微流控芯片技术在基因分析研究中应用

微流控芯片技术在基因分析研究中应用 参考文献 3 讨 论 〔1〕 Ingelman SM . Phar macogenetics of cytochro me P450 and it s appli2 C YP2 E1 是细胞色素 P450 亚型中的重要成分 ,主要分布 catio ns in drug t herpy :t he past ,p resent and f ut re J . Trends Phar 2 于人和鼠等动物的肝脏组织 。C YP2 E1 参与 70 多种低分子 ( ) macol Sci ,2004 ,25 4:193 - 200 . 物质代谢 ,其中大部分为前致癌物或前毒物 ,小部分是临床药 〔2〕 雷霆雯 , 李红梅 , 许庆忠 , 等. 大青叶对 C YP1A1 酶活性及转录〔8〕( ) 水帄影响J . 中国公共卫生 ,2006 ,22 10:1241 - 1242 .物。本实验结果显示 ,漏芦对 C YP2 E1 酶活性有浓度依赖 〔3〕 李峰 , 倪润洲 , 肖明兵. 大鼠 肝 细 胞 原 代 培 养 技 术 因 素 的 探 讨 性抑制作用 , 抑 制 率 最 高 可 达 50 %以 上 , 并 下 调 其 C YP2 E1( ) J . 南通大学学报 :医学版 ,2006 ,26 1:43 - 44mRNA 表达 ,提示漏芦是通过降低 C YP2 E1 的转录水帄而产 α〔4〕 杨静 ,彭仁绣 ,于皆帄. 18- 甘草酸下调“胶原蛋白凝胶三明治” 生抑制作用 。漏芦对 C YP2 E1 酶活性的抑制可能在 3 方面产 培养的大鼠肝细胞 P450 酶活性及 mRNA 的表达 J . 中国药理 () 生影响 : 1C YP2 E1 主要通过催化相对分子质量低的前致癌 ( ) 学与毒理学杂志 ,2001 ,15 2:155 - 158 . 物如亚硝胺类和偶氮化合物 N - 亚硝基二甲胺等去烷基 、去 〔5〕 李伟荣 ,董静 , 宓穗卿. 大鼠肝微粒体细胞色素 P450 含量的影硝基反应使之转变为致癌物 ,增加机体患肿瘤的机率 。漏芦 ( ) 响J . 广东医学 ,2005 ,27 9:1093 .抑制 C YP2 E1 活性能减少前致癌物活化 ,降低对致癌物的暴 〔6〕 Peng RX ,L ei SB , Gao P. The capactiy of drug metabolism in Chi2( ) 露危险 ,具有化学性预防肿瘤的作用 。2C YP2 E1 是肝的特 nese fetal livers ?. Metabolism of et hylmo rp hine aminopyrine and 〔9〕异性功能酶,肝脏是外源物质代谢的器官 ,一些小分子量的 ( ) aniline J . Asian Pac J Phar macol ,1990 ,5 1:13 - 18 . C YP2 E1 底物如氟烷 、四氯化碳等在 C YP2 E1 催化下生成具 〔7〕 Zhang Q Y , Dunbar D , Kaminsky L S. et al . Characterizatio n of 有肝脏毒性的活性中间产物 ,漏芦通过抑制 C YP2 E1 活性可 mo use small intestinal cytochro me P450 exp ressio n J . Dru g 减少这些毒性物质生成 ,在预防与治疗肝损伤方面可能有一 ( ) Metabolism and Dispo sitio n ,2003 ,31 11:1351 - 1360 . () 定作用 。3C YP2 E1 参与部分药物代谢如异烟肼 、乙酰氨基 〔8〕 周宏 灏. 遗 传 药 理 学 J . 2 版. 北 京 : 科 技 出 版 社 , 2001 : 53 -酚等 。本实验结果提示 ,漏芦合并使用以 C YP2 E1 为底物的 122 . 药物要注意漏芦可能降低代谢速度 ,长期大剂量使用易引起 〔9〕 Xiao bo Man , Liang Tang , Xiuhua Qiu , et al . Exp ressio n of cy2药物蓄积而引起中毒 。 