双氯灭痛滴眼液的含量测定及其稳定性研究

双氯灭痛滴眼液的含量测定及其稳定性研究 () 自 然 科 学 版Dec. 1996 山 东 师 大 学 报 1996 年 12 月 ( ) Journal of Shando ng Normal U niversity Nat ural Science Vol . 11 No . 4 第 11 卷 第 4 期 双氯灭痛滴眼液的含量测定及其 稳定性研究 王娅娟祁学永李斌 () 山东教育学院化学系 ,250013 ,济南 ;第一作者 33 岁 ,女 ,讲师 摘要 用紫外光谱法测定双氯灭痛的含量和 HPL C 法研究其稳定性. 在 01002 mol/ L 氢氧化钠溶液中双氯灭痛μ于 276 ?1 nm 波长处有最大吸收 ,其吸光度与浓度在 5,30 g/ ml 范围内呈良好线性关系. 回收率实验的相对标准偏 ( ) 差为 015 %. HPL C 法采用 Nucleo sil C柱 ,以甲醇 —水50?50为流动相. 实验结果表明滴眼液在强光照射和高温下贮 18 存不稳定 ,经稳定性加速实验求出室温有效期为 417 年. 关键词 双氯灭痛 ; 紫外光谱 ; 高效液相色谱 ; 稳定性 分类号 O657132 () 双氯灭痛 Diclofenac so dium,分子式为 CHClN NaO,系邻胺基苯甲酸类的非甾体消炎镇 14 10 2 2 痛药. 双氯灭痛滴眼液首先由日本若素公司研制并于 1988 年在日本上市 ,其后瑞士汽巴眼药公司 在瑞士 、英国等地上市本品 ,主要用于各类白内障术后炎症 、角膜炎 、巩膜炎等. 我们配合研制单位 做了含量测定和稳定性考察工作. 含量测定采用紫外分光光度法 ,操作简便 、快速 ,重现性好. 用高 ( ) 效液相色谱 HPL C将主药双氯灭痛和降解产物进行分离 ,然后用紫外检测器测定剩余双氯灭痛 的含量 ,考察其影响因素 ,并进行了稳定性加速实验. 1 实验部分 ( ) (111 仪器与色谱条件 紫外分光光度计 W FZ900 —D4 型 ,北京第二光学仪器厂;恒温恒湿箱 上 ) () 海医疗器械厂;微量分析天平 上海天平仪器厂;美国 Varian V IS TA 5500 型 HPL C 仪 ,DC —600 () 数据处理机 ,N ucleo sil C柱 150 mm ×416 mm,紫外检测器 ,检测波长 277 nm ,流动相?甲醇 —水 18 () 50?50,流速?1 ml/ min . 112 药品与试剂 双氯灭痛滴眼液由山东医药工业研究所提供 ,规格为 5 ml?5 mg/ 瓶. 双氯灭痛 对照品由济南制药厂提供 ,在 105 ?下干燥至恒重. 甲醇为 HPL C 纯 ,其它试剂均为分析纯.2 结果与讨论 〔1〕211 双氯灭痛滴眼液的含量测定 参照何铭新等感冒通片中双氯灭痛的含量测定和山东省药 品标准中双氯灭痛的紫外鉴别法 ,双氯灭痛分子结构具有共轭双键 ,其乙醇溶液在 284 nm 处有最 大吸收 ,水溶液和 01002 mol/ L 氢氧化钠溶液在 276 nm 处有最大吸收 ,均可用于含量测定. 实验过 程中发现 ,用乙醇作溶剂时 ,辅料溶于乙醇后 ,致使溶液有轻微浑浊现象 ,使吸收度偏高. 文献1 报 道 ,在水溶液中一部分双氯灭痛可能成为双氯灭痛酸而使测定结果偏低 ,故选用 01002 mol/ L 氢氧 收稿日期 :1996 - 01 - 20 () 化钠溶液 p H > 9作为溶剂 ,用于含量测定 ,结合滴眼液 的特点 ,考察了辅料对其含量的影响 , 进行了回收率实 验. ) 双氯灭痛对照品 ,滴眼1双氯灭痛的紫外吸收光谱 液及药用辅料在 01002 mol/ L 氢氧化钠溶液中紫外吸收 光谱见图 1 . 可见 ,药用辅料在 240,330 nm 范围内无吸 收峰 ,对照品与滴眼液样品中双氯灭痛吸收曲线基本相 同 ,均在 276 ?1 nm 处有最大吸收. ) 2浓度与吸光度的关系 取经 105 ?干燥至恒重的 双氯灭痛对照品 ,用 01002 mol/ L 氢氧化钠溶液溶解成 μ每 ml 含 5,30g 间不同浓度的溶液 ,于 276 nm 波长处 图 1 双氯灭痛紫外吸收光谱图( μ) ) ) ) 1辅料 ; 2对照品 1915g/ ml; 3滴眼液 (μ) 测定吸光度 ,将实验结果以吸光度 A 对浓度 C g/ ml( μ) 样品 20g/ ml;01002 mol/ L NaO H 回归 ,得直线方程 A = 01031 89 C - 01003 6 ,相关系数 | r| = 01997 4 . 表明在测定条件下双氯灭痛浓度与吸光度呈良好线性关系. ) 3回收率实验 精密称取双氯灭痛约 100 mg ,置 100 ml 量瓶中 ,按处方比例加入辅料 ,加水并稀释至刻度 ,摇匀 ,过滤 ,弃去初滤液 ,取续滤液 1 ml 置 100 ml 量瓶中 ,用 01002 mol/ L 氢氧化钠溶 液稀释至刻度 ,摇匀 ,在 276 nm 处测定吸光度 ,并与同法制得的对照品溶液对照 ,结果见表 1 . 实验得平均回收率为 9919 % ,相对标准偏差为 015 % ,结合图 1 可以看出 ,辅料对双氯灭痛的 含量测定基本无影响 ,因此可用紫外分光光度法测定滴眼液中主药双氯灭痛的含量. 