卵巢上皮性肿瘤中神经内分泌细胞的分布及部分作用研究

卵巢上皮性肿瘤中神经内分泌细胞的分布及部分作用研究 卵巢上皮性肿瘤中神经内分泌细胞的分布及部分作用 研究 目 录 中文摘要? 英文摘要? 论文正文 卵巢上皮性肿瘤中神经内分泌细胞的分布及部分作用研究 前 言 1 1.女性生殖系统的神经内分泌细胞? 2.卵巢上皮性肿瘤中神经内分泌细胞的分布及意义? 3.恶性卵巢上皮性肿瘤的诱导分化治疗与体外治疗模型的选择? 4.白细胞介素(IL)-24 治疗恶性卵巢上皮性肿瘤的设想? 5.卵巢上皮性肿瘤神经内分泌分化的评价及本课题研究? 参考文献. 9? 第一部分 卵巢上皮性肿瘤神经内分泌分化及其生物学特性的研究 14 和方法..14结 果 251.卵巢上皮性肿瘤神经内分泌分化及其意义 2.卵巢上皮性肿瘤神经内分泌分化机制初探 3.卵巢上皮性肿瘤神经内分泌细胞增殖与凋亡状况的研究 讨 论 30 图 版 34 第二部分 正常卵巢及其上皮性肿瘤神经内分泌细胞超微结构的 观察37 材料和方法37 结 果 42 讨 论 44 图 版 48 第三部分 体外培养的卵巢浆液性腺癌细胞神经内分泌分化 50 材料和方法50 结 果 55 1.卵巢浆液性腺癌裸鼠模型的建立 2.体外培养的卵巢浆液性腺癌细胞神经内分泌分化 讨 论 57 图 版 60 第四部分 IL-24. 63 材料和方法63 结 果 68 1. IL-24 2. IL-24 分化的评价 讨 论 71 图 版 76 全文结论77 参考文献79? 英文缩略词 89 在读期间撰写和发表的文章 91 致?谢92 诱导体外培养的卵巢浆液性腺癌细胞神经内分泌 对体外培养的卵巢浆液性腺癌细胞凋亡的影响 诱导体外培养的卵巢浆液性腺癌细胞凋亡的研究卵巢上皮性肿瘤中神经内分泌细胞? 的分布及部分作用研究 博士研究生蒋立艳? 导师王自能教授 中??文??摘??要 目的:? 1.?明确卵巢上皮性肿瘤神经内分泌( neuroendocrine,?N E)分化,并探讨其生 物学特性;? 2.?探讨 IL-24 对体外培养的卵巢癌细胞凋亡诱导作用及 NE 分化效应。? 方法:? (正常卵巢 与对照组 (n=79) 应用免疫组织化学方法检测卵巢上皮性肿瘤组 1. 对 的表达, CgA CgA) 阳性标本再行 A,? CgA/EMA、 嗜铬素 (chromogranin? n=22) A Ki67/CgA 双重免疫组织化学染色和 TUNEL/CgA 双重染色,并进行图像分析。? 2.采用透射电子显微镜技术观察正常卵巢组(育龄期 n=3,绝经期 n=3) 、卵 (n=3) 巢浆液性囊腺瘤组 (n=3) 卵巢粘液性囊腺瘤组 、 (n 卵巢浆液性囊腺癌 、 的 cells,NECs) (neuroendocrine? 神经内分泌细胞 (n=2) 及其转移瘤组 =3) 超微结构特征。? 3.皮下接种复制人卵巢浆液性腺癌裸小鼠动 物模型。采用以下方法验证模型: 免疫组织化学方法检测移植瘤 CK 透射电子显微镜技术观察肿瘤细 CA125、 表达; 胞的超微结构特征。? HE 体外培养人卵巢浆液性腺癌细胞, 4.?取裸鼠移植瘤组织, 免疫细胞化 染色、学方法检测 CK 细胞染色体核型分 CA125、 图像分析结果进行细胞鉴定; 的表达, 析;免疫细胞化学方法检测培养细胞的 CgA 表达,并进行图像分析。? 5.分别以 DDP1.5、3ug/mL) 、不同浓度 1、2、4、8、16、32g/L IL-24? 和两药 合用对体外培养的卵巢癌细胞进行干预,分为对照组、DDP 组、IL-24 组和两药 合用组。?M TT 法、台盼蓝排出实验观察各实验组细胞活力;流式细胞术观察细 免疫细胞化学方法检测各实验组细胞 胞凋亡状况及周期分布; CgA 并进 的表达, 行图像分析。? 6.?统计学分析??数据以均数?差表示, 采用 SPSS12.0 统计分析软件包进行 卡方检验、相关性分析和方差分析,以 P? <0.05 为显著性检验水平。? 结果:? 1.卵巢上皮性肿瘤 NE 分化及与临床病理参数关系? CgA 粘液性肿瘤 交界性和恶性浆液性、 粘液性、 良性浆液性、 在正常卵巢、 组中表达阳性率分别为 31.8%、42.8%,60.0%、62.5%、58.3%、75.0%, 2 组间差异在统计学上有显著性( χ 31.191,? P? 0.01) 。正常卵巢组织中 CgA 阳 性细胞稀少; 卵巢上皮性肿瘤中 CgA 阳性细胞常单个穿插于腺上皮细胞之间或相 CgA 实性癌巢及血管周围等处。 粘液上皮、 对集中位于腺体、 染色强度卵巢癌组 >良性肿瘤组>正常卵巢组。CgA 的表达强度卵巢癌组比正常卵巢组明显增强。 CgA 在各肿瘤组间, 恶性肿瘤组明显>良 表达强度交界性肿瘤组>良性肿瘤组, ( 而交界性肿瘤组与恶性肿瘤组比较差异无统计学意义 性肿瘤组, P? > 0.154, 0.05) 。CgA 的表达阳性率与患者的年龄无关( r? 0.700, P? 0.188) ,临床分期 2 ?、?期显著高于?、?期( χ 10.889,? P? =0.004) 。恶性卵巢上皮性肿瘤组 织中,CgA 的表达与组织分级呈正相关( r? 0.5765, P? 0.003) ,在组织分化? 级中的表达高于?级 P? 0.012,<0.05。? 2.?