HPLC法测婴儿奶粉等食品中维生素K1

T 40 ． i 。卿 年第 期Ts 7 3 《食品工业》 ■食品捡刺 食品低钠的需要，食盐掭加量以 2％～3％为宜。 2．3 原料鱼新鲜度对鱼香肠弹性的影响 原料鱼在 一1 ℃条件下分别贮藏 0～12个月后制 成鱼香肠的凝校强旺见 3。从表 3可见，原料鱼贮藏 时间越长，鱼香肠凝校强度值越低 因此在加工过程 中应尽量缩短原料鱼的贮藏时间。 2．4 淀粉对鱼香肠弹性的影响 在鱼肉中分别加入 5％、10％、15％的玉米淀粉 、 甘薯淀粉、马铃薯淀粉测定其对鱼香肠品质的影响(表 4)，淀粉是鱼香肠的重要填充物，同时可增加其弹性。 从表 4可见，淀{势中以马铃薯碇粉效果最好，甘薯淀粉 次之，玉米淀粉最差；当淀粉含量选 15％时．鱼香肠有 明显的淀柑昧，且口感变得桓糙。因此鱼香肠中淀粉 的添加量以 10％左右为佳 。 寰 4 淀粉对凝胶强度的影响 淀粉种类 蒂加量(％) 凝腔强度(g／cm ) 5 115．5 玉米淀 粉 l0 I60．5 l5 168 7 5 l加 ．4 甘薯淀粉 10 l70．1 l5 l82．7 5 131．6 马锋薯淀瓣 l0 l娼 ．1 L5 204．6 2 5 加工工艺对鱼香肠品质的影响 影响鱼香肠品质的关键工艺是擂渍，其目的是让 鱼肉中的盐溶性蛋白睫充分溶出。影响擂磕效果的因 素有时间 (参见表 5)、加料顺序、温度等。擂溃时间应 为 10--15n~n。正确的加料l1币序是：鱼肉一盐一淀粉一 水一其它辅料；擂溃湿度应控制在 0～1012，以免蛋白 质变性 寰 5 擂渍时间和凝胺强度的关系 搐清时问(m )I 2 l 5 l 8 l lO l l5 l 2o 凝腔强度(g／m1 )i 41 7 l 86 9 ll2l 4l147．4ll78 5l186 l 3 结 论 3 1 依据实验结果，漫水鱼香肠的配方确定为：鱼肉 100 水 50 淀粉 l5 食盐 4 白砂糖 3．5 味精 0 85。 3 2 擂溃是鱼香肠加工中的关键工艺，擂磕时应将 温度控制在 0～1012、时间 10--1．fv~n，加料顺序为：鱼 肉一食盐—啦 粉 水一其它辅料。四 健 堆生豪K 定 HPLC 邸 LC法 』 粉 测婴儿奶粉等食品中 维生素K 上海市食品工业研究所 李孝宁 陈 刚 、 、 — 一 — — — — — — 一 摘要：样品用 pH7 7，0．嘶TDLK 2卜瑾D。 缓冲技搅 匀，加人脂晴酶．于 3TC水浴振荡 9嘶 n，乙醚抽提，醚 液通 N 气，于仳 水浴真空蒸干，残渣溶于正己烷， 进行毛地黄皂甙一 硅藻土柱层析。眦 测定采用反 相uchm0 l 柱，移动相：甲醇十四氢呋喃+水 7o+24+6，u 检测器，流速 lrd／分，灵敏度0．~5(13． 方法相对偏差为±4培％，回收率为 94 6％ 前 言 维生素 K是一种萘醒衍生物，化学名称为 2一甲 基一3一植烯基 一1—4一萘酲。它是参与生物体的凝血 过程的重要化台物。 维生物 K 性质不稳定，在直接阳光照射、紫外光 照射、高温及碱的作用下易破坏 以前测定方法一般采用AIn日u 的小鸡生物分析 法，由于费时 ，方法精度差，相对标准偏差接近 20％， 而不能适应发展的需要，近年来国际上正在探索各种 化学方法及物理方法，其中卜毗 法由于快速，分离效 果好，灵敏度及精度高，且条件温和而受到人们瞩目。 在 Ⅱ c法涸0定维生素K-的过程中，关键的问 是对高脂肪及脂结性杂质多的样品的纯化，为避免碱 水解法引起的维生素K，的破坏，我们采用酶解法，从 国内外几种脂肪酶的水解反应试验解决了酶品种选择 及酶解条件探索等问题，并采用毛地黄皂甙——硅藻 土柱层析有效的去除了高措食品中含量很高的脂溶性 杂质——甾醇。 在Ⅱ c系统中我们采用反相Ljch髓0【b 15era柱， uv捡 0器 ，tRlimin。 方法简易可行，当天可完成，精度及准确度较高， 我们用来检测了婴儿配方奶粉、蔬菜、面粉 肝及值物 油等类食品，结果与资科报导一致 】． 