17β-羟甾类固醇脱氢酶ⅱ在异位子宫内膜的表达缺陷及其意义

17β-羟甾类固醇脱氢酶ⅱ在异位子宫内膜的表达缺陷及其意义 17β-羟甾类固醇脱氢酶?在异位子宫内膜的表达缺陷及其意义 17β-羟甾类固醇脱氢酶?在异位子宫内膜的表达缺陷及其意义 【摘要】 目的 研究子宫内膜异位症的异位内膜、在位内膜17β-羟 甾类固醇脱氢酶?(17β-HSD?)的表达,探讨其在子宫内膜异位症发 病中的意义。 方法 采用RT-PCR检测67例子宫内膜异位症患者的异 位子宫内膜、32例在位内膜组织17β-HSD? mRNA的表达,并与35 例对照组正常子宫内膜比较。 结果 (1)正常子宫内膜自增生晚期始 有17β-HSD? mRNA微量表达,分泌期逐渐增高并于分泌晚期达到高 峰;在位内膜的表达趋势与正常子宫内膜一致,但强度低于正常内膜 (P0.01);(2)异位内膜未检出17β-HSD? mRNA。 结论 子宫内膜异 位症存在17β-HSD?mRNA表达缺陷,导致异位内膜局部雌激素代谢 障碍,持续的雌激素微环境改变,促进异位内膜生长。 【关键词】 子 宫内膜异位症; 17-羟甾类脱氢酶类; 雌激素类 ABSTRACT: Objective To study the expression of 17β-hydroxysteroid dehydrogenase?(17β-HSD?) in the ectopic and eutopic endometrium of patients with endometriosis. Methods RT-PCR was used to assess 17β-HSD? messenger RNA(mRNA) expression in 67 ectopic and 32 eutopic endometrium with endometriosis, and compared with the 35 cases of normal endometrium. Results In normal uterine endometrium the expression of 17β-HSD? mRNA presented weak in the late proliferative phase and gradually increased in the secretory phase, and the highest in the late secretory phase. 17β-HSD? RNA expression was not appared in ectopic endometrium of endometriosis. In the eutopic endometrium of endometriosis of the expression of 17β-HSD? mRNA was lower than normal uterine endometrium(P0.01) also. Conclusion Deficiency of 17β-HSD? expression in the endometrium may elicie disturbance of local estrogen metabolism and promotes overgrowth of ectopic endometrium. KEY WORDS: 17-hydroxysteroid dehydrogenases; endometriosis; estrogen 子宫内膜异位症(EMS)是一种雌激素依赖性疾病。研究表明, 异位内膜间质细胞中有雌激素合成酶芳香化酶P450表达,能合成雌激素,使局部雌激素浓度增高,给予异位内膜生长的原动力,1,。笔者检测子宫内膜异位症患者的异位内膜、在位内膜和正常子宫内膜17β-HSD?的表达,探讨局部雌激素代谢情况。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 临床资料 子宫内膜异位症组选自福建医科大学附属第一医院和福建省妇幼保健院2003年月,2004年11月因子宫内膜异位症行腹腔镜或开腹手术的异位病灶共67例,卵巢子宫内膜异位囊肿(巧囊)壁45例,盆腹膜异位灶22例,,其中增生早期16例,增生中、晚期13例,分泌早期23例,分泌中晚期15例。32例同时刮取子宫前、后壁近宫底部内膜各1条,其中增生早期7例,增生中晚期8例,分泌早期9例,分泌中晚期8例。对照组以同样方法取同期输卵管因素不孕行腹腔镜手术者的子宫内膜和未经放、化疗治疗的宫颈癌?期患者子宫内膜,共35例,其中增生早期9例,增生中、晚期7例,分泌早期10例,分泌中晚期9例。所有入选者均为已婚,术前未用任何激素类药物治疗,无内科合并症,有正常月经周期(26,31)d,年龄(29?5)岁(23,40岁)。 巧囊标本实验前行H-E染色,光镜下经组织病理学鉴定为子宫内膜异位灶;在位内膜和对照组正常内膜月经期分别根据其月经周期推算,其病理学图像符合Noye’s分期标准,3,。 1.1.2 试剂 Trizol(RNA提取试剂,美国Invitrogen公司);M-MuLV反转录酶系统(加拿大MBI公司);5 U/μL Taq DNA聚合酶(上海博亚生物技术有限公司);DNA Mark(深圳晶美生物制品有限公司);凝胶扫描图像系统(GD2000,美国BIO-RAD公司)。 1.2 方法 1.2.1 取材 所有标本取材后即用磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗3次,离体后20 min内取新鲜组织50 mg,立即冻存于-72 ?超低温冰箱中,2 h内提取总RNA。为保证mRNA的完整性,尽量将总RNA立即逆转录成cDNA,置于-20 ?冰箱备用。 1.2.2 17β-HSD?mRNA表达 引物由上海生工生物技术服务有限公司合成。 17β-HSD?引物序列: F:5’-CGGTGCTCCAAATGGACATCAC-3’ R:5’-GGATGGAAGCAACTTTAATTCCCC-3’ 扩增目的基因片断长度为384 bp。 内参基因β-actin引物序列: F:5’-GGCATGGGTCAGAAGGATTCC-3’ R:5’-ATGTCACGCCACGATTTCCCGC-3’ 扩增判断长度为500 bp。 反应条件:95 ?预变性5 min,95 ?变性30 s?57 ?退火30 s?72 ? 延伸30 s,共35个循环,72 ?再延伸10 min。 1.2.3 PCR产物分析 取PCR产物经1.5,琼脂糖凝胶电泳,以100 bp DNA梯度标准的DNA Mark作为相对分子质量的标准。电泳完毕后进行图像分析。以17β-HSD2与β-actin两条带灰度值的比值作为17β-HSD mRNA的相对表达水平。 1.3 统计学处理 采用SPSS 11.0统计软件进行单因素方差分析,组间和组内比较用LSD检验。