【doc】吖啶橙荧光染色方法的改进

【doc】吖啶橙荧光染色方法的改进 吖啶橙荧光染色方法的改进 48 色,,f蟛j' Vot10 N02 吖啶橙荧光染色方法的改进 组肛教研室梁玉任恬敏姜俭 附属医院血液实验室D勺年 吖啶橙(acridineorange,AO)荧光染色法较烦琐,为了使荧光图像更鲜明,染色过程更简 是yonBertalanffy[等首先应用于脱落细胞学便易行,本文在yonBertalanffyAO荧光染色 诊断的.此方法能同时显示细胞内的两种核酸,法的基础上进行了改进. 即脱氧核糖核酸呈绿一黄绿色荧光,核糖核酸材料与方法 呈桔红一红色荧光.但yonBertalanffy法荧光首先将vonBertalanffy法和本文改进的 颜色不够鲜明,各色对比度不足,且染色过程比AO染色法比较如下; vonBertalanffy法改进的AO法 1:1乙醚和乙醇固定95乙醇 44 各度乙醇80乙醇 44 蒸馏水洗自来水洗 44 1醋酸1醋酸(可省略) '4 磷酸缓冲液洗(pH6.0)自来水洗 ' 0,01AO磷酸缓冲液(pH6,0)0.01AO1/15mol磷酸二氢钾溶液(pH4,8) ' 蒸馏水洗自来水洗 '' 1./10mol氯化钙分化1/10mol氯化钙分化 '' 蒸馏水洗自来水洗 '' 封片,观察封片,观察 在我们改进的方法中,将固定剂更换为 95乙醇,将由二种磷酸盐配制的AO染液更 换为一种磷酸盐即磷酸二氢钾配制染液,pH由 6.0降低为4.8,提高染液酸度;将蒸馏水洗更 换为自来水洗;由于提高了染液酸度.1醋酸 可以省略且不影响染色效果. 讨论 利用改进的AO染色法曾对天津市20000 例就诊患者宫颈涂片进行了脱落细胞学的诊 断,效果颇佳.该方法不仅简化了染色过程,同 时绿色荧光和红色荧光对比度增强.荧光图像 更清晰,鲜明;荧光染液还可以连续使用和长期一 保存(4C冰箱保存半年以上).改进后的AO荧 光染色法更适用于临床脱落细胞学诊断和病理 活检组织切片的观察. (此文承许屏教授指导特此致谢) 参考文献 lyonBerta[anffyL.MasinF.MasinMUseofacridineoF— a121gefluo?r1cttechniqueinexfo[iadvecytolx~gyScien~N Y.1956;124:1OZ4 2yonBertaLaMfyL,Masi.M?Aa.drapidmelhod{or dianosisof~agi.ala.d…a【c~cerbyfluorescencemi croscopyCancerNY,t958I11:873 (1993—12--18收稿)