卵巢上皮性肿瘤 NE 分化机制初探? 约 正常卵巢及其上皮性肿瘤组织中, 92%CgA 阳性细胞表达 可见 EMA, CgA、EMA 双重表达细胞,少数 CgA 阳性细胞不表达 EMA。? 3.卵巢上皮性肿瘤中 NECs 增殖与凋亡状况研究? 少数 CgA 阳性细胞表达 可见 Ki67, Ki67 CgA、 CgA 双重表达细胞, 阳性细胞 所在腺体 Ki67 表达阳性细胞较多。而在正常卵巢组织中,CgA 阳性细胞不表达 Ki67。? TUNEL/CgA 双重染色,未见双阳性表达细胞,CgA 阳性细胞富集区域及附近 凋亡细胞罕见。? 4.正常卵巢及其上皮性肿瘤中 NECs 的超微结构观察? 具有共同的超微结构特征:胞质内有高电子密度的 NE 颗粒,?随组织的良恶 性、组织分型、功能状态,颗粒的多少、大小、形状和电子密度有所不同。? 5.体外培养的卵巢浆液性腺癌细胞 NE 分化? 移植瘤组织表达 CA125、CK,超微结构特征证实模型复制成功。体外培养的 卵巢浆液性腺癌细胞约 95.23%表达 CK,78.57%表达 CA125,4.63%的细胞表 达 CgA,CgA 染色强度 PU=38.56?3.54。细胞染色体核型分析示:超二倍体, 为人型。? 6.IL-24 诱导体外培养的卵巢癌细胞凋亡的作用? 6.1?IL-24 对体外培养的卵巢癌细胞存活率及凋亡的影响? IL-24 与 DDP 单独和联合作用于卵巢癌细胞 24h 随 后, IL-24 浓度增高卵巢 32g/L 癌细胞存活细胞百分数呈下降趋势; 浓度的 IL-24 卵巢癌细胞活 干预后, 细胞百分数为 细胞凋亡比率 64.68%, 细胞周期阻滞于 9.5%, G /M 相对于 期, 2 对照组明显减少( P ?0.035,<0.05) 。DDP 组卵巢癌细胞活细胞百分数明显下 细胞凋亡比率 降, 细胞周期阻滞于 11.5%, G /M ( 与对照组比较差异显著 期, 2 <0.01) 0.009, 0.005、 IL-24 两药合用组比高浓度 。 32g/L?和 16、 DDP 卵 组, 巢癌细胞存活细胞百分数增高( P >0.05) ,细胞凋亡比率 4.2%;低浓度 1、 2、 IL-24 4g/L? 与 DDP 组比较,卵巢癌细胞存活比率高( P? 0.035,0.017,0.027, <0.05) 。 统计分析显示: 对卵巢癌细胞生存率的影响贡献依次是联合用药> L-24 P?> DDP 。? 6.2?IL-24 对体外培养的卵巢癌细胞 CgA 蛋白表达的影响? CgA 染色,对照组阳性细胞占 4.63%;半量 DDP 组阳性细胞百分率 3.85%; IL-24 IL-24+半量 平均为 组各浓度间阳性细胞百分率变化不大, 16g/L? 3.19%; DDP 组为 3.00%。? 结论:? 卵巢上皮性肿瘤存在不同程度的 1. NE 临床 其分化程度随肿瘤恶性程度、 分化, 分期升高,组织分级下降而增高。? 2.卵巢上皮性肿瘤中的 NECs 常 单个穿插于腺上皮细胞之间或相对集中位于 腺 体、 粘液上皮、 实性癌巢及血管周围等处。 它们可能来自其基底层的上皮干细胞。3. 正常卵巢中的 NECs 而其上皮性肿 也不易发生凋亡的一群细胞。 属暂不增殖, 瘤中的 NECs 可随肿瘤细胞的增殖而增生,它们亦不易凋亡,可能系其分泌产物 抑制了周围非 NECs 的凋亡。? 正常卵巢及其上皮性肿瘤中的 4. NECs 胞质内有高电 具有共同的超微结 构特征: 子密度的 大小、 颗粒的多少、 NE 功能状态, 组织分型、 随组织的良恶 性、 颗粒, 形状和电子密度而有所不同。? 5.移植瘤免疫组织化学、超微结构特征证实 模型复制成功。体外培养的人 卵巢 浆液性腺癌细胞也存在 NE 分化,更进一步证实 NECs 是肿瘤细胞的成分。? 6.IL-24 可诱导卵巢癌细胞凋亡,使细胞周期阻滞于 G /M 期。短期应用可 诱导 2 卵巢癌细胞良性转化,但暂与其神经内分泌分化无关。? 关键词:? 卵巢;?卵巢上皮性肿瘤;?神经内分泌细胞;?神经内分泌分化;嗜铬素 A;组 织起源;增殖;凋亡;超微结构;DDP;IL-24;? 诱导分化; ?Study on the Distribution and Partial Effect of Neuroendocrine Cells in Ovarian Epithelial Tumors Dept of Obstet & Gynecol The First Affiliated Hospital of Jinan University MD Candidate: LiYan Jiang Supervisor Professor Dr. med. Habil. Tzuneng Wang Abstract Objective: 1. To identify the neuroendocrine differentiation of ovarian epithelial tumors, and to study their biological characteristics2. To study the effect of IL-24 on the induction of apoptosis and on the