幽门螺杆菌感染对胃上皮细胞凋亡影响的实验研究

幽门螺杆菌感染对胃上皮细胞凋亡影响的实验研究 幽门螺杆菌感染对胃上皮细胞凋亡影响的 实验研究 .. 30.现代消化及介入诊疗2002年l2月第7卷第4期 目前用于MRCP的有SSPF,2DFSE,3DFSE及 HASTE四种序列,只有HASTE对胰胆管分辨率最 高(能显示最小直径为Imm的管腔)【.可见,我们 采用的HASTE是目前最理想的MRCP序列,其特 点是:?成像速度快,运动性伪影显着减少:?对 磁敏感效应不敏感,图象更清晰:?进一步提高了 空间分辨率和对比度噪声比.由于HASTE简单实 用,特别适用于急危重症和婴幼儿患者,有望取代 其他序列成为MRCP的常规序列. 我们的结果显示,MRCP对胆道结石定性定位 ,胆管肿瘤,慢性胰腺炎的诊断符合率较高(分别为 100%,92.86%和3/3),可以准确判定结石及其位 置,明确胆管肿瘤的部位,长度及浸润程度,梗阻 部位以上管腔的扩张程度,尤其”双管征”是恶性 梗阻的重要特征.乳头部病变与ERCP(或PTC)有 一 定差距(12/I7,70.9%),其中乳头部肿瘤,缩窄 性乳头炎分别为71.43%和7O%,对乳头部病变范 围比较大者,或病变向胆总管方向侵犯为主,MRCP 诊断准确性较高;而病变范围较小,或向十二指肠 侵犯为主者,准确性相对较低.对肝吸虫病MRCP 与ERCP的诊断符合率仅为66.67%,这是由于ERCP 检查时,可见肝内外胆管明显扩张,且肝内胆管末 端扩张呈囊性,大部分病人可于胆汁中见到肝吸虫 之虫体流出.使得ERCP对肝吸虫的诊断准确性极 高(几乎1oo%),而MRCP诊断肝吸虫的经验少, 引起误诊的机会较多. MRCP的优点在于无创伤性,不使用造影剂, 不受操作者技术的影响,无并发症,医护人员不受 放射线损伤.成像时,胆胰管内不受压力影响,既 能客观地反映胆胰管系统的自然状态,又能完整地 显示其解剖结构(尤其胆胰管以外脏器的结构状态) .因此,MRCP有着B超,CT,ERCP和PTC难 以达到的某些优越性.可用于胰胆管系统形态学研 究,发现解剖变异防止手术中损伤;对胆石症的定 性定位比较准;根据胆管扩张程度,胆管梗阻端形 态和”双管征”等特征能准确地鉴别良恶性肿瘤. 对这些疾病,我们认为MRCP已经达到了F.~CP的 单纯诊断水平,而对乳头部的病变(尤其是小病变) 和肝吸虫,MRCP却无法与ERCP相比拟.MRCP6 的最大不便,在于不能同时进行治疗干预. 由此,我们提出以下情况应将MRCP作为首选 考虑:1.有胃,十二指肠镜检查禁忌症:2.胆胰疾 病引起的急危重症,不能耐受创伤性检查者:3.造 影剂过敏:4.B—II式术后.5.婴幼儿. 参考文献 1.朱建新.经内镜逆行胰胆管造影.见:朱建新,侯淑琴, 李彦豪.主编.肝胆胰疾病介入诊疗技术.第1版.广 州:广东科技出版社,1996.2-16. 2.SlcaGT,BraverJ,CooneyM.ComparisonOfendoscopic retrogradecholanglopancreatographyMR cholanglopancreatography)inpatientswithpancreatis. Radiology,1999,210(3):605-610. 3.FulcherAS,TumerMA.MRpancreatography:ausefultool forevaluatingpancreticdisorders.Radiographics,1999.(1): 5.24. 4.张澎田,于中麟,于永征等.磁共振胰胆管造影术与直接造 影术对照诊断胆胰系疾病.中华消化内镜杂志, I996.I6(2):72-74. 5.ImeH,HondaH,TajimaT,eta1. OptimalMRcholangiopancreatgraphicsequenceanditS clinicalapplicati0n.Radiology,I998,206(2):379-386. 幽门螺杆菌感染对胃上皮细胞凋亡影响的实验研究 姚永莉张万岱宋于刚张亚历张振刘晓霞 【摘要】目的在H.pylori长期感染蒙古沙土鼠腺胃模型基础上,探讨H.pylori感染诱致 胃癌发生的可能机制.方法采用H.pylori国际标准菌株NCTCIi637灌喂蒙古沙土鼠.建立H.pylori 长期感染动物模型:用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP切口末端标记法(TUNEL)及原位杂交 作者单位:510515广东广州第一军医大学南方医院全军消化内科研究所 ?