测定方法 1 1 仪 器： sHz一82型水塔恒温振荡器 (江苏省太仓医疗器 一 、、 ．／ _ 维普资讯 http://www.cqvip.com ■食品拴测 《食品工业》 1999年第1期 ·41 械厂) Lc一4A高效液相色谱仪(日 岛津) 1．2 试 剂 ： 甲醇 (上海昊泾化工厂生产．高效液框色谱级．经 0．5 瞎漠过滤。 去离子水(经 0 45P滤膜过薄，供液相色谱用) 脂肪酶(美国 Sigtrm公司) 维生素 标准溶液( m】)：精确秤取维生囊K -(Sigma公司)lrag至 l(~rd棕色容量瓶．以甲醇定容至 蠢憧 ，摇匀。从中精确吸取 0．2ml至 l(~rd棕色容量瓶， 以甲醇定容至刻度，摇匀。 四氢呋哺(A．R．宜兴市第二化学试剂厂 )： 经由性氧化铝纯化处理，并以 0 5ta-虑膜过'虑 0+05molpH7 7K HPO 缓冲液。 正己烷(A R 或C．P 杭州炼油厂生产)： 经活4L2-中性氧化铝纯化处理 毛地黄皂甙——硅藻土吸附剂： 将 545一助蒋剂(硅藻土)置于 1 10℃烘箱干燥6Il， 称靠毛地黄皂甙 (生化试剂)于烧杯中，加 】2 5ml蒸 镏水溶解后，倒入硅藻土申请匀，装瓶。 IO0％KOH溶液 1．3 测定步骤： 维生素K．对光较敏感．整个操作需在半暗室条 件下进行。 1．3．1 酶解：分g 称取 0．5～3g样品 (约含 0 5— 5 )及 1克脂肪酶，井用总量为 60ml 0．05mol pH7 7 ~I'IPO．缓冲液 ，调匀 ，移人 250ml平『 尧瓶 ，置于叵盟 水浴振荡器中，”℃振荡 90ram(100次／分)．加 100％ KOH溶藕 划 、乙醇 12m1．轻摇。 1．3．2 抽提：将酶解液移人分液漏斗，以2×l(~rd水 洗烧瓶，井之．再以 2×6t~al乙醚抽提，醚层台井，井用 2X lOl~nl水洗至pH中性 ，用约 1 无水硫酸钠脱水， 移人 15(~rd平底烧瓶，于 40℃，通 N 气，真空蒸干，以 4×l 己烷溶残渣，移入划度试管。 1．3．3 毛地黄皂甙—硅藻土柱层析 称 0 8S毛地黄一硅藻土吸附剂，取 0 8×30cm具 塞、具砂芯滤扳层析柱．用正已烷湿法装柱。 4mI样品液进柱，蔺遮在 10滴／分以内，用3X Ira／ 己烷洗试管，进拄，随后用 15ml正己烷冼脱，上进息量 22ml皆收集于 5Oral三角瓶中，于 加℃水溶，通 N 气， 真空蒸干，以4×0 5ml甲醇溶残渣，移人 2ml棕色容 量瓶定容。用2ml注射筒O 45P滤膜过_虑 瞻肪含量低的蔬菜、面粉等类样品，可不经过酶解 及毛地黄皂甙一硅藻土柱层析 1．3．4 H眦 测定 ： ①色谱条件 色谱柱：150×3．9ram E．Merck101tlicbrosarb RP-l8 移动相：恒溶剂，甲醇+水+四氢呋喃 =70+6+ 24 检删器：U~265mn 灵敏度：0 00501) 流 量 ：lml／分 ②删 定 ： 取 2 g／ml之维生素 标准溶液，月微型注射器 进样 25~tl；样涟注时 10～60gl，采用外标法摅高定量。 ③计 算： ×G ×Vo ! ×20o0× ： V W h×C n×V n×2O(300O —— __可 一 (~S／100S) 式中：h为样品峰高；v为样品进样量 (以 l计)； w为样品克数；h 为维生素K．标样峰高；c为维生素 标蝉浓度 (Pg／ 1)；"4o为维生素 K-标样进样量 ( 1) t_ 14 3邮 冒 1 婴儿配方乳粉中罐生素 Kl玎 c圈谱 样品：美国ENFAMIL乳粉 2． 结皋与讨论 2．1 利用本方法对婴儿配方奶粉 、绿叶菜、土豆、面 粉、肝、植物油等多种食品进行 了捡测，结果见表 1。 裹 1 各种食袖难生蠹 K 测定结果 维普资讯 http://www.cqvip.com 42-1999年第1期 《食品工业》 ●食品检嘲 测定结果与文献报导资料基本一致。 