【word】 苯并咪唑氨基甲酸酯类药物抗猪囊尾蚴的作用靶点

【word】 苯并咪唑氨基甲酸酯类药物抗猪囊尾蚴的作用靶点 苯并咪唑氨基甲酸酯类药物抗猪囊尾蚴的 作用靶点 中国农业科学2007,40(5):1024—1032 ScientiaAgriculturaSinica 苯并咪唑氨基甲酸酯类药物抗猪囊尾蚴的作用靶点 李庆章,郝艳红,高学军,刘永杰,高文学,赵冰 (东北农业大学生命科学学院,哈尔滨150030) 摘要:【目的】研究苯并咪唑氨基甲酸酯类抗囊药物对猪带绦虫囊尾蚴的作用靶点,为药物的类型衍化和 新药开发提供理论依据.【】测定体外培养的和猪体内的囊尾蚴于阿苯哒唑和奥芬哒唑分别作用后能量代谢 途径物质含量及其关键酶活性变化.【结果】阿苯哒唑和奥芬哒唑对体外培养猪六钩蚴,未成熟期和成熟期猪囊 尾蚴,以及体内发育未成熟期和成熟期猪囊尾蚴的糖无氧分解途径,丙酮酸羧化支路与逆向三羧酸循环途径均 有一定程度抑制作用,代偿性促进糖异生及蛋白质,脂类和核酸分解途径,葡萄糖吸收受阻.阿苯哒唑和奥芬 哒唑体外非竞争性抑制延胡索酸还原酶复合体活性.【结论】并咪唑氨基甲酸酯类抗囊药物非竞争性抑制猪囊尾 蚴FR复合体活性,抑制葡萄糖的摄取. 关键词:阿苯哒唑;奥芬哒唑;猪囊尾蚴;作用靶点;能量代谢 TheTargetofBenzimidazoleCcarbamateAgainst Cysticercicellulosae zhang,HAOYan—hong,GAOXuejun,LIUYong-jie,GAOWen LIQing— —xue,ZHAOBing (CollegeofBiologicalScience,NortheastAgriculturalUniversity,Harbin150030) Abstract:[Objective]TheobjectivewastostudythetargetofbenzimidazolecarbamatedrugsagainstCysticercicellulosae andgivetheoreticalbasisfortypeevolutionandnewdrugdesign.[Method]Changesofkeyenzymeactivitiesandmetabolite contentsinpathwayofenergymetabolisminCysticercicellulosaeinvitroandinvivoweretestedwithalbendazoleand oxfendazolerespectively.[Results]Albendazoleandoxfendazolebothinhibitedthepathwaysofanaerobicglycolysis,partial inversedtricarboxylicacidcycleofTaeniaSoliumoncosphere,immatureandmaturecysticerciinvitroandimmatureandmature cysticerciinvivoincertaindegree.Theyenhanceddecomposinginfat,aminoacid,andxanthinemetabolism.Ontheotherhand, absorptionofglucosewashindered.Albendazoleandoxfendazolebothinhibitedtheactivitiesoffumaricreductasecomplex noncompetentlyinvitorespectively.