反相高效液相色谱法测定竺黄复方片中甘草酸的含量

反相高效液相色谱法测定竺黄复方片中甘草酸的含量 DOC格式论文,方便您的复制修改删减 反相高效液相色谱法测定竺黄复方片中 甘草酸的含量 (作者:___________单位: ___________邮编: ___________) 【摘要】 目的采用反相高效液相色谱,RPHPLC,法测定竺黄复 方片中甘草酸的含量。采用kromasil C18柱,200 mm×4.6 mm,5 μm,,以甲醇-0.2 mol?L-1乙酸铵-冰乙酸,65?35?1,为流动相,流 速1 ml?min-1,柱温30 ?,波长250 nm。结果在0.402,2.010 μg之间,峰面积与进样量的线性关系为A= 673 028.287 8C -67 302.707 6,r=0.999 8,,平均回收率为99.66,。测得3批样品中甘 草酸的含量,以甘草酸铵计,分别为1.034,1.103和1.008 mg/片。结论所建方法简便、准确、重复性好,可用于竺黄复方片的质量控制。 【关键词】 竺黄复方片, 甘草酸, 反相高效液相色谱法 Abstract,ObjectiveTo establish an HPLC method to determine glycyrrhizic acid from prescription of Zhuhuang Tablet.MethodsThe column was kromasil C18 (200 mm×4.6 mm,5 μm), the mobile phase consisted of Methanol,0.2 DOC格式论文,方便您的复制修改删减 mol?L-1Ammonium acetate- Glacial acrtic acid (65:35:1), with the flow rate of 1 ml?min-1 and the UV detector was set at 250 nm.ResultsThe method showed a good range of 0.402,2.010 μg (r=0.999 8).The average recovery was 99.66%.The glycyrrhizic acid contents of three batch samples were 1.034, 1.103,1.008 mg, respectively.ConclusionThis method is simple, accurate, repeatable and suitable for the determination of glycyrrhizic acid in prescription of Zhuhuang Tablet. Key words,Prescription of Zhuhuang Tablet, Glycyrrhizic acid; RP–HPLC 竺黄复方片由甘草、力嘎都、牛黄、红花、榜嘎,唐古特乌头,等 九味药材组成,具有利肺、消炎、止痛的功效,用于小儿流感引起的 肺炎、上呼吸道感染等,1,。该方标准收载于《中华人民共和国卫生 部药品标准》藏药第一册,标准未收载鉴别项和含量测定项,不利于 生产和使用的相关部门控制其药品质量。本文拟建立甘草酸含量测定 方法,增加含量测定项,提高其质量标准。 1 材料 Waters2695/2690分离系统,2996,2487,检测器,Empower色 谱管理系统,岛津UV-2100型紫外分光光度计,Atuto Science AS5150超声波清洗仪,Sartorius公司BP211D电子天平。甲醇为 色谱纯,水为重蒸馏水,其它试剂均为纯。 2 方法与结果 DOC格式论文,方便您的复制修改删减 2.1 甘草酸的含量测定 2.1.1 色谱条件和系统适用性实验用kromasil色谱柱,200 mm×4.6 mm,5 μm,,流动相为甲醇-0.2 mol?L-1乙酸铵-冰乙酸,65?35?1,,流速1 ml?min-1,柱温,30 ?,检测波长250 nm,2,,按甘草酸铵峰计,色谱柱理论塔板数不低于2000,甘草酸铵峰与其它峰达到基线分离,峰形对称,色谱图见图1。 2.1.2 溶液的制备对照品溶液的制备,精密称取甘草酸铵对照品适量,置10 ml量瓶中,加甲醇-0.2 mol?L-1乙酸铵-冰乙酸,65?35?1,溶解并稀释至刻度,摇匀,使成为每毫升中含对照品0.201 mg的溶液即得。 样品溶液的制备,取竺黄复方片适量,研细,取1.5 g,精密称定,置100 ml具塞锥形瓶中,精密加入甲醇-0.2 mol?L-1乙酸铵-冰乙酸,65?35?1,溶液45 ml,称定重量,超声处理30 min,放冷,称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液,用0.45 μm滤膜滤过即得。 阴性样品溶液的制备,取缺甘草的阴性样品,照上述样品溶液制备方法处理即得阴性样品溶液。 2.2 方法学考察 2.2.1 线性范围精密量取上述甘草酸铵对照品溶液2,4,6,8,10 μl注入液相色谱仪,色谱图,测定其峰面积,并以峰面积A为纵坐标,进样量C,μg,为横坐标,进行回归,得回归方程,A= 673 028.287 8C - 67 302.707 6,甘草酸铵在0.402,2.010 μg之间,进 DOC格式论文,方便您的复制修改删减 样量与峰面积线性关系良好,r=0.999 8,。 2.2.2 精密度实验精密吸取对照品溶液10 μl,连续进样5次,甘草酸铵峰面积的RSD为0.97,,明仪器精密度良好。 2.2.3 重复性实验取竺黄复方片品,批号20040301,研细,取1.5 g,5份,精密称定,置100 ml具塞锥形瓶中,精密加入甲醇-0.2 mol?L-1乙酸铵-冰乙酸,65?35?1,溶液45 ml,称定重量,超声处理30 min,放冷,称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液。按上述色谱条件测定,记录色谱图,并计算含量,结果甘草酸含量,以甘草酸铵计,平均含量为2.75 mg?g-1,RSD为1.81,。上述实验表明,该方法的精密度较好。 2.2.4 稳定性实验取样品供试液,批号20040301,与甘草酸铵对照品分别于0,2,4,6,8 h,分别进样10 μl注入色谱仪,记录峰面积,平均峰面积为533 271 ,RSD为1.97 %,说明样品溶液8 h内稳定。 2.2.5 加样回收率实验精密量取甘草酸铵对照品溶液,0.2010 mg/ml,10 ml,5份,分别置100 ml具塞锥形瓶中,水浴上挥干甲醇,取已知含量的样品,批号20040301,约0.8 g,5份,精密称定,置上述锥形瓶中,加入甲醇-0.2 mol?L-1乙酸铵-冰乙酸,65?35?1,溶液45 ml,称定重量,超声处理30 min,放冷,称定重量,用上述溶剂补足减失的重量,摇匀,滤过,取上清液,用0.45 μm过滤膜过滤,作为供试品溶液。按上述色谱条件,注入高效液相色谱仪,记录色谱图,并计算回收率。结果见表1。表1 加样回收率实验结果,略, DOC格式论文,方便您的复制修改删减 2.2.6 专属性考察精密吸取阴性样品溶液10 μl,注入色谱仪,结果表明干草酸铵位置上无干扰峰。 2.2.7 样品测定样品按2.1.2项下方法制备样品溶液后,再按上述重复性试验项下方法测定含量。3批样品中甘草酸铵含量分别为1.034,1.103和1.008 mg/片。 3 讨论 在甘草酸的含量测定中,提取溶媒比较了甲醇提取和流动相提取,结果表明用流动相提取效果更佳。 本实验用RP–HPLC法测定竺黄复方片中甘草酸的含量,所建方法简便、准确、重复性好,可用于竺黄复方片的质量控制。 【参考文献】 ,1,国家药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准?藏药,第一册,S,.1995:251. ,2,国家药典委员会,中国药典,?部,S,.北京,化学工业出版社,2005,59.