tochro me P4502 E1 gene in heaptocelluar carcino ma J . Wo rld ( ) Jo urnal of Gast roenterology ,2004 ,10 11:1565 - 1568 . )( 文涛编辑 赵淑艳校对 收稿日期 : 2006212201 【综述】( ) 文章编号 : 100120580 20070720829203 中图分类号 : R 446 文献标志码 : A 3微流控芯片技术在基因分析研究中应用 王翠娟 ,邵华 ,张放 ( ,在此基础上容易制成功能齐全的便携式仪器 , 片上成为可能 20 世纪 90 年代初 ,以微机电加工技术 micro2elect ro me2 ( ) chanical systems ,M EMS为基础的微型全分析系统 miniat ur2可用于各类现场分析 。原则上 ,微流控芯片可应用于各个分 μ ized total analysis systems , 或 micro total analysis systems ,2析领域 ,如生物医学 、新药物的合成与筛选 、食品和商品检验 、 ) TAS,在近 10 余年中已经发展为当前世界上最前沿的科技 环境监测 、刑事科学 、军事科学和航天科学等其他重要应用领 μ() 领域之一 。2TAS 系统也被称为芯片实验室 lab2o n2a2chip , 域 ,其中生物分析是热点 。目前其应用主要集中在核酸分离 〔1〕 是生物芯片的最终目标。该技术是将化学 、生物学等领域和定量 、DNA 测序 、基因突变和基因差异表达分析等 。另外 , 所涉及的样品制备 、生物与化学反应 、分离和检测等过程缩微 蛋白质的筛分在微流控芯片中也已有报道 。本文拟对微流控 或基本缩微到一块几帄方厘米的芯片上 ,用以完成不同的生 芯片的概念和特点作简要介绍 ,并对近年国内外学者利用微 物或化学反应过程 ,并对其产物进行分析的技术 ,是一个微而流控芯片进行基因分析的研究进展作一综述 。 全的系统 。与相对应的宏观分析方法比较 ,该系统有很多优 1 微流控芯片技术在基因分析中的应用点 。微米级通道中的高导热和传质速率及缩小的结构尺寸使 ( 111 聚合酶链反应 聚合酶链反应 Polymerase Chain Reac2其具有极高的效率 ,由于微流控分析的试样及试剂已降低到 ) tio n , PCR是一种对核酸分子进行体外扩增的方法 , 已经广 微升水帄 ,减少了分析费用和贵重生物试剂的消耗 ,同时减少 泛应用于生物医学各个领域 ,反应的主要操作过程在 3 个温 μ了环境污染 。2TAS 可分为芯片式和非芯片式两大类 ,从文 度区间重复循环 ,经过酶促反应扩增特定的 DNA 片段 ,扩增献和 商 业 开 发 看 , 芯 片 式 是 发 展 的 重 点 。其 中 在 芯 片 式 后的产物可用于诊断疾病 、检验组织或血样中的特殊细菌或 μ2TAS中 ,依据芯片的结构和工作原理又可分为微流控芯片 病毒 。常规的 PCR 过程需要制样 、扩增及检测等步骤 ,既费 ( ) μ和微阵列芯片 。目前微流控芯片 microfludic chip 是2TAS 时又费力 ,而微流控芯片技术用于 PCR 扩增及相关检测时 , 中最活跃的领域和发展前沿 ,用微加工技术制作的微流控芯 既能简化操作步骤 ,又能显著提高检测效率 。目前 ,反应池内 片部件的微小尺寸使多个部件与功能集成在数帄方厘米的芯 固定扩增式 PCR 和连续流动式 PCR 已经成为芯片上 PCR 扩 〔2〕 增的 2 种主要形式。前者基于静态反应 ,通过反应池内温( ) 3 基金项目 : 国家自然科学基金 30471429 ; 山东省科技攻关项目 度的周期性变化实现扩增 ,后者是依靠生物样品顺序流过 3 ( )2004 GG2202153 〔3〕个不同的温度区实现扩增 。1996 年 Kopp 等首次提出连续 作者单位 : 山东省职业卫生与职业病防治研究院 ,济南 250062 ( ) 流动式微流 控 PCR 芯 片 , 其 核 酸 的 扩 增 过 程 均 在 流 动 中 进 作者简介 : 王翠娟 1979 - ,女 ,山东人 ,硕士在读 ,主要从事职业 卫生与环境卫生工作 。行 ,流动式芯片下面分别有 95 ?、72 ?、60 ?3 个不同的恒温 通讯作者 : 邵华 ( ,样品流经此 3 个区域即能实现自动在同一块芯片上完 区域 113 多态 性 检 测 单 核 苷 酸 多 态 性 single nucleotide poly2 ) 成 PCR 的变性 、退火 、延伸 3 步反应 , 大大缩短了扩 增 的 时 morp hism , SN P就 是 人 类 基 因 组 中 物 理 图 谱 的 理 想 遗 传 标 间 ,同时所需的反应试剂也比传统的 PCR 少 。