肠胃清对多药耐药人口腔表皮癌细胞kb-a-1移植瘤和正常组织中阿霉素浓度的影响(1)

肠胃清对多药耐药人口腔表皮癌细胞kb-a-1移植瘤和正常组织中阿霉素浓度的影响(1) 精品文档 肠胃清对多药耐药人口腔表皮癌细胞KB-A-1移植瘤 和正常组织中阿霉素浓度的影响(1) 作者:孔令伟，范忠泽，许建华，孙 珏，朱美华，李 琦，韩建宏，石晓兰 【摘要】 目的 观察中药复方肠胃清口服液对肿瘤多药耐药的逆转作用，以及对瘤组织和正常组织中化疗药物分布的影响，探讨中药增效减毒的作用机制。方法 将具有多药耐药表型的人口腔表皮癌细胞株KB-A-1皮下注射接种于裸小鼠右侧腋下，随机分为5组:空白对照组，肠胃清组，阿霉素组，阿霉素 低浓度肠胃清实验药物组，阿霉素 肠胃清高浓度实验药物组。肿瘤称重、HPLC分析、流式细胞仪检测各组药物的抑瘤率、阿霉素在肿瘤组织与肝肾中的分布及肿瘤细胞的凋亡率。结果 阿霉素和肠胃清单独给药均不能抑制肿瘤组织的生长，阿霉素与肠胃清联合治疗能显著减少肿瘤组织的重量，增加肿瘤组织内的阿霉素浓度，诱导肿瘤细胞发生凋亡。阿霉素与肠胃清联合治疗没有影响肝脏和肾脏组织阿霉素浓度。结论 肠胃清在不影响正常组织阿霉素浓度的同时，通过增加阿霉素在肿瘤细胞内的积累而增强阿霉素的细胞毒性，从而抑制肿瘤组织的生长，逆转肿瘤的耐药。 【关键词】 肠胃清口服液;人口腔表皮癌细胞KB-A-1;多药耐药 1 / 6 精品文档 【Abstract】 Objective To observe the effect of Changweiqing oral liquid on reversal of mulitdrug resistance and the effect on concentration of DOX in tumor and normal tissue. Methods The human oral epidermoid carcinoma cell lines KB-A-1， which were mulitdrug resistance， were injected into the right flank area of the nude mice， which were randomized into 5 groups: control group， CWQ group， DOX group ， DOX plus CWQ group and DOX plus CWQ group. The tumor masses were weighted and the tumor inhibition rates were calculated; the concentration of DOX in tumor and normal tissue were analyzed by high performance liquid chromatography; the apoptotic rate of cancer cells were detected by flow cytometry.Results The growth of tumors was not inhibited in DOX and CWQ groups， the weight of tumor masses were all smaller in DOX plus CWQ group and DOX plus CWQ group than that in other concentration of DOX in tumor and the apoptotic rate in cancer cell were all higher in DOX plus CWQ group than that in other groups. There were no significant 2 / 6 精品文档 difference between the concentration of DOX in livers and kidneys of every groups.Conclusion CWQ can inhibit the growth of tumor and reverse mulitdrug resistance of tumor by increasing the concentration of DOX in tumor ， while the concentration of DOX in normal tissues didn’t change. 