[doc] 红外光谱法测定鸡蛋黄,松子,莲子中的磷脂含量

[doc] 红外光谱法测定鸡蛋黄,松子,莲子中的磷脂含量 红外光谱法测定鸡蛋黄,松子,莲子中的磷脂 含量 ‘‘均.圹只,干.山矿,遥争,竹玎巨,卯 红外光谱法测定鸡蛋黄,松字, 莲子中的磷脂含量 周丽芳许益民一(南京师范大学理化中心)—-———————一.’ 磷脂作为保健食品之一,具有强精益 肾,保肝补血.增强人体免疫功能,抗衰老 等作用.通常可以由钼蓝比色法,薄层扫描 法,高效液相色谱法对磷0}%含量生行测定. 本文首次采用红外光谱法对其进行测定,并 和钼蓝比色法比较,结果正确,稳定,测定 快速,简便,灵敏度高. l使鲁材料 日本岛津IR--408~外分光光度计 超声波提取器,离心机,电子天平 硅胶G制备板,三氯甲烷 品PC,磷脂酰胆碱Phosphatl— dyieholiae美国Sigma公司出品I 溴化钾?光谱纯,研磨过200目筛,用 前140?烘烤4h. Folch试剂:氯仿:甲醇=2:l 2磺瞻的提取分离 取各样品于烘箱中50?干燥48h,粉碎, 准确称取样品粉末各10gT具塞三角瓶中, 精密加)~Folch试剂100ml,称重后置超声 波提取器中振荡提取40mia,取出再称重以 补足减少的溶剂,待自然澄清后为样品提取 液. 精密吸取样品提取液2.0mlt小试管中 氮气吹千,加入少量Foich试剂溶解,用微 荤注射器成线披点于制备薄层板上,丙酮展 开三次,吹千,刮下厚点部分置试管中,用 Folch试剂6ml置超声波提取器中分三次振 荡提取,每次20mln,提取澉于3000~/min 条件下离-L,Smin合并提取液,氮气吹千后 加氯仿lOOml溶解,作为样品液留做红外. 3定性测定 取村品液及标准品分别以KBr}f”片法绘 制红外光谱,见图1.可得样品和际准.良有 相nd的磷:产吸收峰[I】(cl0,17tcm. P—O—c,1050--1090~ITI一:)提示样品液 中台有磷脂类成分. 4定量测定 4?1定量吸收峰选择.在磷脂类化合物 的红外光谱各特征吸:_殳峰中,以1740cm—l 处的c=0伸缩振动和1050一1090cm一’处 的P,0,c仲缩振动吸收强度最大,其中 c.O吸收峰峰形对称[2]定量准确,精密 度高,故选用1740cm一!处的C=0峰做为定 量吸收峰. 4?2测定方法选择.以标准品及样品分 别做KBr固体压片法和以cHcl々为溶剂的 掖膜法,其结果相同,采用豫膜法操作简 便,但样品用量大且溶剂峰不易完全扣除. 固体压片法则样品用量小又无溶剂峰的干 扰,所以以下实验均采用固体压片法. 采取标准品0.4mg溶于20”l氧仿中,加 A.KBr40mg,置玛瑙研钵中连续研磨,研 磨时间分别为2,3,4,5,6rain,称30mg 压片做红外得?研磨时问为4min及以上的 红外光谱数据稳定可靠,重复性好. 4.3标准曲线绘制 分别精确称取标准品0.0}0.4}0.51 0?6J0.’}O.8mg各溶于20”l氯仿后分别加 ~30mgKBr,混合研磨5mia~片做红 4l 外,以30mgKBr压片做参照,透过率80蒋 其余常规绘制红外光谱,按图2取基线测定 1740cm一’处的吸收度A值.以浓度为横坐 标,吸收度为纵坐标绘制标准曲线如图3所 示.得浓度在0.3mg/30mgKBr--0.9rag/ 30mgKBr内与吸收度A成线性关系,回归 方程为. A=O.4025C一0.0105r=0.9993 4.4精密度试验t精确配制浓度为 0?4mg/30mgKBr的标准样品360mg,每份 30rag称10份,按标准曲线项下操作,10次 测定所得吸光度的平均值为0.3982,标准差 s=5.185x10.0,CV%=1.304’ 4.5样品测定和比较I 各取样品10?l,按标准曲线项下操作, 与PC图谱比较确定含磷脂后,按图2取基线, 计算吸收度,由回归方程求得样品中磷脂的 妇 含量,并和钼蓝比色法的数据比较,结果见 1. 