嗜肺军团菌

嗜肺军团菌 赛润 ELISA classic 嗜肺军团菌 IgG/IgM 目录 1.用途 2.诊断意义 3.赛润 ELISA classic-检测原理 4.试剂盒组成 5.检测所需物质，试剂盒未提供 6.储存和稳定性 7.赛润 ELISA 的检验步骤 classic 7.1注意事项 7.2检验前的准备工作和储存 7.3试剂盒反应试剂的准备工作 7.4检测程序概要 7.5检测过程 8.检测结果评估 8.1 4PL单点定量法 8.2检验有效性 8.3计算赛润 ELISA classic嗜肺军团菌 IgG/IgM(定量) 8.4检测结果 9. 性能特性 9.1重复性 9.2 敏感性和特异性 10.警告 10.1警告和安全 10.2废料处理 11.参考文献 1 赛润 ELISA classic 嗜肺军团菌 IgG/IgM 试剂盒 酶联免疫法测定人体抗体(IgG/IgM) - 只限用于体外诊断- IgG-试剂盒(定量) 编号: ESR106G IgM-试剂盒(定量) 编号: ESR106M 1. 用途 赛润 ELISA classic 嗜肺军团菌1-7 IgG/IgM 主要用于定性和/或定量检测人血清或血浆中抗嗜肺军团菌1-7的抗体活性。检测系统用于完善直接检测方法，以鉴别非典型肺炎的各种影响因素。 2. 诊断意义 嗜肺军团菌属于军团菌科、军团菌属. 它是一种革兰氏阴性的、需氧的、多形性的非孢子类杆菌，它能利用单极、多极或近极的鞭毛来运动。目前发现军团菌有39种，而种内的免疫学差异又建立在血清分型上。最重要的人致病菌是嗜肺军团菌，它包括14个血清型。多数军团菌肺炎(80-85%)是由第1-6种血清型嗜肺军团菌引起的。 军团菌普遍存在于物体表面和饮用水中，能够在阿米巴原虫和其他原生动物体内 l, 2繁殖，25-45?的温水系统是它理想的繁殖环境。军团菌通过气溶胶传染到人体内以后，会被肺泡巨噬细胞吞噬，其所谓的逃避机制不仅能使军团菌存活，而且会在吞噬细胞中繁殖。 2 典型军团病(美国退伍军人病)在感染后有一些非典型性前驱症状，如普通的不适、头痛、肌肉痛和干咳。通常在2-10天内发病，几小时内就会胸痛、高烧(39-40.5?)、偶尔出现伴有腹泻呕吐的胃肠道紊乱，但该病的突出特点是严重的肺炎症状。军团菌性肺炎的临床表现约有2-5%，其中10-20%会有生命危险;免疫力低下的病人如果得不到及时治疗，死亡率可能会上升到80%。 所谓的庞提阿克热是军团杆菌病的第二种良性的非肺炎类型。其特点是有一个很短的潜伏期(1-2天)，伴有轻微的流感样症状;发病时会伴有头痛、肌肉痛、胸痛、咳嗽和发烧等症状，尽管疼痛很严重，但病人几乎可以在5天内完全恢复。 由于其非典型性临床症状，必须依靠实验室诊断，如直接病原体检测、衍生抗原或特异性抗体的检测等。 通过培养或直接免疫荧光分析(DFA)检测病原体对病情的快速诊断具有特别重要的意义。病人的痰液、气管支气管分泌物和胸膜穿刺活检是理想的检测标本。但是培养法或免疫荧光分析检测病原体有一定局限性，因为两种方法检测的敏感性最高只能达到50-60%。 为弥补上述直接检测法的不足，对非典型性肺炎通常还要做其它方面的检测，因 4而血清学检测系统得到了广泛的应用。 由于军团菌中有多个血清型是人类的病 3 原体，集合抗原为间接免疫荧光分析(IFT，也称“金标法”)和酶联免疫吸附试验(ELISA)的应用奠定了基础，赛润ELISA classic IgG/IgM试剂固化了第1-7个血清型军团菌的相关抗原混和物。 大约发病10天后，用IFT方法和ELISA方法能检测到特异性抗体。在德国健康 5人群中1-5%的人有嗜肺军团菌特异性抗体的血清学特征， 地区差异也很明显。因此，没有滴度动力学特点的、增强的单点滴度测定要求严格评估，一般推荐取双份血样进行检测。