清开灵滴丸中猪去氧胆酸HPLC含量测定方法

清开灵滴丸中猪去氧胆酸HPLC含量测定方法 清开灵滴丸中猪去氧胆酸HPLC含量测定 方法 哈尔滨医药2008年第28卷第期 1原因 1.1采血器具不合格:真空采血管内负压不够,使采血量不 足(凝血功能2.7ml,血常规1.8m1).而抗凝管的要求是非 常严格的,多一点即可出现标本凝血;少一点即导致化验结 果不实.如果管内负压过大,会使血液猛然射入真空管内, 血液间冲撞而造成血球破坏,发生机械性溶血. 1.2未能正确选择血管:如在肢体末端或血管充盈不好的 情况下不能够采集足够的血量或采出的是混有气泡的血液, 都会直接影响标本检测结果. 1.3采集后处理措施不当:采集后标本味立即摇匀致凝血 或摇动方法不正确致溶血. 1.4采集方法不正确:使用注射器采血,操作方法不正确导 致采集血量出现误差. 2预防 2.1认真选择采血器具:采血前先检查器具有无破损及是 否在有效期内. ? 45? 2.2合理选择血管:尽量选择粗直充盈有弹性的血管,如肘 正中静脉. 2.3正确处理血标本:采血后立即摇匀.方法是:将注入血 标本的抗凝管放在两掌心间,管帽向上,倾斜45.,来回搓滚 两次即可.不可用力摇晃,以免人为造成血球破坏而发生溶 血. 2.4准确采集血量:如用一次性注射器采血,采集完毕应用 左手持试管,拇指置于所需刻度上,举试管使所需刻度与视 平线平行,右手持取下针头的注射器,将注射器乳头贴近管 壁缓缓注入至所需刻度.刻度不应低于视平线,以免造成假 象. 3讨论 通过采用以上方法,有效地杜绝了上述问题的发生,保 证了检验结果的准确性,及时为治疗提供正确依据,减少了 患者的痛苦,和谐护患关系,增加了患者的满意度. 收稿日期:2008—05—09 清开灵滴丸中猪去氧胆酸HPLC含量测定方法 高敏 (黑龙江省泰格药业股份有限公司,黑龙江哈尔滨150778) [中图分类号]R932[文献标识码]B 文章编码:1001—8131(2008)04—0045—02 清开灵滴丸是由古方安宫牛黄丸方通过拆方改制而成. 近年来,由于蒸发光检测器(ELSD)的出现,极大地扩展了检 测范围,可以用于复杂基质下猪去氧胆酸的测定.本文建立 了清开灵滴丸中猪去氧胆酸HPLC含量测定方法. 1仪器与试剂 1.1仪器:高效液相色谱仪HITACHI(AlheehELSD2000检 测器). 1.2试剂:乙腈,甲醇(Fisher公司,色谱纯),甲酸(北京化 学试剂公司,分析纯),醋酸乙酯(北京益利精细化学品有限 公司),纯化水(北京康乃克药业公司). 1.3对照品:猪去氧胆酸对照品(日本进口). 1.4样品:清开灵滴丸(市售样品三批,包头中药有限责任 公司生产;规格:每10丸重0.35g). 2液相色谱条件:色谱柱:PhenomenexLuna反相C18色谱 柱(250mm×4.6mm);流动相:0.1%甲酸一甲醇一乙腈(25: 60:15);流速:1.0ml/min. 3样品制备 3.1供试品溶液制备:取清开灵滴丸粉末样品0.35g,精密 称定,置于三角烧瓶中,加水10ml超声处理(功率250W,频 率25kHz,下同)2rain,加3滴6M盐酸溶液,超声处理3min, 加入50ml醋酸乙酯超声处理1h,放至室温,萃取,分别再用 20ml,20ml,20ml醋酸乙酯萃取3次,合并醋酸乙酯萃取液, 蒸干,甲醇溶解,定量移至10ml的量瓶中,稀释至刻度,摇 匀,作为供试品溶液. 3.2对照品溶液制备:取猪去氧胆酸对照品约5mg,精密称 学科分类代码:360.40 定,加甲醇溶解,定容于10ml量瓶中,作为对照品溶液. 3.3测定法:取对照品溶液10l,151a,1和供试品溶液10 注入液相色谱仪,按外标二点法计算即得. 4色谱条件的选择 4.1色谱柱的选择:参照文献确定色谱柱为Phenomenex Luna反相Ct8色谱柱(250×4.6ram),通过试验,样品溶液 中的去氧胆酸,猪去氧胆酸和胆酸能较好的实现分离. 4.2流动相的选择:通过等度洗脱[0.1%甲酸一甲醇一乙 腈(25:60:15)流速1.0ml/min,进样量10]试验,样品溶液 中的去氧胆酸,猪去氧胆酸和胆酸也能较好的实现分离,同 时缩短了分析时间,故确定流动相为0.1%甲酸一甲醇一乙 腈(25:60:15). 