非洲爪蟾卵母细胞P2X受体存在的证明_cropped

非洲爪蟾卵母细胞P2X受体存在的证明_cropped THE AL TERATIO NS OF NITRIC OXID E SY NTHASE ACTIVITY OF VENTRICUL AR CARD IAC M USCL E OF RATS IN TWO SEPTIC S HOCK MOD ELS 1 ,2 2 2 3 2 2YE Ting2mei, XU Ce, GAO Qin, ZHOU Xin2mei, SHAN Qi2xian, XIA Qiang ( 1 . Zhejianglishui U niversit y , Lishui 323000 ; 2 . Depart ment of Physiology , Zhejiang U niversit y School of Medicine , Hangzho u 310058 ; )3 . Depart ment of Physiology , School of Medicine , J iaxing College , J iaxing 314000 , China ABSTRACT ( ) Aim : To observe t he differences of hemodynamics and nit ric o xide synt hase NOSactivity of vent ricular cardiac muscle in t wo () sep tic shock models and explore t he possible mechanism. Methods : Two rat models of sep tic shock li popolysaccharide L PS2induced ( ) and cecal ligatio n and p unct ure CL P2induced sep tic shock were used. The hemod ynamic parameters and nit ric o xide synt hase activ2 it y of vent ricular cardiac muscle were measured. Results : The hemodynamic parameters in CL P2induced model were increased in t he early stage and decreased in t he late stage while in L PS2induced model t he parameters showed t he same change of t he CL P late stage. () Bot h L PS model and CL P model late stageshowed significant increase in NOS activity , but t here was no difference bet ween t he t wo () models. Af ter t reat ment of t he NOS inhibitor N2nit ro2L2arginine met hyl ester L2NAM E, t he parameters of CL P2late stage and L PS model increased significantly. The NOS activity reached t he highest level in t he CL P2middle stage. The p roductio n of nit rite/ nit rate () decreased significantly in L PS model and CL P model late stageaf ter t reat ment of L2NAM E , but t he nit rite/ nit rate p roducted by () co nstit utive NOS in L PS model was higher t han CL P model late stage. Conclusion : The increase of t he NOS activity may be t he main reaso n to lead to t he dep ressio n of t he hemodynamic parameters. Inducible NOS may play t he leading role in t he L PS model while cNOS and iNOS have t he same effect in t he CL P model . KEY WO RDS : nit ric o xide synt hase ; lipopolysaccharide ; cecal ligatio n and p unct ure ; sep tic shock 3非洲爪蟾卵母细胞 P2 X 受体存在的证明 余帮兴 , 李之望 ( )华中科技大学同济医学院神经生物学系 , 湖北 武汉 430030 摘要 目的 : D1 中除有 P2 Y 受体介导的成分外 ,可能还有 P2 X 受体介导的电流参与 。本研究的目的在于进一步证实 D1 电流中 2 + 是否有 P2 X 受体介导电流的存在 。方法 : 采用双电极电压钳记录方法 。结果 : Zn对不依赖于 G 蛋白之 I具有增强作用 ; A TP (D1) 重复施加 A TP D1 电流逐步减小 ,而 D2 电流则逐步增大 。在仅有 D2 之 I情况下 ,重复加 A TP 后 D2 电流不但不增大反而有 A TP (D2) 所下降 。结论 : 非洲爪蟾卵母细胞上存在 P2 X 受体 。 关键词 : 非洲爪蟾卵母细胞 ; P2 X 受体 ; 双电极电压钳记录 KEY WORDS : Xenop us oocytes ; P2 X p urinocepto rs ; t wo2elect ro de voltage clamp technique ( ) 中图分类号 : Q74 文献标识码 : A 文章编号 : 100026834 20070220198202 用双电极电压钳可以检测到带滤泡膜的卵母细胞的内 P2 X 受体属配体门控离子通道受体超家族 , 导引起的 。