血清转化或抗体滴度增加表明病人目前被感染或近期被感染过，临床发病14天后约有50%的病人呈现血清学阴性，而血清转化能持续14周 6(一般持续3-6周)。 因此血清学检测不能用于早期诊断。 -检验原理 3.赛润ELISA classic 用抗原包被微量板孔，制成固相载体。加患者血清到板孔中，其所含的抗体特异性地与固相载体中现存抗原结合，形成免疫复合物。除去多余物质后，加入结合了碱性磷酸酶的IgG、IgA或IgM抗体，使之与上述免疫复合物反应。洗板，除去多余的结合物，加入底物,对硝基苯磷酸盐,。该反应产生有颜色产物，颜色强度与特异性抗体含量成正比。 4 4.试剂盒的组成 试验成分 IgG试剂盒 IgM试剂盒 数量/容积 微孔条(此微孔条可以掰开单独使用，每条有8孔，共96孔，已经包被了抗原) 12 12 1个微孔条框架 包被的抗原为灭活抗原 标准血清(立即可用) 人血清溶于含蛋白的磷酸盐缓冲液;抗HIV抗体、抗乙肝病毒(HBV)表面抗原和抗丙肝病毒(HCV)抗体均2×2毫升 2×2毫升 为阴性; 防腐剂:0.1%叠氮化钠 染色剂:紫红色O 阴性质控血清(立即可用) 人血清溶于含蛋白的磷酸盐缓冲液;抗HIV抗体、抗乙肝病毒(HBV)表面抗原和抗丙肝病毒(HCV)抗体均1×2毫升 1×2毫升 为阴性; 防腐剂:0.1% 叠氮化钠 染色剂:里沙明绿 V 酶标记的抗人IgG, IgA, IgM (立即可用) 羊抗人IgG, IgA, IgM(多克隆)，碱性磷酸脂酶，以蛋白封闭液封闭。 13毫升 13毫升 防腐剂:0.02% 甲基异噻唑啉酮 0.02%溴化硝基二垩烷 浓缩洗液(可稀释至1000毫升) 氯化钠，含吐温20和30mM Tris 1×33.3毫升 1×33.3毫升 防腐剂: 0.1%叠氮化钠 稀释缓冲液 磷酸盐缓冲液，内含蛋白和吐温20 2×50毫升 2×50毫升 防腐剂: 0.1%叠氮化钠 0.01克 /升的溴酚蓝钠盐 终止液 15毫升 15毫升 1.2N 氢氧化钠 底物(立即可用) 邻硝基苯磷酸盐，不含其它溶剂的缓冲液 13毫升 13毫升 防腐剂:浓度小于0.1%的叠氮化钠 (瓶子未盖好底物可能会轻微变黄，但不会影响其质量) 带有标准曲线和评估表的质量控制认证文件(抗体以IU/1 1 毫升或U/毫升计量) 5 5.其它检测所需物质 - 普通实验室所需的仪器装置 - IgM检测:赛润类风湿因子Rf—吸附剂(产品编号Z100/5ml和Z200/20ml) - 分光光度计，波长405纳米，建议参考波长范围620纳米- 690纳米(例如 650纳米) - 37?温箱 - 湿盒 - 蒸馏水。 6.储存及稳定性 试剂 储存 稳定性 开封后放在2-8?装有干燥剂的密封铝箔微孔条(抗原) 有效期内 袋中。 有效期内; 质控血清 / 标准血清 开封后保存于2-8?。 18个月 立即可用的溶液于2-8?储存。 有效期内 酶标记抗体 避免污染(使用无菌针头)。 24个月 18个月 开启后于2-8?储存。 稀释缓冲液 有絮状时丢掉 有效期内 未开封 36个月 浓缩液开封后保存于2-8?。 工作液在2-8?。 有效期内 洗涤液 工作液在室温下。 2星期 盛过工作液的瓶子应按常规方法清洗，并1星期 丢弃混浊溶液。 2-8?储存，避光。 避免污染(使用无菌针头)。当溶液变为黄有效期内 底物 色时应予以丢弃(水作空白，吸光度大于24个月 0.2时)。 终止液 开封后保存于室温下。 有效期内 6 7.赛润 ELISA classic的检验步骤 7.1注意事项 只有全部使用赛润 ELISA classic试剂才能保证检测效果，因为所有试剂都是有关联的，不能混用其他制造商的产品。尤其是标准血清，对照血清以及酶标记物，必须使用试剂盒配备的，不要使用其它批号产品。稀释缓冲液，洗液，终止液和底物溶液可用于所有赛润 ELISA classic试剂盒。 未开封的情况下，如果保存于2-8?，ELISA classic试剂盒内所有试剂均在标定的有效期内有效。