此后 ,很多科 记 ,能满足对代谢 、生长和疾病相关基因的定 位 。SN P 在 人 学家在此项研究的基础上 ,对连续流动式 PCR 技术进行了更类基因组中出现的频率非常高 ,帄均每 500,1 000 个碱基对〔12〕〔4〕中就有一个 SN P ,估计其总数在 300 万个以上。基因多态 进一步的改进 ,使其更加微型化 。1998 年 , Manz 等首次应 用玻璃基微流控芯片对 176 bp 的片段实现了体外连续放大 , 性是人类各种可遗传变异中常见的现象 ,主要表现为长度和 完成了 20 次扩增 ,最短仅需要 115 min ,最长需要 1817 min 。 序列多态性两个方面 。长度多态性包括大片段 DNA 插入或 〔5〕 缺失引起的基因突变以及高度重复序列中小卫星或微卫星位Schneegass用流动型 PCR 扩增芯片在 35 min 内成功扩增了 〔6〕点的重复串联数目不同而引起的多态性 ; 而序列多态性则来 106 ,379 和 700 bp 的 DNA 片段 。姚李英等采用聚甲基丙 ( ) 源于单碱基的替换 、插入或缺失 ,也叫基因的点突变 。病态下 烯酸甲酯 PMMA高聚物代替硅和玻璃作为微流控芯片 许多突变涉及到大范围的基因缺失或复制 。如杜氏肌营养不的基片材料 ,美国 Kloehn 公司的精密注射泵作为进样系统 , () 良 DMD是一种 X 染色体连锁的隐性遗传病 ,60 %的患者可 在 10 nl/ s 的进样速度下 ,在 20 个循环的 PCR 微流控芯片上 伴有抗击萎缩蛋白基因的缺失 ,且主要发生在 9 个突变热点 进行了 DNA 扩增实验 ,实验仅耗时 15 min ,实验时 3 个温区 的温度分别为变性 104 ?,复性 60 ?,延伸 82 ?。区 。SN P 检验方法主要是以 PCR 为基础 ,通过电泳技术分辨 DNA 片 段 的 各 种 差 异 来 进 行 基 因 分 型 。 碱基差 异 造 成 的 但在多个样品连续扩增时 ,由于通过人工换样 ,降低了单 〔13〕 Cantafora 等通过 Agilent 2100 芯片分析仪 ,以低密度脂蛋位时间扩增的样品数 ,也增加了交叉感染的可能 。为克服以 ( ) 〔7〕白受体基因 D19s394 位点的四核苷酸重复序列 AAA G为遗 上缺陷 ,刘金华等研制了具有 35 个扩增循环的螺旋通道微 传标记 ,对 70 名家族性高胆固醇血症携带者和 100 名正常人 流控 PCR 玻璃芯片 ,在 26min 内成功扩增了质量浓度仅为 10 进行了基因分型 ,并进行了家族性连锁分析 ,其核心序列的重 ng/ ml 的 6012 bp 的 DNA 。在芯片内液流由内向外流 ,减少 ( 复数目为 0,17 不等 ,等位基因判断的偏差为 ?016, 了反应液在微通道中流动时的分散和阻力 ,将小孔径石英毛) ?0175bp 。Liu D Y 研究组将 PCR 扩增与毛细管电泳分离集 () 成在玻璃微流控芯片上 ,用激光诱导荧光 L IF检测 ,建立了 ( ) 细管作为 顺 序 注 射 系 统 SI的 连 接 通 路 , 将 死 体 积 降 低 至( ) 一个用于严重急性呼吸系统综合征 SARS冠状病毒的实验 013 nl ,从而完成了扩增过程中微升级样品的自动控制 ,实现 系统 ,和常规的 PCR2帄板凝胶电泳比较 ,该系统检测灵敏度 了在芯片上进行多个样品的连续自动扩增 、微升级样品的自 〔14〕提高 100 倍 。宋沁馨等用芯片电泳快速检测人 p53 基因 动换样 、连续 PCR 扩增和微通道洗涤等功能 ,样品间无交叉 外显子 8 上的突变点 ,采用芯片电泳检测结合特异性引物单 污染 。由此可见 ,利用流通式微流控 PCR 芯片已成功地实现 ( ) 碱基延伸法 SB E,除去 SB E 反应时间 ,芯片电泳可在 100 s 〔15〕了 PCR 的快速扩增 ,其优点是扩增速度快 ,操作简便 ,使用样 内检测出结果 , 简便而又准确 。L u C Y 等在 PCR 和限制 性核酸内 切 酶 消 化 操 作 后 , 用 Agilent 2100 芯 片 分 析 仪 的 品和试剂少 ,芯片可以重复使用 。 DNA500 和 DNA1000 试剂盒相关程序分析 DNA 点突变 ,与 112 核酸分离与测序 微流控芯片分析在生命科学领域的 主传统的用凝胶电泳限制性片段长度多态性分析方法相比 ,优 要应用对象之一是核酸分析 。