论着? 现代消化及介入诊疗2002年l2月第7卷第4期.31. 方法检测H.pyiori感染致胃粘膜上皮细胞凋亡的变化.结果成功建立了H.pylori长期感染蒙古 沙土鼠腺胃模型,其胃粘膜的组织学变化显示,H.pylori感染可致正常胃粘膜一慢性胃炎一萎缩 一 肠化生一异型增生的发展过程.H.pylori感染对胃上皮细胞凋亡的影响:接种H.pylori后25 周 内能引起胃窦粘膜上皮细胞凋亡增加(P<0.05),H.pylori感染45周时,与25周时相比,胃窦 粘膜 上皮细胞凋亡指数呈逐渐递减的趋势,65周时甚至明显低于正常值(P<0.O5):FAS及 FASL原位 杂交检测结果显示随着H.pylori感染时间的延长,炎症及病变程度的加重,FAS及 FASLmRNA 的阳性信号表达有逐渐增加的趋势(R(0.05).结论H.pylori走植致胃窦粘膜上皮细胞凋亡的 异 常,对正常胃窦粘膜向不典型增生进展的过程起重要作用;FAS和FASL在mtLNA水平的异 常 表达可能是H.pylon定植致胃窦粘膜上皮细胞凋亡异常的重要原因. 【关键词】幽门螺杆菌:癌前病变 EffectofH.pyloriinfectionongastriccellapoptosis YAOYong-Li,ZHANGWan-Oai,S0NGYu-Gang,ZHANGZhen-Shu,ZHANGYa-LiandLIUXiao- Xia [Abstract]0bjectivesToexploreinduceadenocarcinomamechanismmechanismthatH.pytori infectioncaninduceadenocarcinomaonthebasisofdevelopmentofMongoliangerbilmodeloflong- terminfectionwithH.pylori.MethordsDevelopmentofMongoliangerbilmodelofH.pylorilong-term infectionbyinoculatingH.pyloriNCTCI1637.ExperimentalstudyonthemechanismthatH.pylori infectioncanaffectgastriccellapoptosiswithTUNELmethodandhybridisminsith.ResultsMongolian gerbilmodelofH.plorilong-terminfectionwasdevelopedsuccessfully.HybridisminsituofFASand FASLshowedtheexpressionofFASandFASLshowedtheexpressionofFASmRNAandFASL mRaNAincresedfollowingtimeprolongationofH.pyloriinfection(P<0.05).Conclusioncellapoptosis LIincreasedduring25weekswithH.pyloriinfection;andgastriccellapoptosisLIdecreasedafter45 weeks(P<O.05).ConclusionH.pyloriinoculationcaninduceabnormalityofgastriccellapoptosis,which canaffecttheerocessprogressingfromchronicgastritisthroughglandulara仃 Ophy,intestinalmetaplasis toatypicalhyperplasiaTheabonrmalexpressionofFASandFASLmaybetheimportantcausefor abnormalityofgastriccellapoptosis. [Keywords]Helicobacterpylori;precancerosis;cellapoptosis 细胞凋亡从细胞动力学角度探讨H.pylori感染 与胃癌的发生关系己成为近年的研究热点,H.pylori 感染引起胃粘膜上皮细胞凋亡异常,增加了胃粘膜 上皮细胞向恶性转化的危险性,这可能是H.pylori 诱致胃癌发生的关键.