2．2 一元线性叵归分扩 配制蛙生素K 标准溶液 2 6,Ug／m1 从中分别吸 取 1印l、l5 1、20tzl、25Ⅲ、30p-1，进行 HPIX：测定结果如 ． 进砗量(vg) 峰高(m) 0 026 3 75 0 039 5 40 0 052 7 ． 35 0．065 8 ． 95 0 078 10 43 进样量( g)与峰高(cm)呈线性正瑁关，符台 Y=“+c一元一次方程。 2．3 目对标准偏差及回收率 对美国ENFAMIL乳粉进行 6次测定 测定值{ 100g J：46．3、48 4、47 3、44．8、51．2、49．7、X=48 0，标 准偏差为±2 3 相对标准偏差为 ±4 8％ 从 0 1 Ⅱd的维生素 K 标准液由精确吸取 2o 1(即 2 0“g K ) 添加至 3 0咄上述乳粉中 如此进行了 7次添加试验 实测值为 ( g／100g)：113、1C6、116、106、117、109、110， 平均回收率为 ：94 6％。 对卷心菜进行 了 6次 I定 测定值 ( g／lO0g)： 43 3、41 5、42 2、38．9、39 1 39 0，平均值 ：40 7，标准 偏差±1．9 B对标准偏差±4 6％。 从 2 ral的维生素 K 标准穗中精确吸取 0 aoa(~N 1．56t~g维生素K )添加至 6g卷心菜穗中 如 此进行了 5次舔加试验，实测值 {Vg／100S)：116、109、 113、108、112，平均回收率：95 7％。 注 ：蔬菜类样品预处理方法 ： 称取新鲜卷心菜 48．02g 剪成碎片状 加 lO(knl水 进行高速组织捣碎 成浆液 ，从中称取 菜液于 100ml 烧杯中，加 100％KOH2ml和乙醇 5ml，移人 250m]分液 漏斗，用 2X10ml水清洗烧杯，井人 PAOm1分液漏斗， 用 2X 30m]乙醚 (分析纯)抽提，醚层合并，用 3X 3Oral 蒸镏水洗至中性，用约 10g无水硫酸钠脱水，移人 150m]圆底烧瓶 40qC 通N ．抽真空蒸干 用 4X0．5Ⅱd 甲醇 (色谱级)溶残渣，移入刍 棕色容量瓶定容，用 2ml注射筒0．45tz滤嚷过滤 2．4 移动相的选择试验： 因为许多婴儿奶粉等食品中播加了 ,rltD2、viLE、 vitl~，为了 ＆准确测定vitK．，所以就要选择台适的移 动相使 vitD 、viLE、vitK 三小特征蜂完垒分离 选择移 动相的情况如下： 配制vitD~( e,／m1)、rite(66,Ug／m1)、vitkl(2．Ug／m1) 的标准溶液。 2．4．1 移动相 ： 甲醇 ：水 ：乙醮乙酯 =82：4：14 ．名 称 l VitD 2 l ViLE VitI( 进样量( 1)} 1 I 5 l0 保留时间{分)f j： 叠峰I；： 叠峰 13 8 三个特征峰分离效果不好 保留时间较接近 有叠 峰现象出现。 2．4．2 移动相： 甲醇 ：水 ：乙睛=78：2：20 ．名 称 l VitD l ViLE VitK 进样量{Ⅲ)} 1 I 5 5 保留时间(分)f 13-7 i 14 6 3．8叠峰 -- d、特征峰没有舟开，有叠峰现象出现。 2．4．3 移动相 ： 甲醇 ：水 ：四氢呋喃 =73：6：21 三 特征峰基本分开 。 2．4．4 移动相： 甲醇 水 ：四氢呋哺 =70：6：24 vitD：、'ritE、vitKI三个特征峰完全分开 分离效果 最佳，且重复性好。蜂形对称且满足于正态分布。 移动相选择曾做大量试验，不一一赘述。随后取 标准维生素溶液之最佳移动相条件：甲醇 ：水 ：四氢 呋喃=70：6：24，用于食品样品检测，同样取得良好 分离，故最后选定离移动相。 2．5 本检 4方法可靠性试验 由于国内、国外 (美国)尚无维生素K 之标准参 考物质，笔者采用已知浓度范围的 10mg／Ⅱd之维生素 K 针剂按本法进行测试结果如下： 针剂生产厂 曩耋臀 本法测定值 上海第一制药厂 f 9．