【doc】重组人肝再生增强因子对肝星状细胞基质分解素—1及其抑制因子 …

【doc】重组人肝再生增强因子对肝星状细胞基质分解素—1及其抑制因子 … 重组人肝再生增强因子对肝星状细胞基质 分解素—1及其抑制因子 … ? 284?解放军医学杂志2000年8月第25卷第4期MedJChinPLAv25No4A8000 表2观察组和对照组各指标比较 往:与对照组比较,(1)P<O.05 .血浆,不仅能提高胶体渗透压,减轻组织水肿,而且 有利于循环稳定.观察组术后经补充使Alb恢复 3.1自体输血可导致术后轻度贫血,但不影响组织正常,代血浆用量达到对照组的4倍,循环维持良 氧供自体输血时尽管采取了严格的血液保护措好,CVP保持在满意的水平.据作者的经验及计 施,使术中失血较对照组明显减少,但由于不可控失算,每得到洗涤红细胞350ml,应补充白蛋白15g左 血因素的存在,术后仍有部分患者出现轻度贫血.右.体外循环剩余机血应全部回输,不要用血液回 本观察组有8例术后次晨Hb低于正常(98,107收机洗涤,以防丢失过多的蛋白. g/L).但据文献..报道,对病情轻到中度,手术过综上所述,自体输血的影响主要在于术后早期 程顺利的患者,术后Hb在70,80g/L并不影响其容量不足及血浆白蛋白下降,而贫血与凝血障碍并 此,对术前血红蛋白正组织供氧和顺利恢复.观察组患者术后早期PaO不严重.因 常的成年患者,在 在正常范围,顺利脱离呼吸机,说明组织供氧无严重采用综合节血措施的同时,妥善处理好自体输血对 障碍.围术早期带来的影响,将使这一更加安全可靠. 3.2自体输血对术后出凝血状况无严重影响术 前放血及血液稀释均对凝血因子有保护作用,观察参考文- 组术后凝血机制并无明显异常,当晚开始抗凝治疗,1王小冒?邓硬曾.不用库血的体外循环心胜手术.中国循环杂志, 引流量与输血组相比无显着差异,FIB始终处于正,12~94 常范围,术后先下降后升高与血液早期稀释后期浓曼蝙-心血管麻醉及体外循环?北京^民卫生出版社, 缩有关,PT延长与患者接受抗凝治疗有关.3wt盯Js,R}rdR,蹦c.班6埘,.mi明. 3.3自体输血造成术后早期血浆白蛋白值低于正dstc,Ic啪prehewl.bloodm1.vatl.p 嘶m?一 常,而代血浆的用量较对照组增加约4倍术前放dhcoperations.JThoracCardlovascSurg.1992,103,1001 血同时补液使血液稀释度相对增大,而洗血球时血(1999—04—13收稿8000-05—20崔回 浆成分又被丢失,使观察组术后早期血浆Alb明显. , (本文编辑周国泰 , 下降,胶体渗透压降低.术后积极补充白蛋白及代/,洲',/ 一 2g7,.重组人肝再生增强因子对 肝星状细胞基质分解素一1 及其抑制因子基因表达的调节? 关蕾词 金属蛋白酶组织抑制因子 中胃圈资料分娄号R575.2 肝再生增强因子(ALR)是Ha 从新生大鼠肝组织中克隆的一种理化性质与肝刺激 物(HSS)相似的促肝细胞增殖因子.新近,我国学 汪花安 王宝思0 人类同源分子,并通过构 建原核表达载体,获高效表达菌株,进而获得重组 ijhALR.初步研究表明hALR对四氯化碳中毒性及 ?国家863赘助项目(编号863-108—08-051)全军医学重点实 验室科研基金资助谭置;0北京友谊医院肝痛研究中心f@军事医 学科学院放射医学研究所 一 一 一 一懈一鲵 解放军医学杂志2000年8月第25卷第4期MedjChinPLAV25NoAug 免疫损伤性大鼠肝纤维化均有明显的防治作 用..本文拟通过观察hALR对肝星状细胞基质 分解素一1(MMP)及金属蛋白酶组织抑制因子一1 (TIMP1)基因表达的影响,从细胞外基质降解代谢 的角度探讨hALR抗肝纤维化的机制 1材料与方诖 常规方法培养肝星状细胞.用Promega公司 生产的总RNA分离系统(totalRNAisolationsys— tem)提取肝星状细胞总RNA.RNA提取工作在 标本留取后1周内进行.采用分光光度法测定提取 的总RNA含量及纯度,O./O132s.需在l_8,2.0 间.采用25l逆转录反应体系合成eDNA;含待测 RNA2ttg,AMV30U,RNA酶抑制剂4Ou,Oligdt (15Primer)50~g,/ml及适量dNTP(10retool/L), 5×RTbuffer,42?反应1h;g5?5min灭活 AMV. 共扩增PCR及扩增产物定量参照Noonan 等"的方法.