【doc】 固定矫治器对龈沟液中蛋白质成分的影响

【doc】 固定矫治器对龈沟液中蛋白质成分的影响 固定矫治器对龈沟液中蛋白质成分的影响 ?238?口腔医学2005年8月(第25卷第4期)— St— omatolo!.!:!堡: 固定矫治器对龈沟液中蛋白质成分的影响 张扬.任宏.张丹 [摘要]目的检测青少年戴用固定矫治器前后龈沟液(GCF)中蛋白质成分的变化.方法随机选择接受双颌固定矫治器 治疗的青少年患者40例.以首诊时的牙周状态为基线,佩戴固定矫治器后4,8,12周时复诊,分别菌斑指数,牙龈出血指 数,测量探诊深度和附着丧失水平.采用滤纸条法收集龈沟液样本,对龈沟液总蛋白和钙结合蛋白进行检测分析.结果戴 用固定矫治器后,GCF量,钙结合蛋白和总蛋白的含量均增加;在各检测时间点,钙结合蛋白/总蛋白的值差异无显着性.结论 检测GCF中钙结合蛋白和总蛋白含量的变化,可以反映青少年戴用固定矫治器后的牙周健康状况. [关键词]龈沟液;钙结合蛋白;总蛋白 [中图分类号】R783.5[文献标识码】A[文章编号】1003—9872(21305)04-0238—02 Ckulgesofeaiprotectinandtotalproteinin~ivalcrevicularfluiddIInIlgortho dontictherapy ZHANGYang,RENHong,ZHANGDan.(DepartmentOrthodontics,HospitalofStomotology,ChinaMedicalUniversity,Sbenyang 110002,China) Abstract:ObjectiveToobseI,changesofcalprotectinandtotalproteiningingivalcrevicularfluid(GCF)inadolescentswithfixedor— thodonficappliancesandevaluatetheeffectsofthefixedorthodonticappliancesOilthehealthoftheperiodontalfi~ues.Methods40subjects withfixedorthodonticappliancesagedbetween11and18werecheckedbeforeandatthe4thweek.8thweekand12thweekafterwearingthe f? edorthodonticappliances.GCFwascollectedwithprefabricatedpaperstrips.Theplaqueindex(PLI),bleedingonpmbi~(BOP),pmbing depth(PD)andtheattachmentlOSS(AL)wererecorded.TheamountofcMpmtectinwasmoasuredbyELISAandtheamountoftotalprotein wasassessedwithprotein:dyebindingassay.ResultsTheamountofGCF,cMpmtectinandtotalproteinincreasedsignificantlyafterthesub- jectsworetheedorthodonticappliances.ConclusionTheamountofcMpmtectinandtotalproteininGCFCanmonitortheperiodontal healthintheorthodonticthempy. Keywords:ginvalcrevicularfluid;calcium-bindingproteins;totalprotein Stomatology,2005,25(4):238—239 通过检测青少年戴用固定矫治器前后,龈沟液 (GCF)量及其蛋白质含量的变化,评价固定矫治器 对牙周健康状况的影响. 1资料和方法 1.1一般资料 随机选择中国医科大学口腔医学院正畸科门诊 接受双颌固定矫治器治疗的青少年40例.患者符 合以下:年龄11,18周岁;无全身系统性疾病; 1年内未做过系统的牙周治疗;近2个月未服用过 任何抗生素;口腔卫生良好,菌斑指数(plaqueindex, PLI)?3;无重度牙龈炎,牙周炎,依从性良好.其中 男16例,女24例,平均年龄14.8岁.每个试验对 象选取黏结带环的左上第一恒磨牙和黏结托槽的右 下第一中切牙为指数牙,共80个牙位. 1.2方法 1.2.1临床牙周指标患者首次就诊时的牙周状 作者单位:中国医科大学口腔医学院口腔正畸科,沈阳(110002) 通讯作者:张扬1:(024)22891418 态为基线,进行口腔卫生教育,指导正确的刷牙方 法.佩带全口固定矫治器后4,8,12周时复诊.测 量并记录牙周临床指标:PLI,出血指数(bleedingin. dex,BI),牙周探诊深度(probingdepth,PD)和附着 丧失水平(attachmentloss,AL). 1.2.2GCF的取样将2nl/n×10nl/nWhatman3M 无菌滤纸条置于已高温高压消毒的Ep管内,电子天 平(上海天平仪器厂)称重.