详细的稳定性和储存资料在“6. 储存及稳定性”内将加以详述。 每一种试剂都是经过校准以保证最佳的检测结果。这些试剂如果经过稀释或改动都会导致检测的敏感度的降低。 在储存及孵育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染，试剂避免受到微生物的污染，因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的结果。 如果铝袋破损或者已开启装有干燥剂的铝袋而未以夹子封紧的，则不要继续使用微孔条。 开始试验前，将所有试剂置于室温。 7 从试剂管中吸取试剂的时候，应注意使用无菌技术以防污染。为避免假阳性结果，吸加酶结合物时，吸嘴应确保不接触或喷洒于小孔的顶避，注意不要盖错瓶盖或管盖。 试验结果的可重复性依赖于充分混合试剂。使用前振荡装有对照血清的小管和所有稀释过的溶液(例如使用混合器)。 小心吸取试剂并严格遵守给定的孵育时间和温度。请注意在吸取标本 / 对照血清，酶结合物或底物时，第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的 “预孵育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。 只有严格遵守赛润ELISA classic试剂的试验说明才会得到最佳的检测结果。 如果实验中未严格遵守质量控制认证文件上的有效性特异准则，则试验结果无效。 洗涤不充分将影响试验结果: 应该小心进行洗涤。洗涤步骤应遵守相关洗涤器(平底孔，孔直径7毫米，深10.9毫米)指导手册进行，所有的孔内均应加入相同体积的洗涤缓冲液。洗涤结束时，应将微孔板倒扣于纸巾上并轻轻敲打，以确保所有孔内均无洗涤缓冲液。避免产生泡沫～如果使用自动洗板机，注意正确操作。 7.2检验前的准备工作和储存 为避免干扰结果，高血脂的，溶血的，或污染的血清不要用于检测。 8 样品不应加热灭活。 7.2.1样品准备 开始试验前，患者的待测样品必须以稀释缓冲液稀释如下(V1+V2): V1+V2=1+100 加 10微升 患者待测样品 于 1000微升 稀释缓冲液 稀释后及加入微孔板前，样品必须充分混合。 类风湿因子干扰 类风湿因子抗体是IgM的自体抗体，可与IgM免疫复合物结合。非特异性IgM 抗体(风湿因子)的存在将导致IgM检测的假阳性结果。另外，也存在弱结 合的病原体特异性IgM抗体被强结合的IgG抗体取代的可能性。在这种情况 下，IgM的检测将得到假阴性的结果。因此，在进行IgM检测前应用类风湿 因子吸附剂对血清作预处理。(赛润类风湿因子吸附剂，编号Z100 (5ml/25样 品)及Z200(20ml/100样品))。 7.2.2样品储存 密封的患者样品可在冰箱中2-8?保存7天。? -20?可保存更久。 避免样品反复冻融。 已稀释的样品可在2-8 ?保存一星期。 7.3 试剂盒反应试剂的准备 7.3.1 微孔条 9 微孔条置于一框架内，并与干燥剂一同封于铝袋之中。应将不需要的微孔 条取下并重新放入铝袋。将袋口折叠2-3次，并以夹子夹紧，确保铝袋的密 封性。 7.3.2 对照血清 / 标准血清 对照和标准血清立即可用，不必进一步稀释。试验时，可直接使用。 对于每次试验和每批检测体系，无论使用的微量板数目的多少，均应包括 阴性阳性对照孔。界定对照应作双份。如果是定量试验，标准血清也应作 双份。 不要用RF吸附剂处理对照血清～ 7.3.3 抗人 IgG, IgA 或IgM抗体稀释液，用 AP标记(即用) 禁止将不同试剂盒的酶标抗体混合。同一试剂盒才能具最佳检测效果。 7.3.4 洗液 以1:30稀释浓缩洗涤缓冲液(V1)至终体积V2。 