脑脉通对栓塞性脑缺血大鼠动脉溶栓治疗时间窗的影响

脑脉通对栓塞性脑缺血大鼠动脉溶栓治疗时间窗的影响 脑脉通对栓塞性脑缺血大鼠动脉溶栓治疗 时间窗的影响 中医杂志2008年第49卷第2期JournalofTraditionalChineseMedicine,2008,Vo1.49,No.2?l63? 脑脉通对栓塞性脑缺血大鼠动脉 溶栓治疗时间窗的影响 李建生王冬刘敬霞.郭晓燕孙捷李宁苏静 (1.河南中医学院老年医学研究所,郑州市金水路l号,450003; 2.河南省洛阳市妇女儿童保健中,OJL童医院;3.北京中医药火学) [摘要]目的观察脑脉通对血栓栓塞性脑缺血大鼠的保护作用及对溶栓治疗时间窗的影响.方法大鼠随机分为假手术组, 模型组,尿激酶溶栓组(溶栓组).脑脉通组,脑脉通联合尿激酶组(联合组).自体血栓结合线栓阻塞大鼠大脑中动脉制备血栓栓塞 性脑缺血动物模型.大鼠分别于缺血后3小时,6小时,9小时经导管进行区域动脉溶栓.动脉溶栓后24小时,观察大鼠脑组织病理 损伤及神经症状,测定脑组织含水量和脑梗死面积变化.结果模型组大鼠均较假手术组神经症状增高,脑含水量增加,脑梗 死面积增大,脑病理损伤明显;溶栓组大鼠神经症状评分降低,脑含水量减少,脑梗死面积减小,脑病理损伤减轻;6小时内溶栓的上 述指标改善尤为明显;联合组各指标均较相应时间点溶栓组和脑脉 通组的改善明显.结论不同时间窗经动脉溶栓治疗对大鼠脑 缺血损伤均有保护作用,但缺血后3小时和6小时溶栓效果优于9小 时;脑脉通可增强不同时间窗溶栓治疗的效果,具有延长溶栓 治疗时间窗的作用. [关键词]脑缺血;大鼠;脑脉通;溶栓;时间窗 EffectofNaomaitongontheTimeWindowofThrombolysisthroughArteryfortheCerebrallschemicRatswithThrombo—Embolism LIJian—sheng.,WANGDong.,LIUJing—xia.,eta1. (1.GeriatricsInstituteofHenanUniversityoJ7’raditionalChineseMedicine,Zhengzhou450003;2.WomenandChildrenCareCentre ofLuoyangCity;3,BeijingUniversityDl,ChineseMed~ine) ABSTRACTObjectiveTostudytheprotectiveeffectandinfluenceofNaomaitong(Removeobstructionofcerebralvessels)onthe timewindowofthrombolysisforthecerebralischemicratswiththrombo—e mbolism.MethodsTheratswererandomizedintosham operatedgroup,modelgroup,urokinase(UK)thrombolysisgroup,Naomaitonggroup,andUKplusNaomaitonggroup(associated group).Thecerebralischemicratmodelswiththrombo—embolismwerema debyblockingsylvianartery,Theratswereadministrated localthrombolysiswithducttOarteryatthetime—pointof3.6.and9haftercer ebralischemia,At24hofadministrationthrough artery,thepathologicchangesofbrainandthesymptomsofnervesystemwere observedtOdeterminethebrainwaterratio(BWR)and thechangeofcerebralinfarctionarea(CIA).ResultsComparedwiththesham—operatedgroup,inallmodelgroups,thescoreof