4.6回收率测定?分别取样品lOu],分 别加入标准品o.2,0.3,o.4,o.5mg:按 标准曲线项下操作,计算其回收率,结果见 衰2. 5讨论 5.1本实验在提取磷脂时,采用了对磷 脂提取效率高的Folch试荆,提取液以石油 田基嫂罩法 醚处理除去一些极性杂质,根据磷脂类成分 不溶予丙酮的特氟c8)采用层析法除去脂 肪酸等千拢.钰外铡定的非极性成分,最后 提取液中主要是礴脂成分.以红外定性扫描 图蒲厦钳簦比色珐铡定皓果也可以得到确 证. 誊样品回收率表 囵3.术末崔品破麦币一及帔 受的建惶乏最 表l红外光谱法和钼蓝比色法 测定样品数据的比较 红外光谱法钼蓝比色 样品名,\:(mg/m1)(mg/m1) 鸡蛋黄9.5459.75 —— 松子0.7850.75—0.8] 莲子0.5830.54一O.6】 实测量(mg) 松子 1961 0.2?21 0.396l 0.484} 0.389 0.498 平均回收率 . 标准差S CV呖 莲子 99.3 93.5 97.2 97.75 1.721 1.76l 回收率(%) 松子J鸡蛋黄 ————,—— l—— 98l94.5—————— l—, 97.3l99.3 —— l—— 99l97.25 —— I—— 96.8l99.6 —— l————一. 97.7f97.66 , l———— 0.9535l2.353 —— l, 0.9759f2.409 (下转4O页) ‘3 黄一0—0蛋一一鸡一一 3结柬语 通过一系剜正交实验,确定了胡萝h索 提取,分离,测定方法.本法提取工艺简 便,检浏仪器简单,使于推广,有应用债 值. 用本法对几种野生植物抽样提取调盎, 发现西河柳中胡萝索含量为陆地野生植物 中含量最高,+迄今未有过报导. 用本法从野生植物中提取胡萝素,还 需在工艺上解决以下几仑问题一(1)吸附 剂要过两次简,以60—8O目为宜I(2)过 滤前要将胶状物分离,(3)浓缩时要有冷 却装置,尽多回收糟荆,(4)低强,避光 操作,加入适当抗氧化剂{(5)加入胡萝 h素诱导剂,以提高收率. 用本法从植物中提取的胡萝素为n, B,”IS构型的混台物,其中B型约占9O嘶, c,Y等构型约占104.最近国外报导, a型体的抗癌作用相当B型的3,lO倍因 此,从植物提取的胡萝h索用于医药和食 品时,不需进一步分离. 参考文献 j.张茂玉蔫蔬菜中靓萝素的测定?营养,1984,8(2):l77,l乩 2.中国l预萌医学科学院与食品卫生研究所?食物营养成分测定法?人民卫生出畈社(第 二版),j曲O12O一129【, 3.韩会薪等?胡萝案的HPLC测定法?食品卫生理化检验文集(第=集)?北京大学 出版社,l990,2- 4.张素琴等?一株胡萝素高产蘸cr一1的研究?食品与发酵业,,1989,(5)tl,5 5.孙福璋?利用盐生杜氏藻提取B一胡萝素?食品科学,8蘸,(3)t剪一船 6.SielengWiIJiams,AO.A.C,l4th,1984.. 7.To’Phy~ol0gyl8l5Z9—537(1082), 8.Shoi~ , hj.Shimigtl,etal;J.F~r--lnentTecklol,l982,60(2)l163--16(3 参加写作者,r赵景奎,邵变霞,王荫国 (上接43页) 5.2测定磷脂的方法通常为铝蓝比色 法,但该法的测定结果易受到还原剂的性 质,酸度,浓度等因素的影响,且强酸硝化 会破坏样品,操作繁琐,本文采用红外光谱 法直接测定磷脂含量,不破坏样晶,方法简 便,精密度好,铡定结果车1l钼蓝比色法一 致,证明该法是正确可靠的.本文为磷脂含 ? 量的测定提供了又一简单可行的方法. 参考文献 1.戴克敏等?常用中药的药理和应用. 2.谢晶义?红外光谱在有机化学和药物 化学中应用?北京:科学出版社,1987:351页 3.HanahanD,Jetal-JBiol Ciaem192I623(1931)参加写作I张艾华