neuroendocrine differentiation of in vitro cultured ovarian tumor cellsMethods: 1. The expression of chromogranin A CgA in epithelial ovarian tumor group n79 and control group n22 were detected and evaluated by immunohistochemistry. And then positive specimens were examined using two antibodies against CgA/EMA epithelial membrane antigen, EMA and Ki67/CgA by immunohistochemical double staining and using terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling and an antibody against CgA by double staining. All results were evaluate by image analysis system2. The ultrastructure of neuroendocrine cells NECs in normal ovary group of reproduction agen3, ovarian serous adenoma group n3, ovarian mucinous adenoma group n3, ovarian serous adenocarcinoma n3 and their transplanted tumor n2 was investigated by transmitted electron microscope TEM3. Establishing transplanted human ovarian serous adenocancer in nude mice by subcutaneous inoculation.Transplanted tumors were examined using two antibodies against CA125 and cytokeratin CK, and their ultrastructure was investigated by transmitted electron microscope 4. The human serous ovarian adenocarcinoma cells were isolated from mice bearing tumors and cultured. The expression of CA125, CgA and cytokeratin in tumor cells was detected, and characterized by immunocytochemistry and image analysis system A chromosome karyotype analysis was performed on the cells 5. For the experiment in vitro, the experimental group is divided into following 4 subgroups, 1 control group: human serous ovarian adenocarcinoma cells with no treatment. 2 DDP group: cells were treated by 1.5ug/ml and 3ug/ml DDP, respectively. 3 IL-24 group: cells were treated by 1g/L, 2g/L, 4g/L, 8g/L, 16g/L and 32g/L IL-24, respectively. 4 combination group: cells were treated by both DDP and IL-24. Cell viability was measured by MTT assay and trypanblau exhausting experiment. The ratio of apoptosis and cycle disposition of the tumor cells was evaluated by Flow Cytometry. The expression of chromogranin A in all experimental subgroup was detected and evaluated by immunocytochemistry and image analysis system 6. Statistical analysis The statistical significance of the experimental results was evaluated using the