nervesystemsymptomsincreased,theBWRandCIAincreased,andthebrainpathologicalchangesbecameworse;inallthrombolysis groups,theScoreofnervesystemsymptomsdecreased,theBWRandCIAdecreased,andthebrainpathologicchangesbecamere lieved;within6hours,theimprovementofabovementionedthrombolysisindiceswasespeciallyremarkable:intheassociatedgroup, allindicesatthecorrespondingtime—pointwereimprovedsignificantlythan thoseofthethrombolysisgroupandNaomaitonggroup. ConclusionThrombolysisthrougharterygivenatdifferenttimeisprotectivefortheischemictissues,buttheeffectoftreatmentgiven at3and6hafterischemiaisbetterthanthatof9h.Naomaitongenhancestheprotection,functioningtOprolongthetimewindowof thrombolysis. KeyWordsCerebralischemia;Rat;Naomaitong(Removeobstructionofcerebralvessels);Thrombolysis:Timewindow 脑梗死主要是由血栓栓子或者脑血管局部血栓形 成,引起脑动脉阻塞所致.迅速溶解血栓,恢复血流是 其最基本的治疗方法L1].但溶栓治疗的效果受诸多 因素影响,其中时间窗被认为是关键因素;不同的用药 途径也影响脑梗死的溶栓效果,有研究认为动脉溶栓 疗效尤为明显Ls].但目前针对不同时间窗经动脉溶栓 基金项目:国家自然科学基金资助项目(C03050311),河南省高校创 新人才培养基金资助项目(2000—10) 通讯作者:李建生,ljs8@371.net,(0371)65676568 对脑缺血损伤保护作用的比较研究不多,中医药对溶 栓时间窗的影响研究更为少见.故该研究通过比较不 同时间窗经动脉溶栓治疗对大鼠脑缺血损伤的保护作 用,并探讨中药复方脑脉通对溶栓治疗时间窗的影响, 从而为其临床应用提供依据. 1材料与方法 1.1实验材料 青年SD大鼠19O只,清洁级,3,4月龄,雌雄各 半,体重(300?50)g,由河南省实验动物中心提供(合 中医杂志2008年第49卷第2期JournalofTraditionalChineseMedicine,2008,Vo1.49No.2 格证号:410117);聚乙烯导管(武进市政平乳胶制品 厂,型号:F2×70,外径0.7mm);尼龙线(日本大东阳 公司,型号:2.5,直径0.285mm);凝血酶(济南军区生 物制品药物研究所,批号:H41O23661,规格5oou/ 支);尿激酶(山东新华制药股份有限公司,批号: 05401236,规格1万U/支);脑脉通颗粒(河南中医学 院药物学科提供,组成:大黄9g,人参9g,JII芎6g, 葛根6g,用6O乙醇提取,出膏率15;动物剂量按临 床人的用量,结合提取率,根据人与大鼠体表面积等效 剂量比换算). 1.2分组与处理 大鼠按随机数字表法分为假手术组,模型组,尿激 酶溶栓组(溶栓组),脑脉通组,脑脉通联合尿激酶组 (联合组),其中假手术组动物1O只,余各组根据脑缺 血后干预时间点的不同分为3小时,6小时,9小时,每 个时间点15只大鼠.各组大鼠均于造模前4天灌胃 (每日1次),脑脉通组和联合组用脑脉通灌胃(用量 0.081mg/g),其余均灌以等体积的生理盐水. 