本实验检测了H.pylori长期 感染诱发蒙古沙土鼠胃癌前病变过程中,胃粘膜上 皮细胞凋亡的变化,试图探讨H.pylori可能的致癌 或促癌机制. 材料与方法 一 ,动物模型制备及处理 无特殊病原菌蒙古沙土鼠60只,4周龄,雄性, 体重20g’~30g,适应饲养7天后,随机分成实验组 (50只)和对照组(1O只)两组.H.pylori国际标准株 NCTCII637增菌后用280g/L布氏肉汤调制成感染 菌液,浓度为2×1010.CFU/L,30min内用胃管 注入禁食12h的沙土鼠胃内,0.5mL/只,然后再 禁食4h,连续接种10d.对照组用等量的布氏肉汤 灌喂.距最后一次接种H.pylori的10,25,45,55, 65周分别处死感染动物10只,正中开腹取出全胃, 肉眼观察胃粘膜改变.取胃粘膜组织固定于含0.1 ~DEPC的40mg/L多聚甲醛,将固定的标本沿胃 的纵轴连续切成rnrn大小的组织条块,石蜡包埋, 制成3um-4pm的连续切片用于:HE染色观察组织 病理学改变:特染用于H.pylori判定:原位凋亡细 胞标记及原位杂交方法观察胃上皮细胞凋亡的变化 二,病理改变的判定标准 胃粘膜病理组织学判定标准参照文献【l全国 慢性胃炎研讨会共识意见和胃及十二指肠粘膜活检 病理制定.所有组织切片由一位病理医生进行病变 诊断及病变程度鉴定,后由专人采取盲法阅片. 三,细胞凋亡原位检测 (一)方法 参照试剂盒说明书进行. .. 32..现代消化及介入诊疗2002年l2月第7卷第4期 (--)结果判定 细胞核中有紫蓝色颗粒者为阳性细胞,即凋亡 细胞.计数方法:每个标本的切片在高倍镜(X400) 下随机驭5个视野,每个视野计数100个以上胃小 凹有核细胞中的凋亡细胞数,换算成凋亡细胞标记 指数LI(%)=凋亡细胞数/计数细胞数. 四,原位杂交检测 (一)检测方法 参照试剂盒说明书进行 (--)检测结果判定 阳性细胞胞浆着巨呈棕黄色.每张切片均观察 胃窦部粘膜染色情况,从中选择5个有代表性的区 域,根据染色反应的深度及阳性细胞的数量对染色 结果分级【3—1.染色深度以多数细胞的呈色反应为 准,浅黄色计为1分,棕色计为2分,深棕色计为 3分,不着色计为0分.在高倍视野下(x4oo)阳性 细胞数<10个计为1分,阳性细胞数lO个”30个 计为2分,阳性细胞数>30个计为3分.并根据这 两项指标的积分数之和将染色结果分为四级:<2为 (?),2=(+),3—4:(++),?5=(+抖).以阳性分级(十) 以上为阳性. 五,统计学处理 用SPSS统计软件进行数据处理,率的比较用 Chi--Square检验,等级资料用非参数检验:计量 资料数据用均数?标准差表示,满足正态分布时行 方差分析,不满足正态分布时用非参数检验,P<0.05 认为有显着性差异. 结果 一 ,原位细胞凋亡检测结果 凋亡细胞的胞核呈紫蓝色,核固缩成圆形,有 的不规则,染色质聚集成块,分布在核边缘,有的 形成半月状或环状,阳性信号局限在胞核内,个别 细胞可见凋亡小体,结果详见表l, 表1.胃窦部原位细胞凋亡指数的表达 级别动物数(只)细胞凋亡LI(%) —百鬲————广————一 l0周78.82+1.28” 25周1011.90+_2.33mo 45周106.151-0.83uaa 55周102.73+0.67nAA 65周100.88+0.27”nAo .P<0.05Vs0周,0P<O.05Vs10周Ap<o.05.Vs25周? P<0.05Vs45周oP<0.05Vs55周 二,FAS及FASL原位杂交检测结果 FAS及FASLrnRNA的阳性信号定位于细胞 质,阳性细胞呈散在分布或簇状分布.结果详见表 2. 表2.胃窦部FASmiLNA及FASLmRNA的表达 FASmRNA总体的秩和检验P=0.Ill;总体率的比较:X-L~9.933,P--0.077 FASmRNA总体的秩和检验P=0.018;总体率的比较:X~-12.9l9,P=0.024 两两比较:bvsaP=0.001,其余比较均P>O.005 讨论 胃粘膜在有害因素作用下产生损伤,粘膜细胞 分裂,增生以修复损伤,伴随炎症细胞的浸润,表 观为胃粘膜的炎症.如损伤修复,胃粘膜恢复正常, 若损伤不能修复,可启动细胞凋亡,受损细胞的凋 亡对于清除具有遗传缺陷的细胞具有重要意义,但 胃腺体尤其是胃腺颈部干细胞的凋亡则可引起粘膜 萎缩,腺体消失,表现为萎缩性胃炎,有害因素继 续作用,部分胃粘膜细胞可因某种原因逃避凋亡, 细胞寿命得以延长,增加了这些细胞进一步受损及 向恶性转化的机会. 