双氯灭痛滴眼液回收率结果表 1 No 1 2 3 4 ( ) 10012 15 19 17 99100100加入量mg ( )测定量mg 9916 10010 10015 10018 ( )回收率% 10015 10011 9914 9916 平均回收率 9919 % R S D = 015 % 212 双氯灭痛滴眼液稳定性研究 ) 1影响因素试验 将双氯灭痛滴眼液除去外包装 ,经强光照射 ,高温环境下 ,考察了外观色泽 , 〔2,4〕 澄明度 ,p H 值 ,降解产物 ,含量等指标. 降解产物和含量测定采用 HPL C法. 对照品溶液的制备 :精密称取 105 ?干燥至恒重的双氯灭痛对照品 , 加流动相制成每 ml 含 0125 mg 的溶液. 样品液的制备 :精密量取双氯灭痛滴眼液 ,加流动相制成每 ml 中含 0125 mg 的溶液. 分解产物对照液的制备 :精密量取已在日光下照射和在高温环境下放置的滴眼液 ,加流动相制 成每 ml 中含 0125 mg 的溶液. μ 分别精密量取上述溶液各 10 l ,注入液相色谱仪中测定 ,结果见图 2,图 4 和表 2 . 由图可见 , 前述色谱条件可有效地将主药双氯灭痛和分解产物进行分离. 高温降解产物只有一种 ,保留时间为117 min . 光照降解产物有两种 ,保留时间分别是 117 min 和 213 min . 可以认为光照降解产物中有 一种与高温降解产物相同. 由表 2 可见 ,双氯灭痛部分分解后 ,可使滴眼液色泽变成浅黄色 ,p H 值 58 () 山 东 师 大 学 报 自 然 科 学 版 第 11 卷 ( ( ) ) 图 2 双氯来痛眼滴液色谱图图 3 分解产物色谱图80 ?,10d图 4 分解产物色谱图光照 10d ) ( ( ) ) ) 1溶剂114 min2双氯灭痛314 min; ( ( ( ( ) ) ) ) ) ) ) ) 溶剂114 min;2双氯灭痛314 min1溶剂114 min;2双氯灭痛314 min; 1( )分解产物117 min ,213 mo n ) ( )3分解产物117 min 间下光照比加热影响更大一些. 表 2 双氯灭痛滴眼液影响因素试验结果 ( ) 色泽澄明度 色谱检查降解产物峰含量时间dp H 值 7185 125 0 0 100几乎无色合格 光照几乎无色 合格 7187 98175 1 0 ( )2000 ,4 000 L X 几乎无色 合格 3 7186 0 98116 微浅黄色 合格 7186 96100 5 1 浅黄色 合格 10 7183 2 94132 几乎无色 合格 加热0 7185 100125 0 40 ?几乎无色 合格 1 7183 0 99137 几乎无色 合格 3 7186 0 99185 几乎无色 合格 几乎无色 合格 7186 99123 5 0 几乎无色 合格 7184 98195 10 0 几乎无色 合格 0 7185 0 100125 60 ? 几乎无色 合格 1 7183 0 99151 几乎无色 合格 7184 98183 3 0 几乎无色 合格 7184 98157 5 0 几乎无色 合格 10 7183 0 97198 几乎无色 合格 几乎无色 合格 7185 100125 0 0 80 ? 几乎无色 合格 1 7182 0 99185 几乎无色 合格 7182 98132 3 0 5 7180 0 97175 10 7182 1 96187 5 ) 采用经典恒温法2经典的恒温动力学实验,使双氯灭痛滴眼液在不同温度下加热分解 ,按照设定的时间间隔取样 ,分别加流动相制成 0125 mg/ ml 的溶液 ,然后用 HPL C 法分离 ,并测定未分 解的双氯灭痛的含量 ,结果见表 3 . 将表 3 中实验数据 ,以 In C 对时间 t 作线性回归 ,得不同温度下 双氯灭痛降解的动力学方程 ,列于表 4 . 表 3 双氯灭痛滴眼液在不同温度下的含量变化 ( ) T ?65 75 85 95 ( )( )( )( )( )( )( )( )t h C % t h C % t h C % t h C % 0 0 0 0 10010 10010 10010 10010 20 10 5 3 99179 168 160 149 999999 40 20 10 6 99152 99140 99121 99110 99120 99106 98189 98158 60 30 15 9 98185 98181 98140 98113 80 40 20 12 表 4双氯灭痛在不同温度下降解的动力学方程 - 1( ) ( ) 温度?动力学方程速率常数 K h 相关系数| r| - 4 - 465 01995 5 ln C = 41606 - 1145 ×10 t145 ×10 1 - 4- 4 3102 ×10 75 ln C = 41606 - 3102 ×10 t 01999 1 - 4- 4 7188 ×10 ln C = 41606 - 7188 ×10 t 85 01997 8 - 3 1157 ×10 - 3 ln C = 41606 - 1157 ×10 t 01999 2 95 由表 4 动力学方程可知 ,不同温度下 ln C 对 t 回归得一直线 ,线性关系良好 ,说明滴眼液中双 氯灭痛降解反应属于一级化学反应 ,且可认为不同温度下降解反应机理相同. 