由于在微通道条件下 ,施加 〔16〕点为灵 敏 度 高 重 复 性 好 。汪 洋 等利 用 微 流 控 芯 片 检 测 电场产生的焦耳热效应低 ,注入的试样量少 ,分子扩散 程 度p16 基因的异常甲基化 。通过对肺癌患者血浆标本的检测 , 低 ,因此 ,微流控电泳分析在核酸诊断分离中的分辨能力远远 使病人血浆中的 p16 基因甲基化的异常改变可能成为辅助肺 癌早期诊断和高危人群筛选的分子标记物 ,以期建立一种崭 好于帄板凝胶电泳 。微芯片的快速高质量的分离效能在寡核 〔17〕新而可靠的早期肺癌临床诊断标准 。Steven 等采用以聚 苷酸 、DNA 、RNA 片段分析以及基因表型和测序应用中得到 ( ) () ( 碳酸酯 PC制作的连接酶检测反应器 L DR及 PMMA 聚甲 充分反映 。微芯片上的 DNA 基因型分析可以迅速完成基因 ) 基丙烯酸甲酯制作的微通道为主要部件的微流控芯片 ,对大 鉴别 ,显著提高其在基因组学 、诊断学 、遗传药理学 、法医学检 量样本 DNA 中可能发生点突变的序列进行了检测 , 达到了 验方面的性能 。1994 年 , Effenhauser 最早在微流控芯片上进 预期的效果 ,处理一个样本只需要约 1911 min 。 行 DNA 分离 ,分离了长度为 10,15 bp 的 DNA 低聚物的混114 其他 除了应用于基因多态性检测和 DNA 测序 ,芯片 合物 。尔后又陆续在微芯片电泳上进行 DNA 分离的基础性 电泳还可通过 PCR 产物分析进行外源性病原体基因的快速 〔8〕研究工作 。Kaji等人应用纳米技术 , 在石英芯片的微通道 检测 ,并具有较高的灵敏度和特异性 。针对病原微生物基因() 内制作出纳米柱 直径 100,500 nm ,高约 500,5 000 nm,使 组的特征性片段 、染色体 DNA 的序列多态型 、基因变异的位 用这种纳米柱作为筛网 ,在直流电场下可以有效地分离 DNA点及特征等 ,设计和选择合适的核酸探针 ,经 PCR 扩增后检 〔9〕() 片段 1,38 kb以及较大的 DNA 分子 。Baba 等采用步进 测 ,就能获得病原微生物 种 属 、亚 型 、毒 力 、抗 药 、致 病 、同 源线性梯度凝胶方式 ,借助于筛分介质中孔径的差异 ,明显改善 性 、多态型 、变异和表达等信息 ,为疾病的诊断和治疗提供一 了 DNA 片段的分离 。近 10 年来 ,随着微流控分析芯片在技 个很好的切人点 。有关该技术的应用已有报道 ,应用微流控 术上的不 断 完 善 和 发 展 , 微 流 控 分 析 芯 片 系 统 所 能 分 离 的 芯片可同时检测多种病原微生物核酸的 PCR 产物如乙型肝 DNA 片段的长度也在逐步扩大 ,可完成对 DNA 片段的测序 和遗传物质的分离 、分析 ,并且出现了可同时进行帄行分析的 〔10〕多通道阵列芯片 。Mat hies 等在直径 150 mm 的圆盘式玻 璃芯片上刻蚀了 96 条长 16 cm 的逶迤型毛细管电泳阵列通 ( ) ( ) ( ) 道 ,完成了 4 色 M13 标准 DNA 的帄行分离检测 ,测序长度可炎病毒 HBV、丙型肝炎病毒 HCV、免疫缺陷病毒 HIV、 〔11〕〔18〕 达 500 个 bp ,分离时间却少于 30 min 。L agally等开发出一 梅毒等 ,如卞茂红等应用 PCR2微流芯片检测无偿献血者 的初 、复检合格血液的混合血清 HBV DNA ,对献血者进行更 种集成化 DNA 分析系统 , 首次在单个芯片上完成了聚合酶 ( ) 为有效的筛选 ,从微流芯片法重复定量检测结果来看 ,该方法 链反应 - 电泳 PCR2CE的集成 ,建立了集取样 、PCR 扩增和 CE 分离分析于一体的微系统 ,不仅系统功能更强大 ,而且装 的重复性好 ,结果稳定且特异性强 ,检测速度快 ,一般 3 h 左 右能完成操作的全过程 ,有助于减少甚至避免输血传播疾病 置也更紧凑 、更完善 。Medintz 等用 96 通道圆盘式阵列芯片 〔19〕 的发生 。Noer holm 等研制了一种高分子材料的微流控 -毛细 管 电 泳 进 行 DNA 测 序 , 500 bp 分 离 测 序 时 间 少 于 30 min ,总错检率小于 1 % 。微阵列芯片 ,可以用于核酸杂交并对其进行实时检测 。该芯 〔7 〕 刘金华 ,殷学锋 ,方肇伦. 螺旋通道微流控 PCR 芯片连续自动扩增 片具有一个进样口 ,一个可容纳 1 000 点微阵列的杂交室 、一 () DNA 片段的研究J . 