本实验发观,接种H.pylori后25周内能引起胃 窦粘膜上皮细胞凋亡增加,随着感染时间的延长, 炎症的加重,凋亡细胞指数呈逐渐增加的趋势: H.pylori感染45周时,与25周时相比,胃窦粘膜 上皮细胞凋亡指数呈逐渐递减的趋势,65周时甚至 明显低于正常值.提示H.pylon定植在一定时间范 围内可引起胃窦粘膜上皮细胞凋亡增加,但其阼为 有害因素持续存在时,部分胃粘膜细胞可因某种原 因逃避凋亡,细胞寿命得以延长,增加了这些细胞 进一步受损及向恶性转化的机会,使得胃粘膜出现 不典型增生等胃癌前病变,并可能进一步向癌肿发 现代消化及介入诊疗2002年l2月第7卷第4期.33? 展,但其具体机制尚不明了. Fas(ApIC,D95)是细胞表面的蛋白受体分 子,分布于多种组织细胞,少量以可溶性形式存在 血浆中.细胞表面Fas通过与其天然配体FasL结合 诱导细胞凋亡,对于细胞的自稳和疾病的发生具有 重要作用.Fas与FasL结合是Fas在体内发挥作用 的唯一途径,FasL阳性的细胞毒T细胞与表达Fas 的靶细胞接触,触发靶细胞发生凋亡,从而发挥作 用【. 本研究发现,FasmRNA与FasLmRNA原位 杂交在正常胃窦粘膜未见明确的阳性信号,分析其 原因可能是由于FasmRNA与FasLmRNA的拷贝 数较低,达不到原位杂交的可检测水平.H.pylori 定植于胃窦粘膜,随着感染时间的延长,炎症的加 重,FasmRNA与FasLmRNA的阳性表达率及强 度均有递增的趋势.提示两者在H.pylori感染蒙古 沙土鼠由正常胃窦粘膜向不典型增生进展过程中发 挥作用,Fas/FasL的异常表达可能是胃窦粘膜上 皮细胞凋亡异常的重要原因. 不典型增生在胃癌的多阶段发生甲有重要意 义,是癌发生过程中的一个重要阶段.不典型增生 在形态学上虽难以认为是癌,但在基因水平上已 显示出癌变的特,任【酣,我们推断许多表达FasL的不 典型增生细胞能诱导浸润其中的表达Fas的T淋巴 细胞凋亡,逃避免疫效应细胞的杀伤和攻击,使不 典型增生细胞得以生存,并随病变进展而可能进一 步发展成癌肿,提示FasL的异常表达可能与胃上 皮细胞的癌变进程有一定关系. 本研究为探索H.pylori致正常胃粘膜出观不典 型增生等胃癌前病变的可能机制提供了新的信息和 依据,提示我们可在临床及动物实验中,进一步观 察在早期及进展期胃癌中H.pylori对胃上皮细胞增 殖凋亡的影响及与胃癌预后的关系,以期进一步明 确H.pylori在胃癌发生中的作用和地位. 参考文献 I.胃及十二指肠粘膜活检病理.全国胃癌防治研究协作组病理 组编着.辽宁人民出版社,I98I;I33.. 2.全国慢性胃炎研讨会共识意见.中华医学会消化病学分会. 胃肠病学,2000;5(2):77.79. 3.刘毅,陈壁,胡大海.贾赤字.深II烧伤创面愈合过程中 EGF/EGFR的表达.第四军医大学学报,1999:20(5): 457.459. 4.王江,倪灿荣.p53.rag,c.erbB.2癌基因产物在大肠癌和 大肠息肉中的表达.中华并不是学杂志,I994i23(2):97.99. 5.NagataS,GolsteinP.TheFasdeathfactor.Science.1995;267- l449.I456. 6.胡祥,刘革,毕伟,安伟德,吴功侃.胃癌多阶段发生与异 型增生关联的研究.中华消化杂志,2002;20:134.135. 幽门螺杆菌感染与小儿复发性腹痛的相关性研究 蒋予吴建维 【摘要】目的研究幽门螺杆菌感染与小儿复发性腹痛的相关性.方法采用,3-C.尿素 呼气试验(.3-c?UBT)捡测6O例健康儿童和187例复发性腹痛(RAP)儿童的幽门螺杆菌感染率,观 察幽门螺杆菌根除后RAP患儿的腹痛缓解率,并对RAP儿童在性别,年龄,病程,腹痛方式等 方面进行比较.结果RAP儿童和对照组的幽门螺杆菌感染的阳性率分别为3I.4%,15%,两 组比较有显着差异(p<0.05),幽门螺杆菌阳性的RAP儿童进行抗幽门螺杆菌治疗后,幽门螺杆菌 己根除和未根除的腹痛缓解率分别为78.5%,37.5%,两组比较有显着差异(p<O.05).在3-5岁, 6-9岁,9-12岁3个年龄组的幽门螺杆菌感染率分别为42%,32%,32%,三组比较无显着差异 (p>o.05).幽门螺杆菌感染与RAP儿童的性别,平均年龄,病程及腹痛方式之间进行比较,亦无 显着差异(p>o.05).结论幽门螺杆菌感染与复发性腹痛有密切的相关性,可能为复发性腹痛的 作者单位:518105广东深圳市松岗人民医院 ?论着?