[Conclusion]Benzimidazolecarbamat edrugscaninhibittheactivitiesoffumaricreductase complexnoncompetentlyandhindertheabsorptionofglucose. Keywords:Albendazole;Oxfendazole;Cysticercicellulosae;Target;Energ ymetabolism 0引言 【研究意义】苯并咪唑氨基甲酸酯类 (benzimidazolcarbamate)药物是一类近年来发展非 常迅速的抗寄生虫防治药,是许多寄生蠕虫疾病治疗 的首选药物l1.苯并咪唑类化合物包括一组广谱抗蠕 虫药物,第一代药物如噻苯达唑,因毒性太大,己被 淘汰,目前应用的主要是甲苯达唑和阿苯达唑.甲苯 咪唑,氟苯咪唑,阿苯达唑,芬苯达唑,奥芬达唑等 苯并咪唑类抗蠕虫药物均已作为广谱抗蠕虫药物应用 于寄生虫的治疗,取得了很好的效果,但这些药物都 有着这样或那样的缺点或不足,制约着其临床的应用, 因而研究苯并咪唑类抗蠕虫药物的作用机理,开发更 高效或特异的药物成为寄生蠕虫疾病治疗的需要【3l4]. 【前人研究进展】传统看法认为苯并咪唑氨基甲酸酯 类抗蠕虫药物的基本作用机理为多种作用,如噻苯达 唑和阿苯达唑可抑制线虫的延胡索酸还原酶;噻苯达 唑还抑制缩小膜壳绦虫和肝片形吸虫的延胡索酸还原 收稿日期:2006—03—23;接受日期:2006—12—21 基金项目:国家自然科学基金资助项目(No.30371081) 作者简介李庆章(1953一),男,河北清苑人,教授,博士,博士生导师,研究方向为生物化学与子生物 学.Tel:0451—55190999;Fax:0451—55103336 E—mail:qingzhangli@hotmail.com 5期李庆章等:苯并咪唑氨基甲酸酯类药物抗猪囊尾蚴的作用靶点1025 酶,在人蛔虫延胡索酸还原酶被苯硫咪唑抑制的部位 看来是在深红醌被黄素蛋白1还原的水平上,在琥珀 酸脱氢酶和终末氧化酶之间可能有第二个抑制部位. 高浓度的苯并咪唑类是氧化磷酸化的解偶联剂在肝 片形吸虫和扩展莫尼茨绦虫,甲苯咪唑和丙噻咪唑 (cambendazole)可引起ATP水平的下降.从苯并咪 唑的结构来看,它们可能是起嘌呤类似物的作用.甲 苯咪唑可抑制线虫,某些吸虫和绦虫对葡萄糖的摄取. 近已苯并咪唑与微管蛋白结合从而阻止微管形 成[5].苯并咪唑类抗蠕虫药物阻止微管形成和抑制蠕 虫的延胡索酸还原酶似乎是矛盾的,学术界对苯并咪 唑类抗蠕虫药物的作用机理也有上述两种不同的提 法.McCracken认为苯并咪唑类抗蠕虫药物的本质作 用机制是抑制蠕虫线粒体的电子传递体系和与电子传 递体系偶联的磷酸化反应,而与微管形成有关的葡萄 糖转运系统受阻则是ATP合成反应受抑制的结果[7I. 【本研究的切入点】苯并咪唑类抗蠕虫药物具有基本 的显效结构,此类药物的作用机理基本相同,但关于 这类药物的作用机理还需要进一步研究才能证实.真 正阐明此类药物的作用机理,对此类药物的类型衍化 和新药具有重要的意义.【拟解决的关键问题】猪 囊尾蚴病(Cysticercosiscellulosae)至今在世界各地 发展中国家仍严重危害着人民的健康甚至危害生命. 人患猪囊尾蚴病后,尚无有效的药物治疗,主要原因 是尚缺乏有效杀灭未成熟期猪囊尾蚴的药物.因而研 究阿苯哒唑和奥芬哒唑等药物对猪囊尾蚴能量代谢的 影响,将为研究此类药物的作用机理和筛选抗囊新药 提供快捷和有效的试验方法【”]. 1材料与方法 1.1试验材料 猪六钩蚴由黑龙江省驱绦灭囊办公室,哈尔滨医 科大学寄生虫教研室和吉林农业大学囊虫病研究所提 供;猪囊尾蚴人工成功感染长白与哈白杂交家猪(东 北农业大学实验基地,2002)后分期获得;试验药物 阿苯哒唑(albendazole,ALB)和奥芬哒唑 (oxfendazole,OXF),由中国农业科学院上海寄生 虫病研究所猪带绦虫囊尾蚴病研究室提供. 