例如: 浓缩缓冲液(V1) 终体积(V2) 33.3毫升 1000毫升 1毫升 30毫升 7.3.5 样品的稀释缓冲液(即用) 7.3.6 底物(即用) 试验时戴手套以避免污染。必须以无菌针头吸取底物溶液。 7.3.7终止液(即用) 10 7.4 检测程序概要 嗜肺军团菌IgG/IgM定量 进行IgM检测时先吸除RF因子 样品稀释液(病人血清) 1+100 , 将稀释的样本，和立即可用的对照血清 / 标准血清，加 到微量孔内(100微升) , 孵育60分钟 / 37? 湿盒中 , 洗涤 , 加入已稀释的酶标记抗体溶液(100微升) , 再孵育30分钟 / 37? 湿盒中 , 洗涤 , 加入底物溶液(100微升) , 再孵育30分钟 /37? 湿盒中 , 加入终止液(100微升) , 在405 纳米处读数 11 7.5检测过程 7.5.1将检测所需数目的微孔条放到微孔板框上并准备好一张草签。 7.5.2在微量孔内分别加入100微升的已稀释样本或立即可用的对照血清。留一 个孔为底物空白使用，例如: 定量的IgG /IgM 微量孔 孔A1 底物空白 孔B1 阴性对照 孔C1 标准血清 孔D1 标准血清 孔E1 标本 1...... 7.5.3将样品放于湿盒内37?(?1?)孵育60分钟(?5分钟)。 7.5.4孵育后以洗液缓冲液洗涤板孔(使用自动洗板机或手工洗板): - 吸去或甩去洗液 - 每孔内加入300微升洗液 - 吸去或甩去洗液 - 重付息涤过程3次(共4次～) - 将微孔板翻转过来在纸巾上拍打，使微孔中不再含有液体 7.5.5加入酶标记抗体。 于适当孔内(底物空白除外)加入100微升 IgG / IgM / IgA酶标记抗体 ,7.5.6湿盒内37?(?1?)孵育30分钟(? 1分钟)。 7.5.7孵育后，以洗液清洗板孔(洗涤见上) 7.5.8加入底物 于每孔内加入100微升底物溶液(包括底物空白孔) ,7.5.9湿盒内37?(?1?)孵育30分钟(? 1分钟)。 ,注意,在特殊的工作环境下有必要对孵育时间进行调整。 12 7.5.10终止反应 每孔内加入100微升终止液，轻微振荡微孔板以混合溶液。 7.5.11读取消光度 以底物空白为空白对照液， 60分钟内读取405纳米的OD值，建议参考波 长范围为620纳米-690纳米(例如650纳米)。 8( 测结果评估 赛润 ELISA classic嗜肺军团菌 IgG/IgM(定量) 8.1 4PL单点定量法 通过利用非线性方程，可以保证根据消光信号的定量数值精确计算出抗体活 性，该方程可在不对OD值进行转换的情况下调整S型曲线。 用赛润 ELISA classic试剂检测，抗体浓度可通过逻辑对数模型(4PL, 4个参 数)来计算，该模型对浓度曲线有很精确的适用性。计算公式如下: D - A OD = A + B(C-ln conc.)1 + e 参数A、B、C和 D能够反映曲线的精确形状。 1. 下端渐进线 , 参数A 2. 曲线斜率 , 参数B 3. 转折点 , 参数C 4. 上端渐进线 , 参数D 13 标准曲线是由德国维润赛润研发有限公司(维尔茨堡市)在严格条件下经过多次试验制定的。使用者无需花费大量的时间和使用昂贵的仪器来制作标准曲线。 每一个试剂盒内均附有专用的标准曲线和评估表用来计算抗体浓度。如有需要也可取得相关的评估软件。 为了校正正常试验偏差和建立试验对照，每轮试验均需使用标准血清作为对照。该对照血清的有效范围参考值是由厂商的质量控制部门确定的，在此范围内可保证抗体浓度测定的正确性。标准血清不一定是阳性对照，且在某些ELISA试验中标准血清数值可能是临界值或阴性结果。 8.2 有效性标准 - 底物空白的OD值必须 < 0.2 - 阴性对照必须为负值 - ELISA定量试验:标准血清的平均OD值必须在有效范围内，此范围已 在试剂盒专用的质量控制证中给定(减去底物空白之后～) - ELISA 定性试验:阳性对照的平均OD值必须在有效范围内，此范围已 在试剂盒专用的质量控制证书中给定(减去底物空白之后～) 如果未达到以上标准，则试验无效且必须重做。 