大鼠切牙颈环结构成牙能力的实验研究

大鼠切牙颈环结构成牙能力的实验研究 实用口腔医学杂志(JPractStomato1)2006Nov,22(6) 大鼠切牙颈环结构成牙能力的实验研究 方军文玲英金岩刘晓辉陈小红轩昆 【摘要】目的:观察大鼠切牙颈环结构种植于鼠肾被膜下形成牙齿样结构的能力.方法:取出生后3,4d的 SD仔鼠切牙,将切取的颈环结构种植到母鼠肾被膜下,建立组织1程牙齿的体内培养模型.2,4周后取材, 常规固定,HE染色观察.结果:下切牙颈环结构在体内形成了包含釉质和牙本质牙髓复合体的纤齿样结构, 上切牙颈环结构仅形成了牙本质牙髓复合体的牙齿样结构?结论:大鼠切牙颈环结构在体内能够形成纤齿样 结构,其中颈环中的上皮干细胞起着重要的作用.大鼠肾被膜下种植可以做为体内组织工程化牙齿样结构构 建的立体培养模式. 【关键词】大鼠切牙;颈环结构;组织工程 Odontogenicabilityofthecervical-loopstructuresofratincisor FangJun,nLingying,JinYah,eta1.CollegeofStomatology.TheFourthMilitaoMedicalUniver— sty.Xin7l0032,China 【Abstract】0bjective:Toverifythepossibilityofodontogenesisofbioengineeredteethfromthecervical—loopstrue— tureofratincisorsinvivo.Methods:Cervical—loopstructureswereisolatedfromupperandlowerinciso rsofpostnatal 3一tO4-daySDratsandimplantedintotherenalcapsuleofsyngeneicSDrathosts.Theimplantswereexcisedfo rhis— tologicalanalyses2—4weeksafterimplantation.Results:Dentin—pulpcomplexwasobservedwithintheimplantsin bothupperandlowerincisorgroups.Butenanlel—liketissueswereonlyobservedintheimplantsoflowe rin(„isorgroup andnotinupperincisorgroup.Conclusion:Cervical—loopstructuresnlaybeusedinbioengineeringoft ooth. 【Keywords】Ratincisor;Cervical—loopstructures;Tissueengineering 中图分类号:R339.35文献标识码:A文章编号:1001—3733(2006)-06-0845-04 目前临床解决牙齿缺失的主要方法是义齿修复, 如何利用人工方法和制造出具有生物学活性的牙 齿,并用于修复缺牙,是国内外学者追求的目标和着力 研究的热点课题.现有的研究已表明,组织工程牙齿 的构建需要通过牙源性上皮和间充质细胞之间相互诱 导作用才能形成.啮齿类动物(如鼠)下切牙代表着 一 类特殊的牙齿类型,即终生不断生长的牙冠并且没 有牙根结构形成,它的颈环终生保持3层结构:内釉上 皮,外釉上皮以及中间层细胞,即所谓的颈环干细胞龛 结构,可以终生不断生长.本实验旨在观察分离的SD 基金项日:国家自然科学基金(30572046),国家自然科学基金 (30600709) 作者单位:西安第四军医大学口腔医学院儿童口腔科710032(方军 文玲英刘晓辉轩昆)组织工程中心(金岩)重庆第 军医大学大坪医院口腔科(陈小红) 通讯作者:金岩029—84776147 大鼠切牙颈环结构移植到体内后是否还能够形成牙齿 样结构,从而推断颈环干细胞龛中上皮干细胞在牙齿 发育中可能的作用. l材料和方法 1.1材料 低糖DMEM/F12(1:1)细胞培养基(Gibco美国), 001mol/LPBS(本校口腔医院组织工程中心提供), 胎牛血清(Hyclone美国),体视显微镜及显像系统(o. 1ympus日本),超净工作台(NuAire美国),SD大鼠6 窝(仔鼠PN3,4d,母鼠l80,220g,本校实验动物中 心提供). 1.2方法 1.2.1大鼠切牙颈环结构的取材将SD窝鼠中的 仔鼠断头,浸泡于750ml/L酒精溶液10min,在超净 工作台内分离上,下颌.去除其余组织仅留上颌骨,下 甘川【l…llll?l/lPIIS浸洗3次皿触镜什j 强做外利器取it{l_},切(刳I)fffi确取 可未端l:约2lllill轼细纵构.即.I】J预环杵栅浸泡 f身I【儿】…【l情十If_【清『【勺llMI:M/?2NJJ~.Jff柞硅, 待俸ll_ I 棚—?