1.2猪六钩蚴的体外培养及药物作用靶点的确定与 药效机理研究 剪碎绦虫节片取出猪六钩蚴作脱壳处理后,置于 不同培养液中在培养箱中培养.对照组(C组)用PRMI 1640完全培养液,ALB组用含400”g.mlALB的 PRMI1640完全培养液,OXF组用含400g.mlOXF 的PRMI1640完全培养液.以上各组分别在24h,72 h取一定量虫卵备测,每个测定5个重复(下同)[1. 1.3猪囊尾蚴的体外培养及药物作用靶点的确定与 药效机理研究f】J6J (1)未成熟期猪囊尾蚴的体外培养及药物作用靶 点与药效机理将感染后30日患囊尾蚴病的猪屠宰, 从肌肉中取出猪囊尾蚴,置于孵育液中,37~C孵育至 头节伸出,取出后置于无菌生理盐水中洗涤445次, 取外形相似,大小相同的猪囊尾蚴120个,随机分为 3组(每组40个),分组及处理同上. (2)成熟期猪囊尾蚴的体外培养及药物作用靶点 与药效机理感染后80目的猪囊尾蚴300个,分成4 组(每组100个),进行体外培养,方法同1.2.在培 养12,24,36,48h后,各组分别取出20个猪囊尾 蚴备测. 1.4猪囊尾蚴的体内发育及药物作用靶点的确定与 药效机理研锄] (1)未成熟期猪囊尾蚴的体内发育及药物作用靶 点与药效机理选无猪囊尾蚴感染的子猪26头,人工 感染猪带绦虫卵后,于不同时期检测抗猪囊尾蚴抗体 效价.当抗体效价达到1:16以上时,开始用药.每 个用药组设6头猪,感染后不用药组5头,未感染也 未用药组3头.C组不用任何药物;ALB组,取ALB 按100mg.kg分3次口服;OXF组,取OXF按30 mg.kg.一次口服.以上各组分别在用药后24,48,72, 120h屠宰,取猪囊尾蚴备测. (2)成熟期猪囊尾蚴的体内发育及药物作用靶点 与药效机理选无猪囊尾蚴感染的子猪28头,人工感 染猪带绦虫卵后,间断屠宰判断猪囊尾蚴成熟率.当 猪囊尾蚴成熟率达到80%以上后开始用药.每个用药 组设6头猪,感染后不用药组5头,未感染也未用药 组5头.用药方法同1.4(1),以上各组分别在用药 后24,48,120,240h屠宰,取猪囊尾蚴备测. 1,5抗囊药物对猪囊尾蚴延胡索酸还原酶活性的影 响 分别测定不同浓度阿苯哒唑和奥芬哒唑对猪囊尾 蚴匀浆延胡索酸还原酶(FR)活性的抑制作用.在不 同浓度底物延胡索酸溶液中,分别测定一定浓度阿苯哒 唑和奥芬哒唑抑制猪囊尾蚴组织匀浆FR的动力学数 据. 1.6数据处理 采用美国SAS软件公司出版的SAS统计软件进行 1026中国农业科学4O卷 差异显着性检验.试验结果各表中大写字母不同为差 异极显着(P<0.01),小写字母不同为差异显着 (P<0.05),小写字母相同为差异不显着(P>0.05). 2结果与分析 2.1药物对猪六钩蚴能量代谢的影响 药物对体外培养猪六钩蚴能量代谢有关酶活性和 代谢物含量的变化见表1.ALB和OXF作用于体外 培养猪六钩蚴72h丙酮酸激酶(PK),乳酸脱氢酶 (LDH),谷丙转氨酶(GPT)活性显着降低,葡萄 糖(GLc)含量显着降低,乳酸(LAC)含量和尿酸 (uN)含量呈现明显升高. 2.2药物对猪囊尾蚴能量代谢的影响 2.2.1药物对体外培养猪囊尾蚴能量代谢的影响 (1)药物对体外培养未成熟期猪囊尾蚴能量代谢 的影响药物对体外培养未成熟期猪囊尾蚴能量代谢 表1药物对体外培养猪六钩蚴能量代谢酶活性和物质含量变化的影响 Table1Changesofenzymeactivitiesandmetabolitecontentsofenergymetab olisminimmatureoncosphereinvitrowithdrugs 指标组别时间Time(h)指标组别时间Time(h) IndexesGroups2472Indexes. Groups2472 GLc2.86?024a2.83?0.27A0224-0.02a0.28?0.02a CC (mm.l/gp?t)ALB1 . 