性的影响 取鱼胆草浓缩液40mL,分成4等份,分别置于50, 60,70,80C恒温水浴中,于第3天取样测定含量.结果表 明,温度对獐牙菜苦苷的稳定性影响较大,在50?时獐牙 菜苦苷含量达到了1.0507g,而在80cI=时含量下降到了 1. .. 嚣o. 辩丑0. o- 爨 温度(?) 图2不同温度对獐牙菜苦苷的影响散点图 2,不同pH对鱼胆草药液中獐牙菜苦苷稳定性的影响 取鱼胆草浓缩液50mL,分成5等份,参照药典pH测 定方法.用o.3mol/L硫酸溶液和0.5mol/L氢氧化钠溶液 通过酸度计调节药液至不同的pU值,再置于6o?恒温水 浴中放置3d,取样测定含量.另取鱼胆草浓缩液50mL, 分成5等份,用酸碱分别调节至不同的pH值,于60?真 空干燥7d,取样测定含量.结果表明,pH对獐牙菜苦苷的 稳定性有一定的影响,当药液pH5时獐牙菜苦苷在溶 液中的含量约在0.9884^0.9479g之间.在干燥过程中. 当pH5-6时变化不明显.獐牙菜苦苷含量约在0.1795, 0.1749g之间(见图3—4).说明在pH5~6时,獐牙菜苦苷 在溶液及干燥过程中均具有较好的稳定性. l? u 纂o- {拉0. o. 柢0. 嚣O . PH值 图3不同pH对药液中獐牙菜苦苷的影响散点图 ^ ? V 鲻 缸 杠 {:? {cI《 搬 糕 PH僵 图4鱼胆草干燥中pH对獐牙菜苦苷的影响散点图 2.6不同加热时间对獐牙菜苦苷稳定性的影响嘲 取浓缩液适量,调pH5,置于60cI=恒温水浴中,定 时取样测定含量.结果表明,在实验条件下,獐牙菜苦苷 含量随加热时间的延长呈较明显的下降趋势,在第l天 獐牙菜苦苷含量为1.1477g,而到第7天,獐牙菜苦苷含 量下降到0.9995g,但在2d内含量变化不明显(图5). 第4期彭买姣.等鱼胆草提取液中獐牙菜苦苷的稳定性考察49 V 一 缸 :I扭 糟? }IIc 钕 繇 t/d 圈5不同加热时间对獐牙菜苦苷含量的影响敌点圈 3讨论 实验表明,溶剂,pH值,温度及加热时间对獐牙菜苦 苷的稳定性均具有不同程度的影响.因此,在鱼胆草制剂 的生产过程中.应注意控制上述各种因素.尤其是在提取 过程中,最好控制温度在80?以下,且尽量减少提取时 间.建议含鱼胆草的药液在浓缩干燥过程中.调节pH5, 6,温度控制在50-60?.并缩短药液受热时间,以减少有 效成分獐牙菜苦苷的损失. 在受热情况下.鱼胆草中獐牙菜苦苷在水溶液中的 稳定性似乎稍大于在醇溶液中.另外,在不同pH条件下, 鱼胆草中獐牙菜苦苷在提取液浓缩干燥过程中表现的热 稳定性变化趋势与在静态提取液中的情况基本相似,进 一 步说明鱼胆草提取液在加热处理过程中控{旨6其pH值 是必要的,并为以后鱼胆草制剂生产工艺的研究提供参 考. 参考文献: 【1】黄衡宇,李鹏,陈义光,鱼胆草的自然资源初步研究【J】.中草 药,2002,33(5):466--468. 【2]2彭晓春,王辉宪,陈仕国,等.鱼胆草药用的有效化学成分哪.吉首 大学f自然科学版),2001,3(22)-.59-60. 【3】孙文基,绳金房.天然活性成分简明手册【M】.北京:中国医药科技 出版社.1998:539. 【4】国家药典委员会.中华人民共和国药典【s】.北京:化学工业出版 社.2005:485. [5】易建利.储存时间对牡丹皮药材和饮片中丹皮酚含量的影响叨.湖 南中医药大学,2008,3(28):42-_43. (本文缡辑徐爱良) (上接第33页) 3讨论 川芎,天麻和复方芎麻汤挥发油中分别定性了60,23 和76个组分.复方芎麻汤与川芎,天麻的共有组分分别 为27个和7个.三者的共有组分为4个.即:Aceticacid, butylester,Pentadecanoicacid,n—Hexadecanoicacid(棕榈 酸)和9,12一Octadeeadienoicacid,methylester(9,12一十八 碳二烯酸甲醋).由表1可见,川芎挥发油相对含量大于 3%的组分为:Ligustilide(藁本内酯),Fenipentol,1(3l{)一 Isobenzofuranone,3一butylidene一(丁烯基酞内醣),l— Propanone,l—(2,4-dimethylpheny1)-(1-(2,4一二甲苯基-1- 丙酮);天麻挥发油相对含量大于3%的组分为:n—Hexade. canoicacid(棕榈酸),9,12一Octadecadienoicacid,methyles— ter(9,12一十八碳二烯酸甲醋),9'l2,15一Octadeeatrienoic acid,ethylester,(Z,z,z)一(9,12,15一十八碳二烯酸乙醋), Dihydrocoumarin,5,7,8一trimethyl一(5'7,8一三甲基二氢香豆 素);芎麻汤挥发油相对含量大于3%的组分为:Ligustilide (藁本内酯),Benzenemethanol,a-ethyl一(oc一乙基苯甲醇), n—Hexadecanoicacid(棕榈酸),9,12一Octadecadienoic acid,methylester(9,12一十八碳二烯酸甲酯1. 复方芎麻汤挥发油检出46个新组分.但含量都较 低.川芎挥发油中有33种成分在复方中并未检测到,其 中除Fenipentol外含量都很低.Octadccanoicacid(十八烷 酸)同时存在于川芎和天麻挥发油中,但在复方挥发油中 并未检测到.从挥发油组分数量及含量看,复方芎麻汤挥 发油组分主要来自单味药川芎,但化学组分种类基本为 两单味药的加和,单味药挥发油组分的含量在复方中发 生了变化. 参考文献: 【1】NatioT,KubotaKShimodaY,eta1.Effectsofconstituentsin aChineseexudednl吕llgt~tieumChuanxiongrhizome oncasocontractionandbloodviscosity啊.NatMed,1995,(49): 288-290. 【2】杨光明,蔡宝昌,王天山,等.川芎化学成分的气相一质谱与指纹图 谱研究【J】.西北药学杂志,2002,l7(4):l47一l50. 【3】粱明金,贺浪冲,李永茂.川芎有效部位气相色谱一质谱研究与指纹 图谱分析册.质谱.2004,25(3):150-154. 【4】姚二民,张竣松,王花俊,等.用气相色谱法定量分析川芎挥发油的 化学成分【J1.日用化学I@,2006,36(5):328-330. 【5】慕善学,高广慧,封国铮,等.中药材川芎质量控制的气相色谱指纹 图谱研究们.中南药学.2007,5(2):179—182. 【6】李艳辉,易进海,官艳丽,等.超临界萃取川芎精油的GC/MS分析【J】. 分析试验室,2007.26(5):106-108. r7】李晓如,赵君,兰正刚,等.药对川芎一羌活挥发油的气一质联用分 析与化学计量学解析m.中南大学(自然科学版),2007,38(4】: 681—685. 【8】李晓如,周涛,梁逸曾,等.药对川芎一羌活与其单味药挥发油共 有组分的分析啊.药学,2007,42(1o】:l082一l086. (本文编辑徐爱良)