实验八 水果中维生素C含量的测定

实验八 水果中维生素C含量的测定 实验八 水果中维生素C含量的测定 (三) HPLC法 一、实验前问题: 1(查阅资料，了解常见水果如苹果、橙、橘、猕猴桃等中维生素C的含量范围; 2(根据维生素C的含量，确定取样量，使样品溶液的浓度在实 验方法的定量范围内 二、目的要求 1、理解反相色谱的原理和应用; 2、掌握外标法定量测定方法、 3、根据样品中维C含量制定维C标准溶液的配制方法，然后实测维C含量。 三、实验原理 高效液相色谱是一种物理化学分离方法，具有高效分离功能，它和气相色谱在基本原理方面没有显著的不同，但其应用范围更广，可对80%的有机化合物进行分离和分析。 以液体为流动相，采用高压输送，使用高效固定相，使该法具有分离效能高、分析速度快及应用范围广等特点，并且只要样品能制成溶液，不需要气化，因此不受样品挥发性的约束，克服了GC要求样品能够 气化的弱点。在高效液相色谱中，反相色谱应用较广，它采用非极性键合相，极性流动相。HPLC主要用于复杂成分混合物的分离、定性与定量，在药物分析中已广泛用于微量有机药物及中草药有效成分的分离、鉴定与含量测定。 本实验采用C反相柱和高灵敏度的紫外检测器，对水果中V进18C行分离，利用外标法进行定量，方法简便，分析速度快，结果准确。 四、仪器与试剂 1、Waters 515高效液相色谱泵，2487双通道紫外检测器; 2、微量注射器; 3、C反相柱， 18 4、V标样:配制成100μg/mL的水溶液，加5ml冰乙酸; C 五、实验步骤 1、结合实物了解仪器各部分作用及使用方法; 2、流动相配制:0.05mol/L NaAc和乙腈比例为95:5 3、在UV1700紫外分光光度计扫描Vc标准溶液，确定它的最大吸收波长。 4、用V标样配制成2.5, 5.0, 7.5, 10.0 15.0 20.0μg/mL绘制工作C 曲线. 5、样品溶液:将水果打碎匀浆，根据水果中V含量并且考虑以C 后步骤对浓度的影响后决定称取匀浆样品的数量，以便保证样品信号在工作曲线范围内. 匀浆样品加10ml水混合，加5ml乙酸，超声15分钟，离心10分钟。上层清液过滤按适当步骤处理后检测。 实验后问题: 1、你所处理样品含量如果不在定量范围内，你将如何处理, 2、加乙酸的目的是什么, 3、实验中所处理的样品，如果含量不在标准曲线的范围内，应该如何处理, 4、比较三种测定方法的优缺点。它们对样品有无特殊要求,