764-0.16b0.98?0.o7BaGPT AIB0.194-0.01a0 OXF1 .81?0.13b1.06+0.09B (IU,mgp” 0.26+0.03a0. . 1 1 3 1 +0.0 +_0.0 1 1 b b OXF PK c 5?58?0?42a5?23?0-39a6?64_+0-49a6.33?0?47a (u,mgpr0t)ALB4. 894-0.33a3.72+0.21bGDH ? AL-a6.52_--4_-0.465.884-0.44B40a-r-Ua OXF5154-044a3.06?0.24b (U/gp”OXF 7.21?0.55a7.55?0.58a LDHc1-14+0?070.98+0?07C0-184-0.02a0.224-0-02a (U,mgp?)ALB1. 254-0.11a0.66+0.06bUN ?ALB-0.22_+0.020.444-0.03bB2202aU44U3b OXF0.92_+0.06a0.634-0.05b (.VmgpOXF 0.41?0.03b0.47?0.03b LAC c -06a 1-12?0?07l-26-----0-ll1?14+0?07a0.92+--0 (m咖gpr0【)ALB1. 564-0.09b1.84_+0.17bXOD AL-0.-74a0.070.794-0.06BU/”r-UUaU/Ua OXF1.61?0.12b1.93?0.16b (U,mgpOXF 0.92?0.06a0.78?0.06a GOTc0?66+0?04a0?68+0-04ac0?14+_0-02a0?174-0-02 (IU/gpr.)ALB0 . 88+0.07a0.63--+0.03aTG AIB0.164-0.02a0.194-0.03 OXF0 .81?0.07a0.32+0.o4b (gpr0【)OXF 0.14+0.02a0.17?0.02a 酶活性和代谢物含量的变化见表2.OXF作用于体外 培养未成熟期猪囊尾蚴72hPK活性显着降低,ALB 和OXF作用后磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPcK) 活性明显降低,PK/PEPCK比值增大.苹果酸酶(ME) 和延胡索酸还原酶(FR)活性出现一定升高然后迅速 降低.GLc含量显着降低,LAC含量明显升高. (2)药物对体外培养成熟期猪带绦虫囊尾蚴能量 代谢的影响药物对体外培养成熟期猪囊尾蚴能量 代谢有关酶活性的变化见表3.PEPCK活性变化不 完全一致,ALB作用后PEPCK活性迅速降低,而OXF 作用后的PEPCK活性则呈现先升高然后迅速降低, ALB和OXF作用后FR活性也呈现先升高然后迅速降 低,ME活性在药物作用后变化不明显.ALB和OXF 作用后PK/PEPCK变化不一致,ALB组PK/PEPCK 在药物作用的不同时间均高于对照组,OXF组 PK/PEPCK在药物作用的不同时问均低于对照 组.ALB和OXF作用后PK活性随作用时间逐渐 下降. 2.2.2药物对体内发育猪囊尾蚴能量代谢的影响 (1)药物对体内发育未成熟期猪囊尾蚴能量代谢 的影响药物对体内发育未成熟期猪囊尾蚴能量代 谢有关酶活性的影响见表4,表5.ALB作用72h异 柠檬酸脱氢酶(ICD)活性明显升高.OXF作用24h ICD活性明显降低.ALB和OXF作用后琥珀酸脱氢 酶(SDH)活性变化不明显.ALB和OXF作用初期, 谷氨酸脱氢酶(GDH),脂酶(FE)和黄嘌呤氧化酶 (XOD)活性多数情况下明显升高.ALB和OXF作 用24h和72h,PK/PEPCK比值呈现不同程度的升高. 