0—11．0r~／trd 9．57rag／ml 江苏无锝县制药厂 l 9．0—11．0r．g／~ 10 06mg／M 从上表可看出两个厂维生素 K针剂其本法测定 值与中国药典规定含量皆一致 故本方珐准确可靠。 2．6 毛地黄皂甙一硅藻土柱层析对样品净化之效果 高脂类样品常含大量甾醇，此类杂质对HPLC测 定会带来不利影响 毛地黄皂甙可与甾醇发生沉淀反 应，而将甾醇除去，只要层析条件控制得当，可取得良 好效果 维普资讯 http://www.cqvip.com 一食品机械 《食品工业》 T s> ． (P 湖北工学院(430068) 华中平 — — — — — — ～ 摘 要 本文介绍了不同类型酸奶饮料的生产工艺 厦酸奶机的总体结构 ，并运用可蝙程控制器研制 了一 套酸奶机 自动控制 系统 ，同时介矩 了此 系统的组成及 控制软件的算法思想。 关键词 可编程序控制器 酸奶机 自动控制 Abstract The process of various acidulating afilk and the slrueture of acidulating milk machine are introduced in this paper．A acidulating milk machine cmatrol system is devel- 。ped IIs i：~~grammable controller．And the system and its control softwal3e’s algorithra are putforward Key W ord Programmable ContoHer Acidulating Milk M~hine Autocontrol 酸奶是一种深受人们喜爱的保健敛品，但是由于 酸奶品种不一、生产工艺不同，使得在同一台酸奶机中 生产不同类型的酸奶很困难 限制了酸奶生产企业的 发展，特别是小型酸奶生产企业的发展。 可编程序控制器具有可编程序的特点，通过改编 用户程序可以适应生产工艺的变化，而不需改变 硬件的结掏和配线 同时还具有功能齐全、适用性强 、 应用灵活可靠以及应用程序设计简单等特点，已经越 来越广泛地应用于各行各业的控制中。 笔者结合湖北省教育委员会资助课题 ‘小型整体 式自动化酸奶机的研制)，研制了一套简易可行的可编 程序控制系统．使得同一台酸奶机可以加工出不同类 型的酸奶，大大地提高了酸奶机的经济性和适用性 1． 酸 奶的生产工艺及酸奶机的总体结构 1．1 生产工艺 。 酸奶一般分为三种类型：调配型酸奶、凝固型酸奶 及搅拌型酸奶。这三种类型酸奶的生产工艺大致如下 ， 钟晓凌 朱晓龙 所示： ①调配型酸奶生产工艺 l砂糖一客化过滤l l 醯 化 l l 调 配 l l脱脂奶耪一化将1 (酸液 15～20℃>I-l(稳定荆B、C】一 I 璺墨型 I l (丝竖2 l l i垫=婪羔2l 一 回 l砂糖一溶化过滤l l 酸 化 l I 调 配 l l脱脂奶粉一化粉H(酸洼 15—20℃)l-．1(稳定荆B、cj-． 望 L L 鱼 圆 一圈 一国一 j ∞ 惫 i蔓 一圈 ．．圃 ．． 1脱腊奶粉一化粉1一I强化化粉卜l肢体磨均刷-． I 稳定荆A l一 随 一圈 c ] (4O - l一回 l(3 )I l 45℃)l凹 土柱屡析之 1-IPLC图谱 t R l4 232 图2美国 E~FAMIL乳{分．未经毛地黄皂甙一硅藻 将图2与图 I相比，说明毛地黄皂甙一硅藻土柱 层 ，对样品净化有明显效果。 3． 结 论 食品经 肪酶水解和毛地黄皂甙一硅藻工柱层析 后，采用反相 Lichrosorh IIP～18柱进行维生素 KaHPLC 羽I定的方法是一比较可靠的方法，它分离效果好，准确 度及精宦鞍高且灵敏宦高，本方法灵敏度为 pph级。方 法简易可行。 参考文献(略)回 — )广 期 搠 蛳 维普资讯 http://www.cqvip.com