棉卷隔湿,探针去除龈 上菌斑,气枪轻轻吹干.将滤纸条置于指数牙的近 颊点处龈沟内,至遇到轻微阻力为止.30S后取出, 密封于Ep管内,再次称重后一70?保存,待测.计 算两次称重的差值,即为GCF量.如滤纸条被血 液,唾液污染则弃之不用,再次取样. 1.2.3样本处理样本室温下解冻,每一管中加入 351的(0.01molfL)三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液 (Tris—HC1,pH8.0).室温下超声震荡20min,然后 4?下12000r/min离心10min(TCL一12型台式高 速冷冻离心机),保存洗提液作为待测样本. 1.2.4GCF中总蛋白的检测用染料结合比色法 口腔医学2005年8月(第25卷第4期)Stomatology,Vo1.25,No.4,Aug.2005 检测总蛋白.以0.1g/L的小牛蛋白(s—HC1溶 液)作为标准蛋白溶液,用微量加样器提取系列标准 蛋白,分别加人96孔酶标板的样本孔中,再吸取各 GCF样本3加入同一块板的其余孔内,在每孔内 加人200l考马斯亮蓝G一250,立即放人450型微 板读数仪(Bio—TekELX800,美国)进行检测.以系 列标准蛋白的吸光度值作标准曲线,测定并计算 GCF中总蛋白的含量和浓度. 1.2.5钙结合蛋白的检测采用ELISA法测定钙 结合蛋白.?用PBS缓冲液(0.1mol/L,pH7.4)稀 释抗钙结合蛋白的特异抗体,在96孔酶标板中每孔 加人200,4oC过夜.?将钙结合蛋白标准液系列 稀释(4.00,6.25mg/L),每孔加人50l;将已稀释 好的样本5O加人孔内,用PBS缓冲液5O1作为 空白对照加人孔内.?将碱性磷酸酶(ALP)标记的 抗钙结合蛋白抗体(1:1600稀释)50l加人孔内. ?将100l含1g/L的底物加入孔内,30min后放入 450型微板读数仪进行检测.以系列稀释的钙结合 蛋白的吸光度值制作标准曲线,测定并计算样本中 钙结合蛋白的含量和浓度. 1.3统计学方法 采用秩和检验并作等级相关分析. 2结果 2.1固定矫治器戴用前后临床指标的变化 固定矫治器戴用前,多数患者的口腔卫生良好, 牙龈健康,呈粉红色,探之不出血或点状出血.戴用 4周时,PLI和BI增高;8周时,PD增高;12周时, PLI,BI,PD增高明显,与基线比较,差异具有显着性 (P<0.01).80个牙位均未见附着丧失,见表l. 表140例青少年固定矫治器放置前后牙周临床指标的对比 Tab1Clinicallmr’am~tersbeforeandafterWe~lI’ing fixedorthodonticappliances(?s) 与基线比较,P<0.05,,P<0.Ol 2.2GCF量的变化 基线时GCF量较低,戴用矫治器4周时GCF量 即明显高于基线水平(P<0.01)(表2). 2.3钙结合蛋白和总蛋白含量的变化 钙结合蛋白和总蛋白含量在基线时分别为每牙 (27.9?12.6)ttg和(3.67-i-1.0a)ug,戴用矫治器后1 ? 239? 表240例青少年戴用固定矫治器后龈沟液成分的变化 Tab2aI柚gesofingredientsinGCFinadolescents wIdIfixedorthodonticappaane~(土s) 与基线时比较,P<0.05,一P<0.O1 个月时略高于基线,在第2个月时明显升高,差异有 显着性(P<0.05). 2.4钙结合蛋白/总蛋白的变化 在各检测时间点钙结合蛋白/总蛋白的值在 (12.9?5.6)%–(14.6?4.7)%,各值间差异均无显 着性. 3讨论 研究证明钙结合蛋白与牙周炎症密切相关.周 华等l1J发现,成人牙周炎组GCF中一种非血清源蛋 白12000蛋白的含量高于牙龈炎及牙周健康者. 在”进行性骨吸收”部位此蛋白的含量高于”静止性 骨吸收”部位.该蛋白含量还与BI,PD等临床指数 呈正相关.王戎机等【21iiE实其为钙结合蛋白的轻亚 基——M啪.赵亦兵等【3j研究表明,在健康牙龈向 牙龈炎发生,发展过程中,钙结合蛋白含量随牙龈炎 的进展而增加,其水平与牙周病临床和生化指标均 有良好的相关性,提示GCF中总蛋白和钙结合蛋白 水平是反映牙龈炎症较好的炎症指标. 本文研究青少年在戴用固定矫治器后,GCF中 蛋白质的变化,结果显示随着时间的增加,牙龈的炎 症程度加重,GCF量,GCF中钙结合蛋白和总蛋白含 量也明显升高,是反映牙龈炎症程度的较好的指标. 但是,牙龈炎与牙周炎有本质的区别,即牙周炎存在 着牙周组织的破坏.而青少年在戴用固定矫治器 后,仅存在着牙龈的炎症,不存在牙周支持组织的严 重破坏,所以还有待于进一步深人研究. [参考文献] [1]周华,孟焕新.龈沟液蛋白质成分的电泳分析[J].中华口腔医 学杂志,1998,33(2):1o9—11o. [2]王戎机,孟焕新,陈智滨,等.龈沟液12000蛋白质的N一末端 氨基酸序列分析及其l临床意义[J].中华口腔医学杂志,2002, 37(4):297—299. [3]赵亦兵,孟焕新,陈智滨.龈沟液钙结合蛋白和总蛋白在实验 性龈炎中的变化及相互关系[J].北京大学(医学版), 2003,35(6):668—670. (收稿日期:2005—03—26)