14 8.3 赛润 ELISA classic嗜肺军团菌 IgG /IgM的定量计算 8.3.1 非自动评估 每个试剂盒内均备有一个标准曲线和一个评估表，因而每一个OD值都可得到一个抗体活性值。标准血清的参考值和有效范围已在评估表格(质量控制证书)中给定。 所有的OD值在求值前必须先减去空白(A1)。 方法1:定性评估 为确定临界值范围，请将已测得的标准OD平均值与质量控制证书上给出的数据相乘(见专用公式)，例如: OD = 0.502 x MW(STD) 临界值上限 OD = 0.352 x MW(STD) 临界值下限 如果得到的标准血清的平均消光度值是0.64, 那么临界值的范围即为 0.225-0.321。 方法2:用评估表精确评估抗体活性 1. 计算标准血清两个OD值的平均值，并检查其是否在给定的有效范围内。 2. 然后，根据标准血清的平均OD值在下表中确定对应的数据栏。 3. 用已测得的患者样品OD值查出“IU /ml或U / ml”栏中对应的抗体活性。 15 例如: 标准血清/OD范围 0.57-0.61 0.62-0.65 IU/ml 或 U/ml 其它 < 0.06 < 0.07 < 5 0.07-0.12 5-10 0.13-0.22 11-19 0.23-0.32 20-30 31-40 0.33-0.40 例如:测得的标准血清平均消光度值为0.64，则对应表中OD值0.62-0.65一栏中的数据。如果患者血清样品的OD值为0.25, 对应的抗体活性范围应是20-30。 方法3:利用标准曲线进行抗体活性的连续求值。 测定间差异(指不同时间的检测差异和不同实验室的检测差异)可用校正系数 F 与当前测定数值相乘进行校正。校正系数的计算公式为: (标准血清)OD参考值 F = (标准血清)当前测量OD值 用户利用专用的标准曲线对检测试验的偏差进行校正是非常必要的。 首先，不同日期检测之间的差异可通过计算校正系数 F 进行校正。 1. 计算标准血清的两次OD值的平均值，并确认是否在有效范围内。 2. 校正系数 “F”的计算:用给定的参考数值除以标准血清两次消光数的平均值。 F = 标准血清的参考消光数值 / 标准血清消光数的平均值 16 3. 将测得的所有病人血清的消光数值与校正系数 “F”相乘。 4. 用经过校正的消光数值在标准曲线“U/ml或IU/ml”坐标轴上确定对应的抗体活 性。 赛润 ELISA classic嗜肺军团菌IgG抗体活性的计算: 阳性结果: > 70 U/ml 不确定性结果: 50-70 U/ml 阴性结果: < 50 U/ml 赛润 ELISA classic嗜肺军团菌IgM抗体活性的计算: 阳性结果: > 140 U/ml 不确定性结果: 120-140 U/ml 阴性结果: < 120 U/ml 针对不确定性结果的样品，应在1-2 周后对相应的病人再进行取样，重新检测。 8.3.2 利用SERION easy base 4PL软件/SERION评估软件进行自动评估 输入四个参数和标准血清参考值之后，联机软件就会计算出抗体活性。 如果标准血清的消光值超出有效范围，SERION easy base 4PL软件就会显示如下信息: “标准已超出允许范围”和 / 或“标准差异大于20%”。 SERION 评估软件只用英语显示: 17 „Standard values out of ranges in following groups: Group 1-24. Standard value differ more than 20% in following groups: Group 1-24.” (“以下组样品标准值超出范围:组1-24。