【word】 HPLC法测定骨疏康颗粒中淫羊藿苷的含量

【word】 HPLC法测定骨疏康颗粒中淫羊藿苷的含量 HPLC法测定骨疏康颗粒中淫羊藿苷的含 量 第3O卷第3期 2011年8月 河南大学(医学版) JournalofHenanUniversity(MedicalScience) Vo1.30NO.3 Aug.2011 HPLC法测定骨疏康颗粒中淫羊藿苷的含量 胡海延,张昀,张青青 (河南大学药学院化学研究室,河南开封475004) 摘要:日的:建立高效液相色谱法骨疏康颗粒中淫羊藿苷含量的方法.方法:色谱柱为ODS-C18柱,流动相为甲 醇一水三乙胺(60:40:0.2),醋酸调节pH6.0,流速为1.0mI/mira检;91Il波长为270rim.结果:淫羊藿苷在 10.0,5O.0ptg/mI范围内线性关系良好,平均加样回收率为99.8,RSD一0.60%(一6).结论:HPIC法 测定骨疏康颗粒中淫羊藿苷的含量准确度高,稳定性好,可用于该颗粒的质量控制. 关键词:骨疏康颗粒;淫羊藿苷;高效液相色谱法;含量测定 中图分类号:R927.2文献标识码:A文章编 号:1672—7606(2011)03—0163—03 DeterminationoficariiningushukanggranulabyHPLC HUHal—ting,ZHANGYun,ZHANGQing,qing (DepartmentofAnalyticalChemistry,PharmaceuticalCollegeofHenanUniversity China) Abstract:Objective:ToestablishamethodforthedeterminationoficariiningushukanggranulabyHPIC. Methods:Thechromatographicconditionswere:ODS-CI8columnasanalyticcolumn,methanol—water- triethylamine(60:40:0.2),pH6.0adjustedbyaceticacidasmobilephase,theflowratewas1.0mI/rain,and thedetectionwave-lengthwassetat270rim.Results:Thelinearityofieariinintherangof10.0,50.0”g/mL wasgoodFheaveragerecoverywas99.8,RSD一0.60(n一 6).Conclusion:Thismethodisaccurateand stabile,anditcanbeusedforthequantitycontrolofgushukanggranula. Keywords:Gushukanggranula;Icariin;HPIC;Contentdeterminatio 骨疏康颗粒为小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornumMaxim的干燥地上部分和熟地黄,骨碎补 等制成的复方制剂.具有补肾益气,活血壮骨功效,临 床用于气血不足所致的中老年骨质疏松,足膝酸软,腰 脊酸痛等症.其中淫羊藿苷是该药的有效成分之 一[1j .中国药典采用高效液相色谱法测定淫羊藿苷 的含量,目前测定淫羊藿苷含量的方法有薄层洗脱一 紫外分光光度法和HPIC法],但骨疏康颗粒中淫羊 藿苷的含量测定报道不多且不具体.本实验采用 HPLC法来测定骨疏康颗粒中淫羊藿苷的含量. 外器(日本岛津);N一2000双通道色谱工作站(浙 江大学智达信息有限公司);色谱柱Hypersil—ODS (4.6mm×150mm,5m,大连依利特科学仪器有限 公司);AG135型电子天平(瑞士,梅特勒一托利多); HS10260D型超声波清洗机(天津市恒奥科技发展有 限公司). 1.2试剂 淫羊藿苷对照品(中国药品生物制品检定所);骨疏 康颗粒(辽宁康辰药业有限公司,批号:080722);色谱甲 醇(天津四友生物医学技术有限公司);三乙胺(分析纯). 1仪器与试剂2方法与结果 1.1仪器 IC10AT型高效液相色谱仪及SPD一10A型紫 2.1对照品溶液的制备 精密称取淫羊藿苷对照品25.00mg于250mL 收稿日期:2011-03—12 作者简介:胡海廷(1963一),男,河南兰考人,讲师,从事分析化学的研 究工作. 河南大学(医学版),2Ol1年,第3O卷第3期 容量瓶中,加流动相甲醇一水一三乙胺(60:40:0.2), pH6.0适量使溶解,并用流动相稀释至刻度,摇匀即 得100t~g/mI的对照品储备液. 