高等化学学报 ,2004 ,25 1:30 - 34.个废液池和一个通气口 。探针 DNA 分子是通过微阵列技术 〔8 〕 Knji N , Tezuka Y , Takamura Y , et al . Separatio n of lo ng DNA印制到基体表面的 ,所要分析的样品由微流控体系加入并与 molecules by quartz nanopillar chip s under a direct current elect ric 探针反应 。该技术吸收了微流控与微阵列两者的优点 ,微流 ( ) fieldJ . Anal Chem. 2004 J an 1 ;76 1:15 - 22 . 控体系可以通过调节温度自动控制与微阵列 DNA 反应的样 〔9 〕 Zhang L ,Dang F ,Baba Y. Step wise gradient of linear polymer ma2 t rices in microchip elect rop ho resis fo r high resolutio n separatio n of 品量 ,同时吸取了微阵列技术中可通过荧光信号对杂交进行 ( ) DNAJ . Elect ro p ho resis ,2002 ,23 14:2341 - 2346 . 实时监测的长处 。 〔10〕 Medintz IL , Paegel BM ,Mat hies RA. Microfabricated capillararray 2 展 望 elect rop ho resis DNA analysis systems J . Chro mato grap hy A , 经过十几年的发展 ,微流控分析芯片技术在基因分析中 ( ) 2001 ,924 1 - 2:265 - 270 . 的应用越来越广泛 ,并不断取得积极和具有突破性的成果 ,并 〔11〕 L agally E T ,Simp so n PC ,Mat hies RA. Mo nolit hic integrated DNA amplificatio n and capillary elect rop ho resis analysis systemJ . Sen 2 由于自身突出的优点 ,可能在不远的将来成为基因分析的主 ( ) so rs and Act uato rs B ,2000 ,63 3:138 - 146 . 要工具 ,其技术可以为后基因时代的基因组学研究提供一个 〔12〕 Sherry S T , Ward M H , Kholo dov M ,et al . db SN P :t he NCB I data 更为强大的帄台 。但在一项新技术高速发展的同时 ,既存在 base of geneticvariatio n J . Nuleicacids Res ,2001 ,29 :308 - 311 . 着优势 ,也面临着限制其发展的不利因素 。目前 ,微流控芯片 〔13〕 Cantafo ra A ,Blot ta I ,BruzzeSe N ,et al . Rapid sizing of micro sate2的集成度仍不够高 ,多数检测器的体积过大 ,实现集成化还有 llite alleles by gel elect rop ho resis o n microfabricated channels : ap2 plicatio n to t he D19 S394 tet ranucleotide repeat fo r co segregatio n 很长的路要走 。在目前加工条件下微流控芯片的成本较高 , st udy of familial hyper cholesterolemia J . Elect ro p ho resis , 2001 , 还难以满足有关成果推广应用的要求 。当前报道的大部分微 ( ) 22 18:4012 - 4015 . 流控芯片分析系统功能仍不够全 ,不包括试样的前处理功能 , 〔14〕 宋沁馨 ,李正帄 ,周国华 ,等. 用芯片电泳快速检测人 P53 基因外 如何解决实际试样的分析 ,更好地利用现有的微机电加工技 () 显子 8 上的突变J . 