将不同温度下降解反应速率常数的对数值 ln K 对 1/ T 回归 , 得直线方程 : ln K = 20192 -4 5 11007 ×101/ T ,相关系数| r| = 01998 0 ,与阿累尼乌斯公式:ln K = ln A - E/ R T 比较得降解反 - 1 9 - 1 应的活化能 Ea = 83172 kJ . ml ,指前因子 A = 1121 ×10h . 由此求得室温 25 ?下的降解速率 25 ?- 6 - 1 常数 K为 2157 ×10 h ,预测室温下放置双氯灭痛滴眼液有效期 t 为 4169 年. 即 417 年后 019 滴眼液中双氯灭痛的含量下降在 10 %之内. 室温留样实验已知双氯灭痛滴眼液置一般药品库中贮 存 18 个月 ,含量下降在 2 %以内. 3 参考文献 ( ) 1 何铭新 ,杨彦新. 感冒通片中双氯灭痛的含量测定. 药物分析杂志 ,1987 ,7 1?54 2 Go dbillo n J , Gauro n S , Metayer J P. High - perfo r mance Liquid Chro matograp hic Deter minatio n of Diclofenac and It s ( ) Mo no hydro xylated Metabolites in Biological Fluids. J Chro matogr ,1985 ,338 1?151 3 Keit h K H Chan , Kunjbala B Vyas , Kennet h Wnuck . A Rapid and Sensitive Met ho d fo r t he Deter minatio n of Diclofenac So dium in () Plasma by High - perfo r mance Liquid Chro matograp hy. Anal L et t ,1982 ,15 B21?1 649 ( ) 4 吴慧常 ,刘莲芬 ,莫轶群 ,等. 高效液相色谱法测定针剂中双氯灭痛含量. 色谱 ,1992 ,10 5?310 5 庞贻慧. 药物稳定性预测方法. 北京 :人民卫生出版社 ,19841188 60 () 山 东 师 大 学 报 自 然 科 学 版 第 11 卷 D ETERM I NATIO N OF D ICLOFENAC SOD I UM I N OP HTHAL M IC SOL UTIO N BY UV - SPECTROP HOTOM ETRY A ND STUD IES O N ITS STABIL ITY BY HPL C Wang Yajuan Qi Xueyo ng Li Bin ()Depart ment of Chemist ry ,Shando ng Instit ute of Educatio n ,250013 ,J inan , PRC Abstract The deter minatio n of Diclofenac So dium in op ht halmic solutio n by U V - spect rop hoto met ry was repo rted and it s stabilit y by HPL C was st udied. The wavelengt h of t he detectio n was 276 nm and t he standard curve was linear over t he co ncent ratio n bet ween 5 and 30 μg/ ml wit h t he co rrelatio n coefficient 0 . 997 4 . The coefficient of variatio n of t he recovery was 0 . 5 % . (Chro matograp hic co nditio ns were as follow s :column ,N uclesil C; mo bile p hase ,met hanol - water 50? 18 ) 50;flow rate ,l ml/ min ; U V detectio n wavelengt h ?277 nm. It was fo und t hat Diclofenac So dium inop ht halmic solutio n was fo und t hat Diclofenac So dium in op ht halmic solutio n was unstable under sunlight and at relatively high temperat ure . The stabilit y test showed Diclofenac So dium in op t halmic solutio n sto red at roo m temperat ure fo r 4 . 7 years wit h deco mpo sitio n of 10 %. Key words Diclofenac So dium ; U V - spect rop hoto met ry ; HPL C ; stablit y