Chi-square test, Correlation analysis and ANOVA. All experiments were performed at least three times unless indicated. Statistical significance was set at P 0.05Results: 1. The neuroendocrine differentiation of ovarian epithelial tumors and its relation with clinical pathology parameter The positive expression rate of CgA in normal ovary, benign serous tumors, benign mucinous tumors, borderline tumors, maglinant serous tumors, maglinant mucinous tumors were 31.8%, 42.8 % , 60.0% , 62.5% , 58.3% , 75.0% , respectively2 The difference between groups is significant χ 31.191, P 0.01. The positive stained cells of CgA in normal ovary were rare, and those in epithelial tumors were inserted into glandular epithelial cells alone or relatively concentrated in glands, mucinous epithelium, solid cancer nest and in the periphery of blood vessels. Staining intensity and distribution of CgA positive celsl in ovarian epithelial tumors were higher than those in normal ovaries., and was positively correlated with histological grading r 0.5765,P 0.003, e.g. higher in histological grading grade ? of malignant ovarian epithelial tumors than those in grade ? P0.012 < 0.05. The positive expression rate of CgA wasn’t correlated with patient’s ager 0.700,P 2 0.188. But it was higher in clinical stage ? , ? than those in clinical stage ? ,? χ 10.889, P = 0.0042. Preliminary study on neuroendocrine differentiation and its mechanism in ovarian epithelial tumors About 92% co-expression of CgA and EMA were detected in normal ovaries and ovarian epithelial tumors. Only a few positive cells of CgA didn’t express EMA3. Study on NECs and their proliferation and apoptosis in ovarian epithelial tumors Some NECs were coexpressed with Ki67, but in normal ovaries NECs weren’t coexpressed with Ki67. All NECs showed no TUNEL positive expression. Apoptotic cells were scarcely seen in or close to the NECs enriched area4. Ultrastructure of NECs in normal ovary and ovarian epithelial tumors The common ultrastructure features of NECs were electron dense granules in cytoplasm, which were changed with histological property, histotype, functional status, granular number, size, shape and electron density 5. Neuroendocrine differentiation of ovarian serous