5期李庆章等:苯并咪唑氨基甲酸酯类药物抗猪囊尾蚴的作用靶点1027 表2药物对体外培养未成熟期猪囊尾蚴能量代谢酶活性和物质含量变化的影响 Table2Changesofenzymeactivitiesandmetabolitecontentsofenergymetab olisminimmatureCceUulosaevitrowithdrugs 表3药物对体外培养成熟期猪囊尾蚴能量代谢的影响 Table3ChangesofenzymeactivitiesofenergymetabolisminmatureCceUul osaevitrowithdrugs ALB作用72hPK/PEPCK活性变化不明显.ALB作 用72hPK活性显着下降,ALB和OXF作用后葡萄糖 . 6.磷酸酶(G6Pase)活性明显升高.ALB和OXF作 用于猪囊尾蚴初期ATPase,ACP,AKP活性在大多 数情况下明显升高. (2)药物对体内发育成熟期猪带绦虫囊尾蚴能量 1028中国农业科学4O卷 表4药物对体内发育未成熟期猪囊尾蚴能量代谢的影响 Table4Changesofenzymeactivitiesandmetabolite contentsofenergymetabolisminimmatureC cellulosaeinvivowithdrugs ALB’72表示ALB作用于未成熟期猪囊尾蚴72h ALB’72refertoALBhadbeenusedfor72hinimmatureC.cellulosae 代谢的影响抗囊药物体内作用成熟期猪囊尾蚴 能量代谢有关酶和代谢物含量的变化见表6,表7. OXF作用于体内发育成熟期猪囊尾蚴24h,PK/PEPCK 明显升高,ALB作用后PK/PEPCK明显升高并随作用 时间延长有降低的趋势.ALB,OXF作用后FR活性 降低,G6Pase,LDH,SDH,GDH,FE和x0D活性 表5药物作用下未成熟期猪囊尾蚴能量代谢有关酶组织 化学半定量观察 Table5Semiquantitativehistochemicalobservationson enzymeactivitiesofenergymetabolismin immatureCcellulosaeinvivowithdrugs 指标反应强度Intensityofreaction COXF’48ALB’72ALB’120 OXF’48表示OXF作用于未成熟期猪囊尾蚴48h,ALB’72,ALB’120 分别表示ALB作用于未成熟期猪囊尾蚴72h和120h O’48,ALB’72andALB’120refertoALBhadbeenusedfor72and 12OhandOXF48hinimmatureCcellulosae 表6药物对体内发育成熟期猪囊尾蚴能量代谢的影响 Table6Changesofenzymeactivitiesandmetabolitecontentsofenergymetab olisminmatureCcellulosaeinvivowithdrugs OXF’24表示OXF作用于成熟期猪囊尾蚴 24h,ALB’24,ALB’48,ALB’120分别表示ALB作用于成熟期猪囊尾蚴24,48和120h OXF’24.ALB’48andALB’120referto:ALBhadbeenusedfor48and12Oha ndOXF24hinmatureCcellulosae 多数情况下明显升高.ALB作用后ICD活性明显升高 并随作用时间延长呈现升高的趋势.OXF组ATPase, ACP和AKP活性变化不明显,ALB显着升高. 2.3药物对猪囊尾蚴延胡索酸还原酶活性的影响 2.3.1不同浓度药物对胡索酸还原酶活性的影响测 定不同浓度ALB和OXF对猪囊尾蚴匀浆延胡索酸还 原酶(FR)活性的抑制作用,结果见表8.ALB和 OXF对猪肌肉匀浆FR活性的抑制作用不明显,而对 猪囊尾蚴匀浆FR活性的抑制作用比较明显.ALB在 浓度为0.07mmo1.L时达到最大抑制率47.8%,而 OXF在浓度为0.035mmo1.L.