美国榆和榔榆的组织培养

美国榆和榔榆的组织培养 第4期河北林业科技1993年l2月 一 0’ 口.美国榆和榔榆的组织培养 .. MarkG.BolyardC.Srinivasan魏确Jic辚amsn, 第4期河北林业科技1993年12月 而采用传统育种法至今未把DED抗性特征 导入到美国榆体内.此外,DED一抗性榆例 如榔榆(UlmusParvifoliaJacq)也遭到其它 天然植食性昆虫.象榆绿叶甲(PyrrhaltaLu— teolaMiiller)的危害.植物的遗传工程要求 有离体再生系统.例如.从叶培养物再生芽. 对美国榆来说.虽然已从未分化培养物中再 生出芽,例如细胞悬浮液,胚轴引发愈伤组 织培养以及低温冷藏愈伤组织.但是.目前 还未见从叶组织培养物再生芽的报道. TDZ(N一苯基一N一1,2,3一噻重氮 一 5基脲)是一种苯脲化合物,已被呈现 细胞激动素的活性.可用于矮牵牛(Petunia hybridaL.)和烟草(NicotianatabacumL.) 的叶外植体芽的再生和苹果(Malusdometi- caBorkh)的枝梢培养物芽的起动.与嘌呤基 的细胞分化素类相比.TDZ对植物还具有稳 定的长期作用.因此.本项研究的目的在于 检验TDZ对美国榆和榔榆的叶外植体再生 芽的效果. 从温室栽培的美国榆或榔榆实生苗上 (6月龄.苗高15--~20cm)采集完全展开的叶 子(自顶端分生组织的第二或第三片叶子), 在含有0.1%吐温20的1.05NaOC1溶液 中表面消毒20min.把叶切片(横切到中脉的 5mm宽的长条)培养在MagentaGA一7容 器内(每个容器内6”-8个外植体).容器内 盛有附加(每升)30g蔗糖,2mg硫胺素HC1, 100mg肌醇,0.6的琼脂,PH调至5.6以 及0.1,0.5,1或5t~mTDZ的MS(1962)基 本培养基.培养物放在摄氏25度,平均辐照 度为37umol?m-’?s,,光周期为16h的条 件下培养.每4个星期转换一次新鲜培养基. 在初步试验中.培养在含有0.1, lt~mTDZ培养基上的外植体再生了芽.含有 5t~mTDZ培养基上的外植体两个星期内死 亡,而不含TDZ培养基上的外植体没有产生 ?54? 芽.随后.用0.1t~mTDZ做进一步的试验.培 养2个月后.在360份培养物中.有73士 4%的再生了芽.每个叶切片再生5.5士3.5 个芽.在分开的试验中.从同龄的10株实生 苗上采集自茎尖分生组织的第二片叶子.培 养在含有0.1t~mTDZ的培养基上来检验实 生苗间的变异性.从每个叶切片再生芽的情 况看,在实生苗之间,其再生芽的能力方面 没有可见变异性.而变异性更多地取决于叶 外植体在叶片上的位置.叶脉区的外植体再 生芽的能力最强.此外.再生能力还受叶外 植体被培养的时间以及植株活力的影响.当 把芽子转移到含有3或5vtm赤霉素的MS 培养基上时.芽子会迅速伸长.在这些完全 伸展的芽子中.注意到没有体细胞无性繁殖 系的变异.另外.在初步试验中,培养在含 有0.1mg/1的1H一吲哚一3一丁酸的MS培 养基上的几个芽子生了根. 培养在含有0.1t~mTDZ的MS培养基 上的70个榔榆叶切片.有84的再生了芽. 每个外植体产生20.7士15个芽.对这些芽还 没做生根试验. 我们已有试验证明从美国榆叶切片可 以再生植株以及用榔榆叶外植体可以再生 芽.这个系统对于选择的抗DED的美国榆 无性系的繁殖以及从树龄至少60年的树木 上再生芽也是有效的.从其它多年生木本植 物的叶培养物中再生芽也有报道,例如:已 被用于遗传工程的杨树(银白杨×大齿杨)和 苹果(MalusdomesticaBorkh).在这里介绍 榆树再生系统可以促进DED抗性组合基因 导入易感病榆树体内的推广.有助干减少榆 荷兰病的传播.这个程序对于过去测定的抗 真菌病原体的体细胞无性系变异体的离体选 择和繁殖也是有效的. 曹书敏译自(HortScience》1991,26(12) 白文力校