adenocarcinoma cells in vitro Transplanted tumor tissues expressed CA125 and cytokeratin. Their ultrastructure confirmed the model duplicated successfully further. About 95.23% of ovarian serous adenocancer cells expressed cytokeratin. The 78.57% of them expressed CA125, and only 4.63% of them expressed CgA. The P value of staining intensity for CgA was 38.56 ? 3.54. The karyotype analysis of chromosome of cells showed hyperdiploid, human type 6. Effect of IL-24 on the apoptosis induction of cultured ovarian adenocarcinoma cells in vitro 6.1 Effect of IL-24 on the ovarian tumor cells survival rate and apoptosisOvarian cancer cells were treated with IL-24, DDP alone or in combination for 24h. The number of live cells trended downwards as IL-24 concentration increased. When tumor cells were treated with 32g/L IL-24, the survival rate was 64.68 % which was lower than that of control group P. The ratio of cell apoptosis was 9.5%. The cell cycle was blocked to G /M phase. The survival rate of tumor cells in DDP group was distinct lower with highly 2 significant difference as compared with control P . The ratio of cell apoptosis was 11.5 %The cell cycle was blocked to G /M phase. The survival rate of tumor cells 2 in combination group was higher than that of 16,32g/L IL-24 group or DDP group. The ratio of cell apoptosis was 4.2%. The survival rate of tumor cells in 1,2,4g/L IL-24 group was higher than that of DDP group P? 0.017, 0.027, <0.05 . Statistical analysis indicated that effect on survival rate of ovarian tumor cells was: combination > IL-24 > DDP 6.2 Effect of IL-24 on the expression of CgA for in vitro cultured ovarian adenocarcinoma cellsThe ratio of CgA positive cells was 4.63%, 3.58%, 3.19%, 3.00% in control group, half dose-DDP, IL-24 group,16g/L IL-24 combined with half dose-DDP, 0.035, 0.005,0.009,<0.01 0.035,<0.05respectivelyConclusions: 1. There is diverse extent neuroendocrine differentiation in ovarian epithelial tumor, which enhance as tumor malignancy and clinical stage advance and histological grading descend2. NECs in ovarian epithelial tumors usually inserted into glandular epithelial cells alone or relatively concentrated to glands, mucinous epithelium, solid cancer nest and periphery