1.3造模及取材 参考改良的Zhang法制备血栓栓塞性脑缺血动物 模型[6].用大鼠自体血栓结合线栓阻塞大脑中动脉制 备大脑中动脉阻塞模型:将改良的,内置套线的聚乙烯 导管进行标记;大鼠用6%水合氯醛(O.4ml/100g)进 行腹腔注射麻醉,背位固定,颈部正中用29/6碘酒和 75酒精消毒,颈部正中切口,分离左侧颈总动脉,穿 线备用;同时分离右侧颈总动脉,穿线备用;分离左侧 颈内外动脉,离断颈外动脉,结扎翼额动脉,于颈外动 脉近动脉分叉处剪口,导管穿入颈内动脉,缓慢推进适 当深度;根据标记长度适当退出套线,使血液流入导管 内自凝,缓慢推入凝血酶20U,使血液凝固,血栓形成; 再次插入套线,用力均匀和缓地向前推进套线至标记 位置,使形成的血栓阻塞大脑中动脉入颅处;留置导 管,缝合皮肤,单笼饲养.假手术组不插入栓线和形成 血栓.实验过程中保持大鼠肛温(37.0?0.5)C,室温 (26?1)C.分别于脑缺血后不同时间点经导管进行区 域动脉溶栓,模型组用生理盐水,溶栓组与联合组用尿 激酶5U/g.区域动脉给药后24小时观察大鼠神经症 状,冰盘上取脑,制备标本,待行指标测定.实验中大鼠 死亡率较高,主要原因由动脉用药时二次麻醉和溶栓 后颅内出血引起,纳入统计时剔除死亡和取材不合格 动物. 1.4观察指标及方法 1.4.1神经症状评分取材前半小时进行评分,依8 分分值__8]. 1.4.2脑组织含水量测定切取的脑组织迅速用电 子天平称取湿重(精确度为0.1mg)后放入干燥箱中干 燥(100_-!-2)C,24小时后称取干重.计算公式:脑组织 含水量一(脑湿重一脑干重)/脑湿重×100. 1.4.3脑梗死面积测定切取的脑组织放入2四 氮唑溶液,37C水浴锅温孵3O分钟后放入1O甲醛溶 液,15分钟后取出脑组织,数码相机对脑片(额侧)进 行拍照,应用计算机软件测定脑片梗死面积与相应侧 总面积,计算面积比值.计算公式:面积比值一梗死面 积/总面积×100. 1.4.4脑组织病理观察切取的脑组织用4的多, 聚甲醛固定,常规脱水,透明,浸蜡,包埋,切片,染色, 光镜下观察脑组织病理形态改变,根据受损程度由轻 到重进行分级L9]:I级0,259/6,?级26,5O,噩级 51,75,IV级>75%(镜下见出血者均为?级),计算 鼠数;电镜组织制成超薄切片,经铅一铀染色,Hitachi一 7500透射电子显微镜观察脑组织超微结构改变. 1.5统计学方法 数据用SPSSl1.0统计软件处理.等级序值资料 用秩和检验;计量资料以?表示,以单因素方差分 析进行统计. 2结果 2.1神经症状评分 表1示,模型组各时间点大鼠均较假手术组增高 (P<O.01);与模型组同时间点比较,用药组神经症状 评分均降低(P<O.01);联合3小时和9小时均较溶栓 组和脑脉通组显着降低(P<O.05或P<0.01);各组9 小时均较其3小时的神经症状评分增高,溶栓组和脑 脉通组9小时组分别较6小时组增加(P<O.01或P< 0.05). 2.2脑组织含水量 表1示,模型组各时间点大鼠均较假手术组增高 (P<O.05或P<0.01);溶栓组和联合组各时间点大 鼠的脑组织含水量均较同时间点模型组降低(P< 0.01);联合组6小时和9小时较溶栓组和脑脉通组降 低其3小时组较脑脉通组降低(P<0.01或P< 0.05);各组6小时和9小时组均较3小时时增高(P< 0.01或P<0.05),用药组9小时均较6小时增高 (P<0.05). 2.3脑梗死面积 表1示,模型组各时间点大鼠均较假手术组增大 (P<O.01);与模型组同时间点比较,用药组大鼠均显 中医杂志2008年第49卷第2期JournalofTraditionalChineseMedicine,2008,Vo1.49,No.2?165? 与本组3小时比较,*P<0.05,**P<0.01;与本组6小时比较,AP%0.05,AAP%0.01;与假手术组比较,?P%0.05,??P<0.01;与模 型组同时间点比较,?P<O.O1;与联合组同时间点比较,? P<0.05,??P<O.01 着减小(P<0.01);联合用药6小时和9小时组较同 时问点溶栓组和脑脉通组显着减小(P<0.01);各组6 小时,9小时组均较3小时组增加,9小时较6小时增 高(P<0.01或P<0.05). 