嗣i-_ si融『川fIg为触目讳}构1f4 ilu.…ir一?l【r【|_hl,li~|jIL1IIlalh…?~111[『 fx4 4,5?连续切片,进行_l一牲包察站 结果 缳_ 2.】术后!阎组蜘学观察 l圳相.啦i『Il匝沉【,化.为?hi1质喷 样组1.川州刊艋峨秆?圳呲”J】乜和浅 牙啦k~fll1咆十#钏胞I盘椒悟井排刮fliJ』纤小I,~flI胞 样胞为q样川(2)l】iIi仪鞍 为虮术匝髓复样站.删J成 坷奉顷钏胞样绷胞战性啊蔓卉III州.JiI髓样小 -l有新I__『L管t3) 3Il【求li2fIII.×I(10 IIlen]in:l}?”illl『}hh~t+;11l…Ip ,?|Jll1?,?h…I?1glltIIII}ilUlfI.I?I;rl,4r hallIiP…|】i(II1.xI『? 22枉后4用组织学察 I钔,圳艇:绩i托增f』.仍然斗 釉质q丰JE样织,W删微.卉{N列荇成? 细廿乜fti删』叮I,h2ttlI1?~]r胞内删仃q畸样 蜘l4)UlL,水r{?水砸”l!J曾J.见 Ii9奉匝牙髓复样站f目.删仍ll戚乍匝川 胞样删自计刊.髓样瓤___-r维城j多IJ冬J , f,liii『,lm1…, 414tfki*f__}dfxH) ,.=.一??i…::?Iiihh,f:I{…ll?I<kl~lIilhLJ:l_ “??”“““l?lll?h1?…hI?_Jl?.III=l【 fI?,?…J…1…?l__1n__?…r… …??”……?….”…… I[~illl?_?.Ill1.!n? 2,,iifi~timi,h.m,li<,.flIEIO(I1一 … jJTJI『志fIP?tI…l|1【/21,~JOm,22?h 5II虮术J【4删fx…) fI:rJi…::c,?I{JI,I?:iI【1 1?5lIIrlh?I?IFIIIIII,hi…ll}1Ul11I1 4l?LHn?IimrlImLlRn…l【 牙齿星一种多胚J甚起源的器其中『来丁二 1f,发育!tjm?一出II啦而q厩髓蔓台 f奉起根于其J圳同允质细眦潭性l皮?_克磺 胞疆丁肌峪蜘岫1f胞』?』较媸的增砧活和舒化 能力.二扦之问的州Fr瞬导n不1导敛r牙肯发育皿 骨的究已叫细i崔if-的构建要通址牙沮 上皮御M充质细胞之lI十日l咀,胎I『雌卜J姘组织1;?圳 牡m】I充崾皇L【包拈腑l?细胞抻经峙细胞,悄艋 充匝细胞混台培养垃种I成牛小鼠被恒下.结界 均形啦牙肯坫恂和光质 小实螗观察驯.S;-离的I)大鼠q预环结}悼 阻到体Il,/能够形成q-fl?-鲋瑚I组I日蚪结 陶在件内f;机J啦帕斯佯组织.包q釉质牙 {;】fl吁乖匝复台忏的站佝.njI1组l_颈州M 1垃J牙髓乍匝复制年结锄的q曲作组织蜕惴fi- 在于F}预结恂I々T细胞龟禽仃悯牙,H? 上皮咆.作,瞒导成分.与用的牙幽问nI觅质细胞『I 定向分化勾牙胚发育功能州胞——成细呲和成牙本 质细胞』,Eiil惟断颈环十细胞可肯发肯ll】越若 的件刖 情麦动物(鼠)下叼n=旬终_l小断K的 }徘q_L奸陛n{根结m形成其蛳IfitjJ世雍的发 育是l戈t[1J.成劬器晌七-?l匝过自分泌或旁舒 泌途径特信?,转谴颁部的问允{面_1纵.进『nJ l看导J器环站蹦舒化i1?1】成}结I匈山戚 l1”j一虚外籼?芷姒J盘啦{i细J地…fLI形 啦已研究丧川,蜘耶I-圳咆萍J中层细 眦”,终_lI保持此3层站构断长H有州层消 失f站恂尘勾2睦々构的上盘根时,牙{1=!才蜻 蓖育本实骑表J卅.F坝耶细的休培养只 彤啦】崎和牙小匝而无省根蹦l站I訇Iit!l丧m摊 测哪圩预t细啮可能分化刮讣泌【能的成种细 l魁.婧萼维持玎赶酃哥铀嗄的墩无q讯组织呐表 说明悼内业坫庠fI!J?;I匈们口维持3腻 j虾,ifnJ泄竹JI_jI戊2tl恂的慢但鞘恂 I)uailibi在他川j,7J鼠嚼牙细胞l盐什 I程句_自述时发择4?l的细咆州 {始雌?曲神子U】l_乜最台通蚺棹6tl之内部 仃卜邗闸危质1.恤行J,L本实验l筻汁譬虑选 择3,4一I的f于鼠切珂=颅构-扯fr_才由,上研 究埘骑l2l巾,呆川D仃然t悄 rl寓fI!J母鼠肾做惮下,址为J恤物在Iq的 龟崆排斥』乏wrL罔免疫州Ii而遗啦移楠物的啦收 川部做f境佝政变真螗结丧fI』』鼠做l,诱 导环竞移椅物-,J以继续圩化.埕肯1=}i幢J=_ll怍积化 11太考虑足--J能由】持做f,口较几.心拦供r r供Kn,境,而1rK帕怍J1_I;计限圳J侈 悄物长k的川能什 参考文献 i,i?rI,llk…I LJilJ?-一,f,, ?f?f l1…t}I??rhn~JllL【iJlt?m{l…11{|llr1…J,…n?]{],【l- 一Ppllh~I)1J~ualll【r_IUq6245(2,:j5l 墨,?