of blood vessels. They may be derived from the epithelial stem cells3. NECs of normal ovary belong to the cell clusters which display temporarilyneither proliferation nor apoptosis. But NECs in the ovarian epithelial tumor can increase their number with tumor cell proliferation. They all display no apoptosis, and their secreting products can inhibite apoptosis of other peripheral cells4. Ultrastructurally NECs exhibit electron dense granules in cytoplasm, which are changed with histological properties, histotype, functional status, granular number, size, shape and electron density5. The immunohistochemical study and ultrastructure feature of transplanted tumors comfirm the model successfully duplicated. Human ovarian serous adeno -carcinoma cells show neuroendocrine differentiation, indicating that NECs are a composition of tumor cells 6. IL-24 can induce the apoptosis of ovarian tumor cells, and block cell cycle G /M 2 phase. It can transform ovarian tumor cells, but temporarily isn’t related with neuroendocrine differentiation Key words: ovary; epithelial ovarian tumor; neuroendocrine cell; neuroendocrine differentiaton; chromogranin A; histological origin; proliferation; apoptosis; ultrastructure; DDP; IL-24; differentiation inducing卵巢上皮性肿瘤中神经内分泌细胞的分布及? 部分作用研究 前?言 近年发病率 恶性肿瘤致死率高, 卵巢上皮性肿瘤是卵巢肿瘤最常见的一种, [1] 但治疗效果无明显改善 逐渐上升, 探寻有效的 寻找可靠的预后因素, 因此, 。 治疗方法成为热点之一。除传统临床病理因素外,随着 CA125、c-erbB 、P27、 2 nm23、VEGF 等 预后因子相继被发现和应用,肿瘤的神经内分泌分化 [2,3,4] ( neuroendocrine? differentiatio n)亦逐渐为人们所重视? 。近年来,同 在妇产科学领域作为一 NE) (neuroendocrine, 神经内分泌 其他临床学科一样, 神经内分 在女性生殖系统, 个重要的研究方面已有大量基础和临床的实验研究。 子宫颈、 巴氏腺、 尿道旁、 存在于外阴、 cells,NECs) (neuroendocrine? 泌细胞 参与这些器官 肿瘤, 卵巢及输卵管等正常组织及病变组织如炎症、 子宫内膜、 ?[5,6,7] 组织的病理生理过程,在疾病的发生发展及预后方面发挥重要作用 。? 1.女性生殖系统的神经内分泌细胞? 目前人们认为,NECs?是一种可分泌神经递质、 神经调质或神经肽类激素产物 [8] 缺乏轴突和突触 有致密核心的分泌颗粒, 的细胞, 随着研究手段的不断提高, 。 发现 NECs 可呈单个分布和/或成簇富集。在外周器官或组织(即 APUD 外周弥散 神经系统)中,NECs 可密集成团,形成器官或组织内的神经内分泌小器官, 例 如胰腺内的胰岛,甲状腺侧叶后部的甲状旁腺等。尚有大量的 NECs 广泛弥散分 [9,10] 布于心血管、消化管、呼吸道以及泌尿生殖道的壁内 。以往研究显示,存在 于不同器官或组织内的 NECs 在神经组织内的 其形态和大小千差万别。 通 NECs, 常近似传统的神经元,带有长短不等的纤维状 突起,可呈梭形或星形;而存在于均有下述某 但无论其突起或胞体位置如何, 其它组织内的多呈锥状或不规则形。 些共同的结构特征:首先,NECs 间的毛细血管均为有孔 (50nm)型,毛细血 管 形成 互相吻合, 极度迂曲, NECs NECs 另外, 间毛细血管网或丛。 通 或突起内, 常含有大量 20~600nm 的大型致密核心分泌颗粒; 含分泌颗粒的细胞或突起直接 这种结构特点使 也可与其它神经细胞或突起形成突触。 