以下组样品标准值差异大于20%:组1-24。” ) 在这种情况下，此轮试验无效，需重做。 只有更换批号时，参数和参数值才需要改变(评估表中标有参数与参考值)。组别特异性数据的正确输入与否可以以标准血清的 IU / ml 或 U / ml 值为基础进行检验。计算出的平均单位值需与组别特异性认证书所示的单位值相对应。可自动校正测定值。使用标准版本打印机会显示如下内容: 样品编号 OD值 IU / ml或 U / ml 结果说明 8.4 检测结果说明 一般推荐取双份血样进行检测，血清转化或抗体滴度增加说明病人目前被感染或近期被感染过。第1份血样应在急性感染期采集，第2份血样则在10-14天后采集。由于经常发生免疫应答的延迟，应当在感染发病后20-40天期间再另外取样进行检测，因此血清学检测不可能用于早期诊断。 没有滴度动力学特点的阳性检测结果必须进行严格评估，因为健康人群中高抗体 5滴度的检出率也有1-5%。 初期的阴性检测结果并不能排除军团病，有30%的病人会出现免疫应答延迟或感 7染4周后仍没有抗体产生。 IgG和IgM抗体滴度会同时升高，因此IgM抗体不能作为急性感染期的抗体。由 7于早期IgM抗体滴度的降低，IgM抗体阴性说明前期曾被感染过。 18 图 1 ELISA试验结果评价的总结: 双份血清样品 (急性感染期 / 发病后10-14天 [40天] 取样) 用ELISA 方法检测特异性抗体 血清转化 无滴度动力学特点的 阴性结果 或抗体滴度增加 IgG阳性结果 无滴度增加 ? ? ? 急性军团菌感染 有军团菌既往感染史 不能排除军团菌感染 图1: 对双份血样用ELISA 检测诊断军团菌感染结果的说明 84注意:有关研究表明，嗜肺军团菌能与空肠弯曲杆菌、假单胞细菌、立克次体及其它革兰氏阴性细菌发生交叉反应。 9. 性能特点 9.1重复性 检测内结果的重复性通过在同一批试验中检测20次不同反应的血清来判断，而检测间结果的重复性通过分别在5天进行10次独立的血清检测分析来判断。 标准差 差异系数 (CV) = × 100 平均值 19 赛润 ELISA classic 嗜肺军团菌 IgG: 平均消光值检测内分析平均消光值检测间分析 (OD) (CV%) (OD) (CV%) 样品 不确定结果-弱阳性 0.721 7.10 - - 弱阳性 0.833 9.13 - - 不确定结果 1.092 6.59 - - 不确定结果 - - 0.663 11.60 弱阳性 - - 0.829 10.20 强阳性 - - 2.733 8.59 赛润 ELISA classic嗜肺军团菌IgM: 平均消光值检测内分析平均消光值检测间分析 (OD) (CV%) (OD) (CV%) 样品 阴性 0.301 9.77 - - 不确定结果 0.846 10.15 - - 阳性 1.092 8.83 - - 阴性 - - 0.690 16.70 阳性 - - 1.469 15.30 强阳性 - - 3.390 1.91 9.2 敏感性与特异性 138份血清样品是由法国国家军团菌资料中心(里昂, 法国)提供的，它们来自法国不同城市、1998-1999年间发病的82位患者。根据IFT方法对嗜肺军团菌抗体 20 滴度的检测结果将这些血清样品进行了选择和分类，结果如下: ? 20份血清:所有的血清学检测均呈阴性。 ? 10份血清:抗第1-7型嗜肺军团菌抗体呈阴性，但IFT方法检测其它军团菌属的抗体呈阳性。 ? 40份血清:符合典型的血清转化，以3份血清样品为对照(由阴性转化为阳性，第1份血清呈阴性，IFT检测其抗体滴度<128)。 ? 28份血清:呈现明显的抗体滴度增加，以3份血清样品为对照，第1份血清已呈阳性(IFT检测其抗体滴度>128)。 ? 40份血清:重复性的高抗体滴度，但没有明显的滴度增加。 在不同的试验室，用赛润ELISA classic 嗜肺军团菌IgG和IgM试剂对这些血清进行了平行检测试验。