基质分解素一1(MMP:),金属蛋白酶 组织抑制因子一1(TIMP)引物的和内参对照口一 actin的引物设计参照Genebank资料及Liehtingh— agenR等的设计. PCR反应体系为20l,内含eDNA2tLl,10× buffer2l,4×dNTP(2retool/L)2l,MME3(或 TIMP】),口一aetin引物(10ttmo1./L)各2l,Tag酶 1U.用水补至20IPCR反应在0.2ml薄壁管中 进行,用毛细管PCR仪扩增.PCR反应参数为: 94?预变性2rain;94?变性30s,55?退火30s, 72?延伸50s,30个循环;72?后延伸7rain.扩增 产物在2琼脂糖凝胶上进行电泳,MMP, TIMP,及~aetin的扩增产物分别为194bp,563hp 和234bp.扩增产物用凝胶成像系统进行定量分 析,用MMP.(或TIMP)/日一aetin的比值表示 MMP(或TIMP)的相对表达水平. 2结果 2.1hALR对肝星状细胞MM基因表达的影响 由表1,图1,4可见hALR三组肝星状细胞MMP. 基因表达在8,24,48,72h4个时间点均明显高于对 照组;最高值均出现于24~48h;小剂量组为对照组 的2倍,中,大剂量组为对照组的3倍. ?285? 裹1hALR对HSC-T6细胞MMP基因表达的影响 注:(1)与对照组比较P<O.Ol 150bp 30Ohp 500bp 750b口 1000bp 固1HSc_T6细胞MM基因的表达 第123,4遭分捌为培养8,甜,4872h|第5道为PCRMar~r 从大翻小为1(K10,750,500,300,150b口 _150bp3o0500bp750bp1004)bp围2小剂量hALR对HSc__r6细胞MMP 基因表达的影响 第1,2,3,4道分别为加hALR(2ng/m1)~824,48,72h;第5道 为PCRMarker-从大弼小为1000,750,500.300,150bp 2.2hALR对肝星状细胞TIMP基因表达的影响 由表2和图5,8可见小剂量hALR组肝星状细胞 TIMP基因表达水平在8,24h与对照组差异无显 着性意义(P>0.05);48,72h高于对照组,为对照组 的3倍.中剂量hALR组肝星状细胞TIMP基因 表达水平在8,24,48,72h均高于对照组;最高值提 前至24h出现太剂量hALR组肝星状细胞 ? 286?解放军医学杂志2000年8月第25卷第4期MedJChinPLAVol25No4Aug2000 TIMP基因表达水平在8,24,48h,三个时间点与对 照组差异无显着性意义(P>O.05);72h时略高于 对照组,但两者差异无显着性意义(P>O.05). 圈4大剂量hALR对HSC-T6细胞MMP基 因表达的影响 第1…234道分别为加hAIR(200ng/m])后8,24.48,72h;第5 道为PCRMark~.从大到小为1000,7,50,500,300,150bp 衰2hALR对HSC-T6细胞TIMP基因表达的影响 挂(1)与对jfl{组比较P<仉0l 150bp 300bp 50Obp ?50bp 1000bp 圈5HSC-T6细胞TIMP基因的表达 第1.2.34遭分捌为培养8,24.48,72h;第5道为PCRMarker 从大到小为100o,750500,300,150bp _150bp300bp500bp750bplO00bp圈6小剂量hALR对HSC-T6细胞TIMP 基因表达的影响 第1,2,3,4道分别为加hALR(2ng/mr)后8,24.48,72h,第5道 为PCRM~ker,从大翻小为1000,750,500.300,150bp l2345 30@ 500bp 750 1000bp 圈7中剂量hALR对HSC-T6细胞TIMP基因 表达的影响 第1,2,3,4道分别为加hALR(20ng/m])后8,24,48,72h}第5 道为PCRMarker,从大翻小为1000,750,500300,150bp 150bp 300bp 500bp 750bp 100obD 圈8大剂量hALR对HSC-T6细胞TIMP~ 基因表达的影响 第1.2,3,4道分别为加hALR(200rig/m])~8,24,48,72h;第5 道为PCRM~ker,从大翻小为1000,750,500.300,150bp 解放军医学杂志2000年8月第2j卷第4期MedJChinPIAVol25No4Aug8000 3讨论 肝纤维化为细胞外基质(ECM)过度沉积所致, 其发生与肝脏中ECM的合成代谢及降解代谢失衡 有关.近来的研究表明:肝问质细胞之一的肝星状 细胞(HSC)在肝纤维化的发生.发展中发挥了重要 作用.HSC不仅是EcM的主要细胞来源,也是参 与ECM降解代谢的基质金属蛋白酶(MMPs)及其 组织抑制因子(TIMPs)的主要细胞来源.