接触或终止于血管周隙, [10,11] 得 NECs 在功能、特性上有别于单纯神经细胞和内分泌细胞 。? [12] 有关 NECs 的组织发生众说纷坛, 目前仍无定论。 Pearse 等 曾大胆提出 “神 经冠”理论,认为 NECs 都来源于神经冠,即胚胎过渡性神经结构,现在知道它 为多种细胞的祖细胞。经过多年的研究,他们又指出 NECs 与胚胎组织来源具有 某些共同之处,可能来源于胚胎时期神经外胚层的神经内分泌定向细胞。然而, 也可存在于周围 既可存在于中枢神经系统内, 它们发育后的定居部位有所不同, [13] [14] 神经系统内,甚至存在于神经系统以外的器官或组织中 。Harmid 等 发现当 在正常的膀胱上皮则无 有大量内分泌细胞出现, 膀胱上皮因炎症而发生化生时, 炎症等因素可促使 认为正常上皮的内分泌细胞可能因量少不易被发现, 此 细胞。 内分泌细胞 除消化系统外, 内分泌细胞增生或其它上皮细胞化生为内分泌细胞。 此类 但当这些器官发生病变或癌变时, 很少出现在其它器官的正常上皮组织中, [15] [16] 细胞则大量出现 。 Bosman 等 研究了肿瘤中的 NECs,发现它们也存在于转移瘤 中,提示 NECs 是肿瘤成分的一部分。至于其起源,当前的观点是:干细胞可以 这种干细胞转化形成 正常情况下可分化为正常上皮细胞。 向各种细胞类型分化, 的肿瘤性干细胞,同样也可以向各种类型的细胞分化,包括 NECs。目前较多学 [14,16] 者支持 NECs 来自上皮干细胞分化的学说 ; 也有观点认为, 并不是所有的 NECs 尤其是 上皮干细胞可产生其它类型的上皮细胞, 都来自相同的局部上皮干细胞, [17]在粘膜 例如在卵巢粘 。 液性囊腺瘤可见不同类型的 NECs 因此其组织发 存在, [18] 生目前仍有争议 。? NECs 不仅存在于会阴部、阴道壁和宫颈等女性正常下生殖道的壁内,还参 注释:粘同黏,下文不再做解释。 与其病理过程,在炎症、肿瘤时可检出,其细胞内储存有 5-羟色胺5-HT等胺 输卵管等组织及其肿瘤的 卵巢、 已有多名学者研究了子宫内膜、 类物质。 NECs, [5,19,20] 发现这些组织的肿瘤细胞具有 APUD 在行为上更具有侵袭性 特性, NECs 。 的 研究正逐步深入,但 NECs 的确切组织来源, 在不同组织中的确切作用尚不完全清 又是通过何种具体机制被调控尚需 它们通过何种机制调控疾病的发生发展, 楚; 进一步探寻。? 2.卵巢上皮性肿瘤中神经内分泌细胞的分布及意义? 有学者认为正常卵巢中不存在 NECs,而又有部分学者认为正常卵巢上皮可见 [21] [18] 在肿瘤如卵巢粘液性囊腺瘤和囊腺癌却可见 然而, 。 NECs ?国内外已有大 。 均发 粘液肿瘤为多, 畸胎瘤、 尤以类癌、 在多种类型的卵巢肿瘤中, 量的报道: 可散在分布或位于 圆形等, 星形、 锥状、 呈梭形、 现有多态性内分泌细胞增生, 分泌 增殖细胞区域, (ACTH) 肾上腺促皮质激素 5-HT、 内皮素等单胺 多巴胺、 、 [22,23] 和多肽激素,可能还伴有多肽激素机能障碍 。恶性肿瘤的 NECs 呈现去分化 现象,这些肿瘤具有高侵袭性,可能为肿瘤异质性(heterogeneity)的表现之 一,与疾病的预后是否有量效关系还有待进一步研究。? [24] Kupryjanczyk 存 卵巢的神经内分泌肿瘤大多属于表面上皮性肿瘤, 报道, [5] 在内分泌分化。Wanke 也报道在前列腺、子宫颈、子宫内膜、卵巢和睾丸等生 殖道肿瘤细胞具有 APUD 最有力的证据是这些组织存在 特性, 这些肿瘤在 NECs。 Lin 多项研究证实了上述观点。 相应地, 需要适当的治疗。 行为上更具有侵袭性, ?[25] 等 研究了 127 首次报道卵巢浆液性肿瘤存在 例卵巢上皮性肿瘤, 约 NECs, 31 %的浆液性瘤和 40%的浆液性腺癌存在不同数量的嗜银细胞。嗜银性在卵巢浆 液性与粘液性肿瘤表达方式不同。 浆液性肿瘤嗜铬颗粒出现在细胞顶端或整个胞 [26] 浆,或散在于胞浆中,超微结构未见典型的神经内分泌颗粒。Takahiro 等 研 究了一例罕见的卵巢浆液性腺癌伴 Cushing’s 综合征,临床病理、免疫组化发 现肿瘤有 NECs,CgA?染色阳性,可分泌 ACTH、ADH 和 AFP 等多种多肽。同时回顾了以前报道的四例卵巢癌伴 Cushing’s 综合征病人, 其中只有一例症状缓解。[27] Garret 等 报道了一例卵巢粘液性囊腺瘤伴高泌乳素、高胃泌素血症,组 认为粘液性囊腺 有内分泌分化, 织免疫荧光检测发现有多态性内分泌细胞增生, 这些资料说明 更有可能还伴有多肽激素机能障碍。 瘤组织不仅含有内分泌细胞, 粘液性肿瘤成分复杂,还不能阐明肿瘤的组织发生,NECs 的出现是否与肿瘤生 [28] 物行为有关尚待进一步研究。在国内,江昌新等 研究了卵巢粘液性肿瘤的 NE 发现随着卵巢粘液性肿瘤分化程度的下 组织发生的关系, 分化与肿瘤分化程度、 降,NECs 的检出率逐渐增加,同时良性肿瘤中有含 CgA 和 PAS 两种阳性颗 粒的 中间型细胞,提示这些肿瘤可能起源于具有多方向分化能力的干细胞,它们与卵 巢粘液性肿瘤伴 NE 分化之间的确切关系,尚待研究。? [29] Chen 报道 1 例子宫内膜样腺癌,1 例粘液囊腺瘤,8 例粘液性囊腺癌,病 人年龄从 22~77 其 岁, NECs 8 这些肿瘤具有高侵袭性, 呈现去分化。 