中国医科大学学报 ,2003 ,34 4:344 - 346. ( ) μ术 M EMS和2TAS 技术 , 发展实用性的芯片分 析 帄 台 , 需 〔15〕 L u C Y , Tao DJ , Yang To m ,et al . Detectio n of DNA mutatio ns as2 sociated wit h mitocho ndrial diseases by Agilent 2100 bioanalyzer 要进一步研究 。 ( ) J . Clinica Chimica Acta ,2002 ,318 12:97 - 105 . 参考文献 〔16〕 汪洋 , 邹丽娟 , 许 关 东 , 等. 微 流 控 芯 片 检 测 肺 癌 患 者 血 浆 中 〔1 〕 Krishnan M , Namasivayam V ,Lin R , et al . Microfabricated reac2p16 基因异常甲基化在临床应用的 J . 生物化学与生物 ( ) tio n and separatio n systemsJ . Anal ytical Biotecho nlogy ,2001 ,12 物理进展 ,2004 ,31 12:1085 - 1089 . ( ) 1:92 - 98 . 〔17〕 Steven A. Soper , Masahiko Hashimoto , Cat herine Sit uma , et al .〔2 〕 Liu J , Enzelberger M ,Quake S. A nanoliter rotary device for polymerase Fabricatio n of DNA microarrays o nto polymer subst rates using U V () chain reactionJ . Electro phoresis ,2002 ,23 10:1531 - 1536. mo dificatio n p rotocols wit h int2egratio n into microfluidic platfo r ms 〔3 〕 Kopp MU ,de Mello AJ ,Manz A. Chemical amplification continuous2flowfo r t he sensing of low2abundant DNA point mutatio ns J . Met h 2 () PCR on a chip J . 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( ) On a Chip ,2004 ,4 1:28 - 37 . 〔6 〕 姚李英 ,祁恒 ,陈涛 ,等. 聚合酶链式反应微流控芯片的准分子激光 )() ( 制备和应用研究J . 高等化学学报 ,2006 ,27 3:428 - 431. 收稿日期 : 2006210226 郑新编辑 赵淑艳校对 中华临床医师杂志( 电子版) 征稿启事 () (中华临床医师杂志 电子版是新闻出版总署“十一五”国家重点出版规划立项的电子出版物之一 新出音 ) ( 2006 817 号,由中华人民共和国卫生部主管 , 中华医学会主办 , 中华医学电子音像出版社出版 新出音 ) 2007 74 号,面向国内外公开发行 。 () 中华临床医师杂志 电子版以 CD - ROM 光盘附导读形式出版 ,具有形式新颖 、报道信息容量大的特点 。本刊不仅可以传递文字信息和图形信息 ,还可以传递视频课件 ,具有很强的互动性 。主要栏目有 : 述评 、 () 临床研究 、实验研究 、短篇论著 、综述 、专家讲座 视频形式、临床经验 、病例 、疑难病例分析 、会议报道和 继续医学教育课堂等 。 著名医学专家郭应禄院士 、谌贻璞教授担任本刊总编 ,与全国八十余位各医学学科的知名专家组成了期 刊编委会 。在编委会的集体领导下 ,本刊将以科学的 ,给予作者投稿及时处理 ,分科送审 ,快速回复 ,在最 短时间内将专家意见反馈给作者 ,信守科研 、编辑道德 ,以使作者的科研成果 、临床经验第一时间得以传播 ,同 时为读者提供最新的医学信息 ,从中获得科研实践的借鉴 。 欢迎医学界同行积极投稿并订阅杂志 。 本刊网 址 :www . clinicmed. net & www . clinicmed. cn () 投稿订阅信箱 :北京市 100035 - 50 信箱《中华临床医师杂志 电子版编辑部》收 邮编 :100035 电话 :010 - 62219211 传真 :010 - 62234701 投稿专用电子信箱 :L cdocto r @163 . co m