液质联用检测白酒中微量甜蜜素

液质联用检测白酒中微量甜蜜素 摘要 采用液质联用建立了分析白酒中微量甜蜜素 的方法,以0.1%甲酸和甲醇,80?20,为流动相,样品用水 直接稀释2倍测定,采用多反应方式,MRM,进行检测。最 低检出限为2 ng/mL,最低定量限为10 ng/mL,在10,1 000 ng/mL时相关系数为0.999 9,平均回收率为102.9%, 106.6%,最大相对标准偏差为2.5%。采用2种类型白酒做 加标回收,重复性良好,且能在3 min内完成一次进样分析, 该方法简单快捷,结果可靠,可用于白酒中微量甜蜜素的 ,z测 关键词 液质联用,白酒,甜蜜素 中图分类号 TS202.3 文献标识码 A 文章编号 1007-5739,2017,04-0246-02 Abstract A method for trance sodium cyclamate in liquor was established by HPLC-MS/MS.The solvent system was composed of water with 0.1% methane acid and methanol by 80?20.Samples diluted 2 times with water were detected by multiple reaction monitoring mode,MRM,.The minimum detection limit was 2 ng/mL and the minimum quantification limit was 10 ng/mL.The correlation 1 coefficient was higher than 0.999 9 from 10 ng/mL to 1 000 ng/mL,and the average recoveries were range from 102.9% to 106.6%.Maximum relative standard deviation was 2.5%.Using two types liquor for doing standard addition recoveries showed good reproducibility and finished a sample analysis within 3 min.The method is simple,quick and reliable,and can be used for analysis of trance sodium cyclamate in types of liquor. Key words UPLC-MS/MS,liquor,sodium cyclamate 甜蜜素是一种人工合成甜味剂,具有高效的甜味特性。 不法商家为改善酒的口味,欺骗消费者,存在违法添加的可 能[1-3]。打击违法添加,保障酒的饮用安全是监管部门的职 责。因此,建立一种快捷、可靠的检测甜蜜素的方法很有必 要[4-5]。现在参照执行的检测方法是《进出口食品中环己基 氨基磺酸钠的检测方法液相色谱-质谱/质谱法》,SN/T 1948―2007,[6],蒸馏白酒中甜蜜素的测定并没有相应的国 标检测方法。因此,本试验探究白酒中微量甜蜜素的检测方 法,以期为白酒中微量甜蜜素检测国标方法的建立提供参 考。甜蜜素检测运用比较多的是气相色谱法,但检出限偏高, 容易出现假阳性[7-9]。而液质联用方法以其准确、检测限低 的特点正在白酒中微量甜蜜素的检测中发挥重要作用[10-12] 1 材料与方法 2 1.1 仪器与设备 1260型超高液相色谱/6460三重四级杆质谱联用仪,美国Agilent公司,,液相色谱仪配备Agilent G4226A自动进样器,Agilent G1316C柱温箱,Agilent G4220B泵,质谱仪配备电喷雾离子源,ESI,美国Agilent公司,,数据处理采用Agilent MassHunter工作站进行,分析天平,型号,AL204/01,美国梅特勒-托利多公司, 1.2 材料与试剂 酒样,50种成品白酒,市售。甜蜜素标准品GBW,E,100173样品编号为15090173,标准值10.00 mg/mL,相对扩展不确定度为1%,甲醇,色谱级,DIKMA公司,,甲酸,色谱级,aladdin公司,,蒸馏水,屈臣氏公司, 1.3 试验方法 1.3.1 贮备液。用移液枪精密移取100 μL标准品于10 mL容量瓶中,蒸馏水定容,配制出为100 μg/mL的贮备液 1.3.2 标准使用溶液。用移液枪精密移取1 mL贮备液于10 mL容量瓶中,蒸馏水稀释定容制成10 μg/mL的中间标准工作液。精密吸取10、25、50 μL的中间标准工作液于50 mL容量瓶中,制成2、5、10 ng/mL的标准工作溶液,精密吸取50、200、400、500 μL贮备液于50 mL容量瓶中,制成100、400、800、1 000 ng/mL的标准工作溶液,过0.45 μm滤膜,滤液待机分析 3 1.3.3 色谱条件。色谱柱,ZORBAX SB-C18,21 mm×50 mm,1.8 μm,,柱温30 ?,进样量5 μL,流动相,A为0.1%,v/v,甲酸,B为甲醇,两者比例为80?20,流速0.2 mL/min 1.3.4 质谱条件。离子源,ESI负离子模式,雾化器压力45 psi,干燥器温度350 ?,干燥气流速5 L/min,鞘气流温度350 ?,鞘气流流速11 L/min,毛细管电压4 500 V,最优裂解电压130 V,最优碰撞能30 V,多重反应监测,MRM,,母离子178.1,子离子79.8,分析时长3 min,载气为氮气发生器制取的氮气,碰撞气为高纯氮。 1.3.5 样品的处理方法。用分析天平准确称取1 mL均匀白酒于10 mL塑料离心管内,加1 mL水,盖塞混匀,倒进一次性注射器内过0.45 μm滤膜,水相,,滤液待机分析 2 结果与分析 2.1 色谱条件的选择 本试验采用甲醇-0.1%,v/v,甲酸水体系作为流动相,体积比为20?80时,甜蜜素响应值最高。流动相未引入铵盐,对质谱起到一定的保护[13] 2.2 质谱条件的选择 选用400 ng/mL标准品溶液进行质谱条件的优化。首先在ESI负离子模式下进行全扫描,Scan,,得到甜蜜素的一级质谱图,确认178.1为其母离子,其次运行选择离子监测模式,SIM,得到其最优裂解电压为130 V,最后运行子离 4 子扫描模式,PIS,优化其碰撞能,并得到二级质谱图,最优碰撞能为30 V,定量子离子为79.8。再采用MRM方式监测178.1/79.8离子对,并根据优化数据调节质谱参数,进行定量分析 2.3 样品处理条件的选择 将白酒样品直接稀释2倍,过0.45 μm滤膜,水相,过滤,直接上机分析,处理方法便捷[14-15] 2.4 线性范围与检出限 配制浓度在2,1 000 ng/mL范围的系列标准溶液,按文中所述方法测定。当甜蜜素标准溶液浓度为2 ng/mL时,S/N为3.26>3,当为10 ng/mL时,S/N为11.92>10,故此方法甜蜜素检出限为2 ng/mL,定量限为10 ng/mL。甜蜜素在10,1 000 ng/mL有良好的线性关系,浓度点分别为10、100、400、800、1 000 ng/mL,标准曲线为y=11.054 2x+50.272 3,相关系数R2为0.999 9,图1, 2.5 方法精密度与加标回收率 选用2种类型白酒作为加标样品,A和B,,以验证其重复性,稀释2倍后作为加标基质,甜蜜素含量为0,,每种均加标3个质量浓度,加标水平分别为100、400、800 ng/mL,采用上述建立的方法,每个添加水平重复测定6次,计算添加平均回收率和相对标准偏差,甜蜜素的平均回收率在102.9%,106.6%之间,相对标准偏差为0.2%,2.5%。方 5 法精密度和加标回收率均符合残留分析的要求。2种类型的白酒重复性良好,结果见表1 2.6 样品含量测定 运用本试验建立的方法,测定市售白酒50个,每个样品做2个平行,其中检出2个白酒甜蜜素有响应值,但样品260因S/N 6