已知 ( ) β源性 A TP2激活电流 ,此电流包括有三个成分 : 1最先出现 而 P2 Y 受体属 G 蛋白耦联受体超家族 ,我们用 GD P22S 胞 ( ) 的为快内向电流 D1 成分 I ; 2继后为较慢的内向 内透析阻断 G 蛋白 ,旨在观察 D1 是否还有剩余的 ,进而 ,观 () A TP D12 + ( ) 电流 D2 成分 I ; 3再后为一缓慢的外向电流 H 成 () A TP D2察此剩余成分能否被 Zn所增强 。 分 I ] 。文献报道 ,D1 和 D2 内向电流均为 G 蛋白耦联 ( ) A TP H 的 P2 Y 受体所介导 ,而外向电流 H 成分则是 P1 嘌呤受体所 1 材料与方法 1 23 介导。 我们认为 D1 中除有 P2 Y 受体介导的成分外 ,可能还有 111 卵母细胞的制备和培养 制备和培养方法按文献 4 进行 。 ΩΩ阻 5210M;电流电极 310 mol/ L KCl ,电阻 011,1. 0 M。参 比电极用 Ag 电极与浴槽相连 。以 215,5. 0 ml/ min Ringer’s 液进行灌流 ,记录时室温保持在 20 ?,24 ?,钳制电压置于 - () 50 mV ,膜电流信号记录于生理记录仪 L MS2B ,成都仪器厂。 ( ) β( ) A TP Sigma用 Ringer’s 配制 , GD P22S Sigma用 0115 mmol/ L KCl 配制 。采用吸管直接加入浴槽的方法给药 。 113 资料分析 ( ) 实验结果以均数 ?差 x ?s示 ,实验数据用 Ex2? cel 进行统计分析 ,统计图使用 Sigma Plot 软件绘制 。 2 结果Fig. 2 Effect o n D2 of A TP applied externally at intervals of 8 ( )minutes n = 72 211 ATP 引起的膜电流反应 带滤泡膜的卵母细胞所记录之 A TP 引起的膜电流反应 3 讨论 见图 1 。 ()本文所观察到的 A TP 引起膜反应的几种模式 pat terns β 212 胞内透析 GD P22S 阻断 G蛋白与以往学者们的报道基本一致 。 随着时间的延长 ,D2 逐渐减小 ,到 50 min 时 ,D2 电流减 D2 由 P2 Y 受 体 介 导 ; 本 实 验 的 结 果 表 明 , D1 中 除 有 P2 Y 受体介导的成分外 ,还有 P2 X 受体介导的电流参与 ; 非 小达 90 %以上 ,而 D1 减小仅为 40 %左右 ,经胞内透析 GD P2 洲卵 母 细 胞 滤 泡 膜 上 存 在 P2 X 受 体 , 本 实 验 提 示 P2 X 与 β2S 后 D1 成分有剩余 ,此 D1 剩下的成分可能为 P2 X 受体介 P2 Y 受体之间存在相互作用 。 ( ) 导成分 remaining D1 , rD1。接 下 来 , 在 此 基 础 上 加 不 同 浓P2 X 与 P2 Y 受体之间通过何种信号途径相互作用需进 2 + 2 + 度梯度的 Zn,观察此剩余成分能否被 Zn所增强 。 一步深入研究 。P2 X 受体有七种亚型 , P2 X3 受体存在于初 5 级感觉神经元上 ,与痛觉过敏有关,非洲卵母细胞滤泡膜 上 P2 X 受体为何种或哪几种亚型也需进一步深入研究 。 参考文献4 et al 1 Adeno sine2induced slow io nic Lotan I , Dascal N , Co hen S , 1 current s in t he Xenop us oocyte J 1 N at u re , 1982 , 298 : 5722 5741 2 Lotan I , Dascal N , Co hen S , et al 1 A TP2evo ked membrane re2 spo nses in Xenop us oocytes J 1 Pf l u gers A rchi v2Eu r J Physiol , 1986 , 406 : 15821621 King B F , Wang S , Burnstock G1 P2 p urinocepto r2activated in2 3 ward current s in follicular oocytes of Xenop us l aev is J 1 J Physi2 ) ( were Fig. 1 Different pat terns of A TP2induced current s IA TP ol , 1996 , 494 : 172281 recorded f ro m follicular oocytes of Xenop us l aev is 4 Zhang X D , Zang Y M , Xie A1 An imp roved met ho d of t he p reparatio n of Xenop us oocyte fo r gene exp ressio n of io n channels 2 + ( ) J 1 Chi n Hea rt J , 2001 , 13 2: 1202122 213 Zn对 rD1 的增强作用 5 赵士洁 , 殷光甫 , 谷远征 , 等 1 大鼠初级感觉神经元 P2 X3 受 2 + 我室既往神经节膜片钳实验结果 : Zn对 P2 X 受 体 所 体的表达及其与 SP 的关系 J 1 中国组织化学与细胞化学杂 介导的膜电流有明显的增强作用 —变构调节 。本实验发现 , ( ) 志 , 2006 , 15 1: 91294 2 + μ45mol/ L Zn对 rD1 的增强作 用 最 强 。以 上 实 验 结 果 表 明 : D1 成分中不仅有 P2 Y 受体介导的电流成分 ,还有 P2 X 受体介导的电流参与 。( )3 基金项目 : 国家自然科学基金资助 39970240 收稿日期 : 2006207205 ; 修回日期 : 2007201211 ( ) 作者简介 : 余帮兴 19712, 男 , 湖北武汉人 , 主治医师 , 医学 214 胞外重复施加 ATP 对 D1 和 D2 的影响 硕士 , 从事神经电生理研究 。 在既有 D1 又有 D2 的情况下 , 出现 D1 电流逐步减小 , D2 电流逐步增大 ;然而 ,在仅有 D2 之情况下 ,不出现 D2 电