时达到最大抑制率 51.6%. 2.3.2抗囊药物对不同底物浓度下延胡索酸还原酶 活性的影响在不同浓度底物延胡索酸溶液中,分别 5期李庆章等:苯并咪唑氨基甲酸酯类药物抗猪囊尾蚴的作用靶点1029 表7药物作用下成熟期猪囊尾蚴能量代谢有关酶组织化 学半定量观察 Table7Semiquantitativehistochemicalobservationsonthe enzymeactivitiesofenergymetabolisminmatureC ceUulosaeinvivowithdrugs 指标 Indexes 反应强度Intensityofreaction COXF’48ALB’24 OXF’48表示OXF作用于成熟期猪囊尾蚴48h,ALB’24表示ALB 作用于成熟期猪囊尾蚴24h OXF’24andALB’48refertoALBhadbeenusedfor48handOXF24h inmatureC.ceUulosae 测定ALB和OXF抑制猪囊尾蚴组织匀浆FR的动力 学数据,结果见表9.抑制曲线说明,ALB和OXF 非竞争性抑制猪囊尾蚴组织匀浆FR活性,ALB和OXF 的抑制曲线基本类似,抑制程度接近. 3讨论 3.1抗囊药物对猪囊尾蚴发育过程中能量代谢的影 响 3.1.1抗囊药物对猪囊尾蚴糖无氧分解途径的影响 苯并咪唑氨基甲酸酯类抗囊药物对体外培养猪六钩 蚴,未成熟期和成熟期猪囊尾蚴,以及体内发育未成 熟期和成熟期猪囊尾蚴的糖无氧分解途径均有一定程 度抑制作用.由于其它产能途径同时被抑制,导致乳 酸产生增多并出现排泄障碍而蓄积.郝艳红等研究表 明,OXF作用于猪囊尾蚴引起虫体细胞功能变化,细 胞膜物质转运受到损害,这是代谢产物蓄积的原因[16] 3.1.2抗囊药物对猪囊尾蚴丙酮酸羧化支路与逆向 三羧酸循环途径的影响ALB和OXF通过抑制虫体 表8不同浓度ALB和OXF对猪囊尾蚴匀浆FR活性的影响 Table8EffectsontheactivitiesoffumaricreductaseintissuehomogenateofC cellulosaewimdifferentconcentrationsofALB andOXFrespectively 1030中国农业科学40卷 表9ALB和OXF对不同底物浓度下猪囊尾蚴组织匀浆FR活性的影响 Table9EffectsontheactivitiesoffumaricreductaseintissuehomogenateofC cellulosaeindifferentconcentrationsofsubstrate withALBandOXF FR活性而抑制丙酮酸羧化支路,作用初期可能由于虫 体的应答而引起虫体FR活性的一定升高,之后由于 药物的持续抑制作用和虫体能量物质的耗竭而使FR 活性迅速下降,进而反馈抑制了PEPCK活性. 3.1.3抗囊药物对猪囊尾蚴三羧酸循环途径的影响 药物抑制了FR所在的能量代谢通路后,未成熟期 猪囊尾蚴代偿性地增强PK所在的通路或ICD有关的 脂类共发酵等途径,三羧酸循环途径增强不明显,而 成熟期猪囊尾蚴受到不同药物的不同作用,ICD活性 由于药物作用效果较强致使虫体能量代谢发生严重障 碍导致代谢体系紊乱而失活,或药物作用效果尚未使 能量代谢发生严重障碍而代偿性地激活了ICD和 SDH所在的脂类分解,三羧酸循环途径和糖异生途 径.电镜观察所示,经阿苯达唑作用人体内,外的囊 虫,均出现线粒体溶解或肿胀及胞质受损,成空泡化 等病变,SDH活性减弱可证明阿苯达唑干扰囊虫组织 的三羧酸循环,导致氧化过程发生障碍.