一些细 胞因子,生长因子通过调控肝星状细胞ECM, MMPs.TIMPs的合成与分泌在肝纤维化形成中起 作用.hALR是否也是通过调节肝星状细胞来发挥 其抗肝纤维化活性的呢?这是我们非常关心的问 题.本文报道了hALR对MMP.及TIMP基因表 达的影响.结果提示:hALR可促进肝星状细胞的 MMP.的基因表达,因而可通过促进ECM降解发 挥其抗肝纤维化活性.但hALR增强TIMP基因 的表达则可促进肝纤维化的形成.这又如何解释 昵?从本研究中可见中.小剂量hALR对TIMP. 基因表达有促进作用,而大剂量hALR对TIMP 基因表达影响并不明显.我们既往的研究表明:大 剂量hALR抗肝纤维化的效果更明显0,这似乎 支持本研究的结果.另外MMPs除MMP外尚包 括其它酶类,如MMP,MMP2,MMP.等;hALR是 否影响这些酶的台成与分泌,尚不清楚.况且 MMPs,TIMPs仅反映了ECM降解代谢的情况, hALR是否可通过抑制细胞外基质的合成代谢发挥 其抗肝纤维化作用呢?对这些问题我们正在研究之 中. hALR调节肝星状细胞MMPs,TIMP基因表 ? 287? 达的机制尚不清楚.是通过原癌基因产物c-Fos和 cJun的表达来完成,还是与MMPs启动区活化 蛋白一1(AP-1)结合位点有关.?对这些问题我们 正在进行进一步研究. 参考文献 1HagiyaM,FraneavillaAtPolimemeeLela1.Cloningandse— quenceanalysisottherataugmenterofliverregeneration(ALR) gene}ExpressionofbiologicallyactivereeomhinaatALRand demonstrationoftissuedistdhutionProNatlAcadSciUSA. 1994,91:8142 2扬晓明,邱冕华,谢玲等.新型人肝再生增强因子的分子克隆及 其性曲研究.中国科学,1997,27(5):463 3王爱民,橱晓明,郭瑞峰等.重组人肝再生增强因子对大鼠宴验 性肝野维化的保护怍用.中华医学杂志,1998,78(9).707 4王爱民,孝培建,杨晓明等.重组人肝再生增强因子可预防免疫 损伤性肝野维化的形成.解放军医学杂志,1999.24(4);259 5FrEedmanSLtLal,A,WongLeta1.HSC-T6cells,Anim mOna】idrathepaticste[1atecelllineHepatology,1997.26 (4ptS);338A 6NoonanKEtBeckC,HolzmayerTAel.Ouandtativeanaly- sisofMDRI(mulddrngresistance)geaeexpressioninhuman tum~-sbypolymerasechainreactiomProcNatlAeadSciUSA, 1990,87:7160 7LiehtinghngenR,HelmhrechtT,Ar?dtBel口.Expression p目tternofmatrixmetaltoproteinases_nhumanliverEurJClin ChemClinBiochem,1995,33:65 8BrennerDAtOharaM,AngelPeta1.Prolongedactivation junandcollngenasegenebytumornecrosis&吐0ra.Nature. 1989.3370661 9KerrLD,HoltJTtMatrisionLMela1.Growthfactorsregu- latetransirtgeaeexpressionbve-FosdepeadentandF?de_ pendentpathwaySteae,1988,242I1424 (199911-03收稿2000-0428售回) (本文 287人乳头瘤病毒与大肠癌相关性研究 ?京蝣弛院妻主妻咎 美键塾兰堕塑量}癌;大肠时喝 中国圉书资料分娄柏?HPV. 确灵性 大肠癌是常见的消化道恶性肿瘤,近年来我国 大肠癌发病率和死亡率有呈逐年上升趋势,但其病 因及发生机制目前并不十分清楚.许多证据表明, 人乳头瘤病毒(HPV)与人类肿瘤关系密切,因此 HPV与大肠癌的关系目前也越来越受到关注.为 了解大肠疾病中HPV感染情况,以明确HPV与大 肠癌的关系,作者对112倒结肠镜活检标本进行了 HPV检测,结果报道如下. 1材料与方法 1.1PCR模板DNA制备通过结肠镜检查,获取 ?中国预防医学科学院病毒学研究所