例死于肿 而且在转移部位也发现了 瘤浸润转移, NE 卵巢子宫内膜样癌 成分。 II 型嗜银细 ?[30] 胞表达特异性 NE 标志物嗜铬素和 NE 抗体。Crawford 等 则报道一例卵巢癌术 后接受了一疗程化疗的个案, 发现肿瘤向腺癌和鳞癌双向分化并含有大量 CgA 阳 性内分泌细胞及局部 ACTH 免疫反应阳性。患者随即呈现 Cushing's 综合征,肿 瘤在盆腔广泛复发。? [31] 早在 70 年代 Klemi 利用组织化学技术检测 Brenner 瘤,检出嗜银细胞。 这些嗜银细胞与卵巢粘液性肿瘤中的不同,常包含 5-HT 和肽类激素,与泌尿道 上皮细胞类似。? 在 NE 广泛的肠型上皮包含 占主导而粘液瘤成分较少的混合型卵巢癌, NECs 出现在粘液交界性肿瘤和粘液腺癌。 粘液肿瘤中出现 NE 成分而没有畸胎瘤成分, 为排除一些 NE NE 相反, 或类癌肿瘤是来自粘液肿瘤提供证据。 成分过度增加且 [ [ 3 3 2 2 ] ] 弥漫分布提示肿瘤侵袭性和致死的特征 。? [33] Kazem 等 则在卵巢未分化小细胞癌具有 NE 分化的基础上,报道非小细胞 癌也有 NE 分化。NECs 明显去分化,形态类似神经元。?鉴于文献报道及人们对肺、胃肠道肿瘤、乳腺癌和前列腺癌 NE 分化的广泛 研究,得出共识:NECs 的出现可能与疾病的预后有关,是肿瘤异质性的表现之 NECs 一。 由于 出现在卵巢上皮-间质肿瘤预示着肿瘤更有侵袭性。 NECs 分泌多 肽和单胺物质,这些异位激素的产生与释放可产生相应的 NE 症状,出现副肿瘤 综合征。? 3.恶性卵巢上皮性肿瘤的诱导分化 治疗与体外治疗模型的选择? 诱导分化疗法是指应用化学药物诱导肿瘤细胞分化并逆转其增殖、 浸润和 转 即再分化或肿瘤逆转从而达到治 使其成为正常或接近正常细胞, 移等恶性表型, [34] 疗的目的 由于其潜在的临床应 实体瘤的诱导分化治疗起于上世纪八十年代, 。 用前景,近年才成为临床工作者关注的热点。? 诱导分化剂是指所有能够诱导肿瘤细胞重演正常分化过程的药理因子的总 凋亡起重要作用。 分化、 对细胞增殖、 是一组具有广泛生物活性的调控因子, 称, 通常主要有以下几类: 临床治疗的一类药物,由维生素 A(包括视黄醇、视黄醛、视黄酸)衍生而成; 是一组极性溶剂; 细胞因子, (2) 蒽环类药物、 如阿糖胞苷、 抗肿瘤药物, (3) 三尖杉酯碱等; 氨甲蝶呤、 乳 丹参酮、 皂苷、 大豆苷元、 大蒜油、 中草药, (4) [34,35] 香酸等; 环腺苷酸类衍生物; (5) 维生素 苯乙酸、 丁酸钠、 D 其它, (6) 等 。卵巢癌的诱导分化治疗国内外文献均已有报道, 也都处于体外实验或动物实 [36,37] 旨在诱导异型细胞的凋亡及逆向转化 验阶段, 选 但诱导分化剂种类繁 多, 。 择有效的诱导分化剂实属不易,且从 NECs 角度研究诱导分化治疗疗效,文献尚 未见报道。? 目前常 选择合适的体外治疗模型至关重要。 为研究卵巢癌的诱导分化治疗, [38] 细胞培养研究 卵巢癌动物模型, 用的有: 免疫 卵巢癌动物模型按动物种类、 。 在实验动物 转移率分为数十种之多。 受供体关系、 接种部位、 肿瘤来源、 状态、 成为应用最多的 繁殖率高以及与人类基因的高相似性, 小鼠因其饲养简便、 中, (1) 维甲类化合物, 它是诱导分化剂中最为重要并已用于使恶性肿瘤生物学的研究进入一个 尤其是人类肿瘤移植于裸小鼠的成功, 动物, 化学 人类卵巢癌细胞株移植模型、 卵巢癌手术标本异种移植模型、 崭新的阶段。 [38,39] 转基因模型成为最常用的几种模型 诱导模型、 由于卵巢癌手术标本裸小鼠 。 便于观察测量及保持与原手术标本 接种成功率高, 皮下移植模型临床取材方便, 性质固定不变的特点为研究者青睐。细胞培养研究有原代细胞和细胞株培养之 研究者可根据实验目的而 细胞株性质稳定, 原代细胞培养更接近体内情况, 分, [40] 选择,它们均可为卵巢癌的诱导分化治疗提供良好的载体 。? 4.白细胞介素(IL)-24 治疗恶性卵巢上皮性肿瘤的设想? 黑 色 素 瘤 分 化 相 关 基 因 7Melanoma? differentiation? associated? gene? 7,mda-7是一种肿瘤抑制基因,其定位于染色体的 1q32.2-q41 区域,位于一群分 泌 和 I [41]的结构、染色体的定位以及细胞因子样特性,mda-7 被命名为 IL-24 。 mda-7/IL-24 基因由 7025 个碱基组成,含 7 个外显子 6 个内含子,编码大 小为 23.8kDa 由 的蛋白, 206 其 个氨基酸序列组成。 cDNA 长 其中包含 1718bp, 一个促进分泌的片段。但是无论 PBMCs 分泌的 IL-24,还是稳定转染的 293T 细 胞分泌的 IL-24-His 分子量都接近 35kDa,是因为人 IL-24 的氨基端糖基化的结 [42] 果 。 IL-24 的活性形式为二聚体,其受体有 2 种 IL-22R1/IL-20R2