【Key words】 Changweiqing oral liquid;human oral epidermoid carcinoma KB-A-1;mulitdrug resistance 多药耐药(multidrug resistance， MDR)是肿瘤化学治 疗提高疗效的最大障碍，许多化疗增敏剂在提高疗效的同 时，往往存在严重的毒副作用，限制了临床应用,1,。许多 研究表明，中医药在辅助化疗药治疗恶性肿瘤时，一方面可 增强化疗药的治疗效果，另一方面可减轻化疗药的毒副作 用，其机制尚未被完全阐明，是否对肿瘤组织和正常组织中 化疗药分布有不同的影响尚未见报道,2,。我们既往的研究 表明，中药复方肠胃清口服液可抑制移植瘤的生长，并可明 显提高小鼠脾脏及胸腺指数,3,，本研究建立多药耐药移植 瘤模型，重点观察肠胃清对化疗药的增效作用，以及对瘤组 织和正常组织中化疗药分布的影响，阐明肠胃清增效减毒的 作用机制。 3 / 6 精品文档 1 材料与方法 材料 细胞株:KB-A-1是人口腔表皮癌耐药细胞系。此细胞株由Ira Pastan博士和 Gottesman博士馈赠(National Institutes of Health， USA)。细胞置于培养箱，在37?，5% CO2，95,空气条件下培养。培养基为DMEM，加入10%小牛血清，加入氨苄青霉素、硫酸链霉素至终浓度各100u,ml，培养基中加入μg/ml 阿霉素(doxorubicin，DOX)。动物:BLAB/c nu/nu 裸小鼠，雄性，4,6周龄，由中国科学院上海实验动物中心提供，按照SPF条件饲养。肠胃清口服液由黄芪、党参、白术、石见穿、野葡萄藤等药物组成，由上海中医药大学附属普陀医院制剂室提供，生药浓度为/ml。 人表皮癌细胞KB-A-1异种移植模型的建立,4, 单层培养细胞用胰蛋白酶消化，用PBS悬浮混匀至约3×107cells/ml，以5×106cells/浓度皮下注射接种于裸小鼠右侧腋下，3周后，处死动物，迅速将肿瘤组织解剖下来，剪碎，通过网筛过滤，用PBS吹打成2×107cells/ml细胞悬液，以2×106 cells/浓度皮下注射接种于裸小鼠右侧腋下，当肿瘤组织生长到5mm×5mm大小时开始给药处理。 4 / 6 精品文档 动物分组及治疗方法 将上述长有肿瘤的裸小鼠随机分为5组，每组6只，分别是:?空白对照组:注射生理盐水(腹腔注射)，每天1次;?肠胃清组:(50g/kg，每天1次灌胃，第1,9天给药);?DOX组:(2mg/kg，腹腔注射，每天1次，第2、4、6、8天给药);?DOX 低浓度肠胃清实验药物组:(肠胃清为/kg，给药方案同?组;DOX的给药方案同?组);?DOX 肠胃清高浓度实验药物组:(肠胃清为50g/kg，给药方案同?组;DOX的给药方案同?组)。 在DOX和肠胃清同时需要给药日，肠胃清腹腔注射后5h再腹腔注射DOX。每隔3天称量1次体重，并记录对动物的行为观察。全部动物在给药处理后18天时用乙醚麻醉后处死，迅速取出肿瘤称重。 肿瘤和正常组织内DOX浓度的测定 通过HPLC分析，对肿瘤、肝脏和肾脏内的DOX浓度进行定量测定，以确定肠胃清对DOX在被移植肿瘤的裸小鼠体内的分布的影响。具体实验步骤如下:在装有 KH2PO4缓冲液()中，将取出组织以1:5 W/V比例充分匀浆，加入30μl KH2PO4、60μl 33% AgNO3、40μl 内标(柔红霉素，daunorubicin)和390μl 80,乙腈水溶液至300μl组织匀浆液，旋涡振荡2min以混合均匀，3000rpm，4?离心10min以沉淀蛋白质，去100μl用于HPLC 5 / 6 精品文档 分析，HPLC体系为:荧光检测器，激活波长495nm，发射波长560nm;固定相为C18反相柱(5μm，安捷伦)250mm×;流动相为5mM 磷酸,甲醇,异丙醇,乙腈(8:7:3:2，体积比);流速为/min。每个样品测定3次，取平均值.数据以DOX峰面积与内标峰面积的比值表示，计算出组织内的DOX浓度。 (作者:3COME未知 本文来源于爬虫自动抓取，如有侵犯权益请联系service@立即删除) 6 / 6