消敏颗粒对Ⅰ型超敏反应模型大鼠血清IgE含量及脾细胞IFN

消敏颗粒对Ⅰ型超敏反应模型大鼠血清IgE含量及脾细胞IFN 消敏颗粒对?型超敏反应模型大鼠血清IgE含量及脾细胞IFN 作者: 李忻红，王惠国，关洪全【摘要】 目的研究消敏颗粒抗大鼠?型超敏反应的免疫学机制。用卵白蛋白与AI(OH)悬液的混合液致敏和诱发，制成?型超敏反应动物模型。将实验动物随机分组，即正常组、模型组、消敏颗粒低、高剂量组、扑尔敏组，分别给予相应的药物进行动物实验。采用ELISA法测定致敏大鼠血清IgE含量。采用RT-PCR 方法，检测致敏大鼠脾淋巴细胞分泌IFN-γ mRNA、IL-4 mRNA的表达水平。结果消敏颗粒可降低血清总IgE含量，可促进IFN-γ及mRNA表达，抑制IL-4 mRNA表达(P0.01或P0.05)，均有显着性差异。结论消敏颗粒具有抗?型超敏反应的作用。 【关键词】 消敏颗粒 ?型超敏反应 免疫球蛋白E γ干扰素 白介素-4 Abstract: ObjectiveTo investigate the immunological mechanism of Xiaomin granules on type ? hypersensitivity.MethodsTo sensitize and lead rat with the mixture of (OVA)and AI(OH).To make the experimental animal model for type ?hypersensitivity. Divide the animals for experiment into groups randomly, named normal group，model group，vacant control group, Xiaomin granule (low-and high-dose)groups, chlorpheniramine group, and experimentize the anminals with homologous medication respectively. The Lymphocytes in IgE content in serum of sensitized rats was measured with ELISA. T Sensitized rats measured with RT-PCR.ResultsXiaomin granules could decrease the content of IgE in serum，increase the expression of IFN-γ mRNA，inhibit the expression of IL-4 mRNA(P0.01 or P0.05).They all had remarkable differences.ConclusionXiaomin granules has the effect on the Type ? hypersensitivity. Key words: Xiaomin granules; Type ? hypersensitivity; IgE; IFN-γ; IL-4 ?型超敏反应是主要由IgE介导的速发型超敏反应，消敏颗粒在临床治疗慢性荨麻疹等?型超敏反应性疾病取得良好的疗效，为了进一步研究其治疗机制，本文通过大鼠?型超敏反应动物模型，观察抑制IgE产生的作用，探讨消敏颗粒抗?型超敏反应的免疫调节机制。 1 器材1 动物Wistar大鼠50只,体重200,220 g，雄雌各半，购自辽宁中医药大学实验动物中心，分笼饲养于辽宁中医药大学实验动物中心实验室。随机分5组，即正常组、模型组、消敏颗粒低、高剂量组、扑尔敏组。2 药物消敏颗粒(由消敏饮制备)，组方为黄芪20 g，防风15 g，当归15 g，金银花15 g，芥穗15 g，蒺藜15 g，甘草15 g，购自辽宁中医药大学附属医院。生理盐水注射液，哈尔滨三联药业有限公司产品;扑尔敏，北京太平洋药业有限公司产品。3 试剂卵白蛋白，AI(OH)国药集团化学试剂公司产品;1gE ELISA试剂盒，上海森雄公司分装;Trizol，invitrogen公司;DEPC，DNA-marker DL2017，Rt-pcr试剂盒，宝生物工程有限公司(TaKaLa)产品。4 引物序列设计本实验选用GAPDH(三磷酸甘油醛脱氢酶)为内参照，根据文献报道在IFN-γ，IL-4,1,，GAPDH序列5‘, 3‘分别设计上下游引物，并在美国国立生物信息中心基因库进一步核准大鼠基因全序列。目的基因及内参照GAPDH引物由北京华大基因中心合成，基因序列见表1。表1 PCR 引物(略)5 仪器 550号微孔板酶标仪(美国BIO-RAD公司生产);酶标仪洗板机(美国BIO-RAD公司生产);DY89-?电动玻璃匀浆机(宁波新芝科器研究所生产);BIOFUGE28RS低温高速离心机(德国HERAEUS生产);PE9600 PCR仪(美国PERKIN ELMER生产);EPS-300电泳仪(上海天能生产);DYCP-33A电泳槽(北京六一仪器厂生产)。 2 方法 2.1 消敏颗粒制备消敏饮取14剂，分别将药物混合后浸泡30 min，煮沸后继续煎30 min，共煎2次，合并2次煎液，并分别浓缩至糖浆状，再与糊精混合均匀，粉碎干燥，在阴凉干燥处保存，使消敏颗粒每克含生药1 g。实验时将消敏颗粒浓度调配成为每毫升含生药1，3 g。 2.2 给药方法灌胃量4 ml/只，正常组和模型组每天灌服生理盐水4 ml/只;低剂量组、高剂量组分别灌服消敏颗粒20，60 g/kg;扑尔敏组4 mg/kg。 2.3 I型超敏反应动物模型的制备以生理盐水配制AI(OH)悬液(10 g/L)，除正常组各组大鼠均腹腔注射卵白蛋白(OVA 1 mg)与AI(OH)悬液(1 ml)的混合液进行初次免疫，第10天重复1次。从初次免疫后第6天开始给药，共14 d。 2.4 实验方法和观察指标 2.4.1 消敏颗粒对大鼠血清IgE生成的影响第14天，?型超敏反应大鼠模型未处死前取血，离心后取血清。采用ELISA法测定致敏大鼠血清IgE含量，按ELISA试剂盒说明书操作，显色终止后酶标仪测定450 nm处光吸收值，按曲线计算待测样品中IgE的浓度。