2.2供试品溶液的制备 取骨疏康颗粒一包,混匀后,精密称取1.0g,置 100mI容量瓶中,加流动相适量,超声提取40rain 使之完全溶解,冷却至室温,用流动相稀释至刻度,静 置,用0.45m微孑L滤膜滤过,即得供试品溶液. 1O 0o 90 80 70 60 50 40 30 20 】o O 2.3实验条件的选择 色谱条件:Hypersil—ODS柱(4.6mm× 150mm,5m),甲醇一水一三乙胺(60:40:0.2),用 醋酸调pH6.0为流动相;流速:1.0mL/min;检测波 长:270nm;柱温:室温;进样量:20I.在此色谱条 件下,得到淫羊藿苷的对照品溶液及供试品溶液的 HPIC图谱,见图1. 1lo 10o 9() go 70 60 5() 40 3() 20 10 0 图1骨疏康颗粒HPIC图谱 2.4方法学考察 2.4.1线性关系精密吸取淫羊藿苷对照品溶液 (100,ug/mI)1.()(),2.?,3..O,4.00,5.00mL分别 至10mI容量瓶中,加流动相至刻度,摇匀,制成 10.0,50.0t*g/mI的对照品溶液.各取20L注入 高效液相色谱仪,按2.2项下色谱条件进行测定,记 录色谱图.以峰面积y对浓度x进行线性回归,得 回归方程为:Y一48167X+10291,r一0.9996, “一5.结果明,淫羊藿苷在10.O,50.0,ug/mI范 围内具有良好的线性关系. 2.4.2精密度实验取线性关系项下的淫羊藿苷对 5678910 r/13.’1111 h.供i式,钴 照品溶液(30ptg/mI)重复进样6次,测定其峰面积, 计算RSD为0.60(一6). 2.4.3重现性实验取同一批号骨疏康颗粒6包, 按2.2项下供试品溶液的制备方法配制样品溶液6 份,取每份溶液20L进样,记录色谱图,测得淫羊藿 苷峰面积的重复性RSD为0.84. 2.4.4回收率实验精密称取含量测定项下已知 含量(2.58mg/g)的骨疏康颗粒供试品约0.625g (批号:080722)9份,分别加入淫羊藿苷对照品适量, 按供试品溶液的制备方法,制备加样回收供试品溶 液.测定回收率,结果见表1. 表l回收率实验结果(=9) 取样量/g样品含量/mg加入量/rag测得量/mg回收率/平均值 /%RSD/% O.624 0.624 0.624 O.625 0.625 0.625 0.625 0.626 O.626 2.92l 2.93l 2.947 3.335 3.348 3.329 3.516 3.5O0 3.494 99.8 313633129 ?叭??% ?? l11llll11 OOO222555盯盯叭 1l111l: 胡海廷,等:HPLC法测定骨疏康颗粒中淫羊藿苷的含量165 2.4.5稳定性实验按2.2项下供试品溶液的制 备方法制备供试品溶液1份(批号:080722),取2OL 进样,分别于0,2,4,8,12h各进样1次,连续考察 12h.结果表明,供试品溶液在12h内所测得的结果 基本一致,即供试品溶液在12h内稳定. 2.4.6样品含量的测定取6包骨疏康颗粒按2.2 项下供试品溶液的配制方法制备6份供试品溶液,按 2.3项下色谱条件分别进样,由外标法计算含量,结 果见表2. 表2样品含量测定 批号峰面积每份浓度/(g/mL)样品含量/(rag/g) 25.75 25.70 25.75 25.8O 25.55 26.25 2.575 2.57O 2.575 2.58O 2.555 2.625 3讨论 比较不同比例的甲醇一水系统为流动相,通过调 节2者的比例,当2者比为60:4O时出峰时间比较 合适.但由于峰形有些拖尾,故向流动相中添加除尾 剂三乙胺,比例是0.2,再用醋酸调节pH6.0.这 样得到的色谱峰形得以改善,分离效果较好,故用此 为流动相. 参考文献: [1]佟少辉.骨疏康颗粒中淫羊藿苷含量测定方法改进EJ]. 辽宁中医学院,2003,5(3):268. [2]张桂燕,刘斌,陈广耀.HPIC测定复方藿芪口服液中淫 羊藿苷的含量[J].中国中药杂志,2005,30(4): 31O一3l1. t3]王玉萍,郭宝林.仙灵骨葆胶囊中总黄酮及淫羊藿苷的含 量测定[J].中草药,2000,31(10):741—742. E43韩静,周利章,韩虹.脑灵素片质量研究[J].中成药, 2002,24(7):514—516. [责任编辑时红] 1694O4 520768 075577 646769 999981 1111112 }___