赛润ELISA classic 嗜肺军团菌试剂敏感性和特异性的计算是以IFT检测(金标法)作为对照试验的。 赛润 ELISA classic 嗜肺军团菌 1-7 * IgG检测 IgM检测 IgG和 IgM 检测 敏感性 88.5% 59.8% 94.3% 特异性 85.0% 97.5% 82.5% ,如果将赛润ELISA classic军团菌IgG和 IgM的阳性和阴性检测结果一起进行总结和比较，其敏感性会得到改善。(IFT检测方法不能区分免疫球蛋白的级别差异。) 21 10.警告 10.1警告和安全措施 赛润 ELISA classic试剂盒是针对熟悉实验室操作人员所设计使用的。 所有试剂盒试剂及人类标本必须采用已有的良好实验技术，小心处理: - 此试剂盒内含人血成分。尽管所有的对照及定点对照都已经过试验验证并且发现对于乙型肝炎表面抗原，丙型肝炎抗体，HIV抗体均为阴性;但仍认为它们具有潜在的感染性。 - 移液过程禁止用口。 - 在处理试剂和标本的地方禁止吸烟，饮食。 - 使用试剂盒和标本时，必须戴一次性手套，穿试验服，安全镜。使用后请彻底洗手清洁。 - 患者样本及其他潜在感染试验后应予以消毒。 - 终止液:具有腐蚀性(C);因此在操作时应穿戴防护镜手套和试验服。 10.2废料处理 请注意相关要求～ 22 11(参考文献 1. Wienieck-Krusnell, J., Linder, E., Free-living amoebae protecting Legionella in water: the tip of an iceberg? Scand. J. Infect. Dis. 1999, 31(4), 383-385. 2. Helbig, J. H., Lück, P. Ch., Röske, K., und Witzleb, W., Nachweis der intrazellulärenVermehrung von Legionella pneumophila in Protozoen durch Antigenquantifizierung mittels ELISA. Zbl. Hyg. 1993, 194, 392-397. 3. Blatt, S. P., Parkinson, M. D., Pace, E., Hoffman, P., Dolan, D., Lauderdale, P., Zajac, R. A., Melcher, G. P., Nosocomial legionnaires?disease: aspiration as a primary mode of disease acquisition. Am. J. Med. 1993, 95, 16-22. 4. Neumeister, B., Legionelleninfektionen- Epidemiologie, Diagnostik, Klinik und Pathogenese. Clin. Lab. 1996, 42, 715-729. 5. Lück, P. Ch., Legionella - eine Herausforderung für das mikrobiologische Labor. Immun. Infekt. 1993, 21, 3-4. 6. Quigley, C., Legionaires?disease. Microbiol. Europe 1996, 4(3), 10-14. 7. Putzker, M., und Sobe, D., Diagnostik von Infektionen mit Legionella-Spezies. 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