陈佩惠发现 用药组囊虫组织LDH酶活性升高,认为与SDH酶活 性减弱,糖的有氧代谢减弱而以无氧糖酵解代偿的方 式提供能量有关【2. 3.1.4抗囊药物对猪囊尾蚴糖异生途径的影响ALB 和OXF由于抑制了虫体糖分解产生能量的代谢,使 G6Pase活性代偿性升高,这是虫体的自我保护机制. G6Pase活性升高的机制可能是ADP等的堆积对酶活 性的直接激活或刺激基因表达的结果.G6Pase活性的 升高与GLc含量的降低形成的鲜明对照恰恰说明,在 药物作用下由于糖类等分解产生能量的代谢发生严重 障碍而导致虫体细胞内代谢体系崩解,虫体正在走向 死亡.刘永杰等发现,猪体内OXF作用后24h,未成 熟期和成熟期猪囊尾蚴发生了明显的细胞凋亡,但未 成熟期猪囊尾蚴于作用后48h即发生坏死,成熟期猪 囊尾蚴于作用后l0日发生坏死.OXF体内作用后首 先引起猪囊尾蚴细胞发生凋亡,而后在宿主因素参与 下导致猪囊尾蚴细胞发生坏死【22】.说明猪囊尾蚴的能 量代谢障碍可引起基因表达系统功能的失调而引发细 胞凋亡或发生细胞坏死,引起不同酶活性和物质含量 的显着变化. 3.1.5抗囊药物对猪囊尾蚴蛋白质,脂类和核酸分解 途径的影响由于糖类分解产生能量的代谢发生障 碍,蛋白质,脂类和核酸代偿性分解加强以补充能量 不足. 3.1.6抗囊药物对猪囊尾蚴PK/PEPCK比值的影响 推测未成熟期猪囊尾蚴糖分解代谢较为简单,药物 抑制FR活性后可直接导致PEPCK活性下降和PK活 性增高,使PK/PEPCK出现上升,而成熟期猪囊尾蚴 糖分解代谢较为复杂,糖分解代谢的中间产物有更多 的流向,糖分解代谢的关键酶受到更多的调控. 3.1.7抗囊药物对猪囊尾蚴能量物质转运途径的影 响本试验应用酶组织化学方法测定了发育过程中及 不同药物作用不同时间后腺苷三磷酸酶(ATPase), 酸性磷酸酶(ACP),碱性磷酸酶(AKP)活性.同 相关研究相比,本试验更加系统和全面,因而更能够 反映药物作用的结果[19,20].这是GLc吸收受阻导致能 量吸收与转运有关酶活性代偿性升高的结果.作用后 5期’李庆章等:苯并咪唑氨基甲酸酯类药物抗猪囊尾蚴的作用靶点1031 期,虫体崩解,各种酶活性均逐渐下降并最终消失. 3.2苯并咪唑氨基甲酸酯类抗囊药物的药物作用靶 点及其效应机理 FR复合体是猪囊尾蚴苯并咪唑氨基甲酸酯类抗囊 药物的作用靶点.ALB和OXF对体外培养和体内发 育未成熟期及成熟期猪囊尾蚴的效应机理为抑制葡萄 糖的摄取,非竞争性抑制延胡索酸还原酶(FR)复合 体活性,导致虫体能量代谢紊乱,能量耗竭,以至死 亡. 苯并咪唑氨基甲酸酯类药物之所以同时具有两种 不同的作用可能与其结构有关,推测药物可能作为腺 嘌呤或鸟嘌呤及深红醌的生物电子等排体,一方面竞 争性地抑制了微管蛋白同ATP(GTP)的结合或由于 ATP合成减少而导致需要能量的微管运动的障碍,从 而导致GLc吸收受阻[23,24];另一方面通过竞争FR复 合体中深红醌的电子传递过程,一从而非竞争性地抑制 了FR的活[25,26].阿苯哒唑,腺嘌呤及深红醌结构 特征显示3种分子可能是生物电子等排体,这可能就 是苯并咪唑氨基甲酸酯类药物发挥作用的分子机制, 确切的结论有待于药物定量构效关系及有关实验的进 一 步研究. 4结论 阿苯哒唑和奥芬哒唑对体外培养猪六钩蚴,未成 熟期和成熟期猪囊尾蚴,以及体内发育未成熟期和成 熟期猪囊尾蚴的糖无氧分解途径,丙酮酸羧化支路与 逆向三羧酸循环途径均有一定程度抑制作用,代偿性 促进糖异生及蛋白质,脂类和核酸分解途径,葡萄糖 吸收受阻.阿苯哒唑和奥芬哒唑体外非竞争性抑制延 胡索酸还原酶复合体活性.苯并咪唑氨基甲酸酯类抗 囊药物的作用靶点是延胡索酸还原酶(FR)复合体, 通过抑制猪囊尾蚴能量代谢和葡萄糖的摄取,致使其 能源耗竭导致死亡. 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