2.4脑组织病理改变 2.41光镜下病理损伤程度变化表2示,模型组各 时问点大鼠脑组织病理损伤均较假手术组明显(P< 0.01);各用药组大鼠均较同时问点模型组减轻(P< 0.01);联合组9小时较同时间点溶栓组和脑脉通组病 理损伤减轻(P<0.05);各组9小时组病理损伤均较3 小时组明显(P<0.05). 表2各组大鼠脑组织病理损伤分级比较(只) 组别———兰合计秩和 与本组3小时比较,*P<O.05;与假手术组比较,?P%0.01;与模 型组同时间点比较,-~rP%0.01;与联合组同时间点比较,-A-P%0.05 2.4.2神经细胞超微结构变化假手术组细胞器形 态结构未见异常;线粒体结构清淅,无肿胀,断裂;粗面 内质网结构正常;胞浆可见数十个吞饮小泡.缺血3小 时出现胞质和线粒体水肿,线粒体嵴和膜结构破坏,粗 面内质网脱颗粒,核膜破坏,染色质浓缩及边缘聚集, 损伤随缺血时问延长而加重,缺血9小时胞质和线粒 体高度水肿,线粒体嵴和膜大多消失,粗面内质网脱颗 粒严重,细胞器减少,核膜部分溶解或消失,细胞核水 肿;各药物组神经细胞超微结构破坏分别较相应时问 模型组损伤减轻,以联合组的减轻尤为明显. 3讨论 溶栓治疗可使急性脑梗死闭塞的血管再通,是恢 复脑血流,挽救缺血脑组织的最佳方案].溶栓治疗的 时问窗是影响其疗效的关键因素,若超过时问窗,半暗 带区的脑组织难以恢复,甚至导致再灌注损伤.临床进 行溶栓治疗的基本时问依据是缺血后4,8小时(平均 6小时)半暗带区神经细胞仍有存活,发病后6小时内 的治疗效果优于6小时以上I1”;此外,与静脉给药相 比,理论上局部动脉内溶栓采用较少剂量的溶栓药就 可使阻塞血管快速,完全的再通,且动静脉溶栓的时机 也存在差异,在脑梗死发病3小时以内,多采用静脉溶 栓,而在346小时之间,则宜采用动脉内溶栓【1.目 前大多数学者同意将溶栓治疗的时问窗定为6小时, 但治疗时间窗并非一成不变,而是个体化的,动态的, 多因素的过程,许多情况都会改变时问窗;超过6小时 时间窗的治疗也可使部分急性脑梗死患者得到功能恢 复l_1.因此,延长脑缺血溶栓治疗的时问窗无疑具有 重要意义,早期脑保护剂的应用能阻断脑缺血病理过 程的恶性循环,可使治疗的时问窗扩大n.尿激酶 (UK)是临床急性脑梗死常用溶栓药物,发病后6小时 内经动脉内尿激酶溶栓是目前公认的有效治疗手段. 中医认为,瘀血阻络是脑梗死的病机关键,溶栓药对瘀 血有强烈干预作用,但其在化瘀同时可引起出血,倦怠 等副反应,表明溶栓药尚有”破血之品”的耗气伤血之 弊.因此,益气活血化瘀应是脑梗死溶栓治疗补偏救 弊,祛除余邪的重要方法L1.中药复方脑脉通对脑缺 ? 166?中医杂志2008年第49卷第2期JournalofTraditionalChineseMedicine,2008,Vo1.49,No.2 血再灌注损伤具有明显的保护作用?].该研究比较了 脑缺血大鼠不同时间溶栓治疗对脑组织的保护作用, 并进一步探讨了脑脉通对溶栓治疗时间窗的影响.研 究发现,缺血后不同时间窗溶栓治疗均具有脑保护作 用,但溶栓效果存在差异,3小时,6小时溶栓较9小时 能明显改善神经功能,减轻脑水肿,减小梗死灶,减轻 脑组织病理损伤和超微结构改变;脑脉通可明显增强 溶栓治疗效果,进一步扩大溶栓治疗的时间窗,从而为 急性脑梗死的临床应用提供依据. 参考文献 [1]IbayashiS,TokanoK,OoboshiH,eta1.Effectofselective brainhypothermiaonregionalcerebralbloodflowandtissue metabolismusingbrainthermo—regulatorinspontaneously hypertensiverats.NeurochemRes,2000,25(3):369,375. 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