4.3漂移管的温度和气体流速的选择:通过试验确定漂移 管温度115~C,雾化气体为空气,流速为3.0IMmin,样品溶液 中的去氧胆酸,猪去氧胆酸和胆酸能较好的实现分离. 5HPLC法测定样品中猪去氧胆酸含量的方法学研究 5.1阴性干扰试验:按清开灵滴丸制备过程制备,不加入猪 去氧胆酸原料,后再按照供试品溶液的制备方法进行制备, 按照高效液相色谱法分别进样对照品溶液,缺味样品溶液和 供试品溶液各10,结果无干扰. 5.2系统适应性试验:对照品溶液(0.5mg,/m1),进样10, 确定理论踏板数13466. 5.3最低检测限:对照品溶液(0.5mg/m1),进样1,信噪 比为3:1,确定最低检测限为0.5g. ? 46?哈尔滨医药2008年第28鲞箜 如何制作一张合格优质的液基细胞涂片 薛苏华 (江苏省无锡市中西医结合医院,江苏无锡214041) [中图分类号]R446.8[文献标识码]B学科分类代码:320.116 文章编码:1001—8131(2008)04—0046—01 子宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤.子宫颈细胞学检查 在子宫颈癌的防治上起着十分重要作用.液基细胞学涂片 质量好坏是保证诊断准确有相当大的关系.一张合格优质 的液基细胞涂片是细胞数量估计至少需要5000个保存完整 和形态清晰的鳞状细胞.细胞涂片背景干净,没有黏液或及 少有血液,细胞碎屑和过多炎细胞.细胞单层平铺在玻片 上,几乎无重叠.如何做到符合以上要求,在多年实践工作 中体会如下. l材料 选自妇科门诊和住院病例.液基细胞标本采集及处理: 采用颈管刷收集宫颈外口和颈管的脱落细胞,将刷头直接插 入装有液基细胞处理试剂的瓶中待检,这样几乎保留了取样 器上的所有的细胞. 2方法 2.1先将送检固定后标本登记编号. 2.2标本放在IKAVORTEXGENIUS3振荡仪上振荡l0分 钟,目的使颈管刷上收集的细胞全部洗人瓶内. 2.3将编号的试管内分别加入细胞清洁液4ml,振荡后的 标本倒回对应试管中,然后将试管放振荡仪振荡l0分钟. 经过AnKeTDL一40B离心机内,转速2500r/min,离心10分 钟,离心时等量灌注,对称放置,盖好盖门. 2.4离心后取出试管,去掉液体,留下沉淀物,观察离心后 的细胞团大小.如果细胞团是200—300ul则加500ul的细 胞基液:细胞团<200ul或>300ul可根据l,加入相应的 细胞基液.继续放在IKAVORTEXGENIUS3振荡仪上振荡 l0分钟,用加样器吸取50ul后在利普载玻片上涂片.经过 振荡离心等技术,即可使刮取物中的粘液变稀薄,经清洗后 易于清除,分散粘连细胞团而使细胞片背景干净,没有或极 少混有血液,细胞碎屑和过多炎细胞,细胞少有重叠现象. 使细胞单层平铺于利普玻片上. 表1细胞基质稀释表 2.5巴氏染色:清晰的显示细胞结构,特别是核染色质染色 更清楚,可以反映出细胞在炎症刺激下和癌变后的形态变化. 胞核呈蓝色,核仁呈红色,底层及表层网状细胞胞浆均染成蓝 绿色,表层固缩核细胞胞浆染成淡红色或蓝绿色,红细胞呈鲜 红或橘红色. 3讨论 传统诊断CIN的巴氏染色技术灵敏度较差,假阴性率高 达20%,近年来有被淘汰的趋势.液基细胞学改变了常规的 操作方法,将宫颈摄取所有细胞都固定起来.这种方法克服 了传统方法所难以避免的问题.如细胞成团,重叠,分布不 均,背景不清楚及一些有诊断价值细胞随宫颈刮板而弃掉等, 可明显提高玻片上单位面积内的细胞数量.液基细胞学检查 可以减少巴氏染色60%假阴性率.液基细胞学检查为无创 伤性检查,痛苦小,可以在综合性医院及普查人群中推广应 用.液基细胞学技术可以有效提高官颈癌普查的诊断水平, 从而有效防止和减少医疗纠纷的发生. 参考文献 [1]刘继英,龚云辉,田俊.细胞离心涂片机制作液基细胞筛查宫颈病 变对比分析与.实用医学杂志,2007,23(2). 收稿日期:20o8一o4—23 6讨论 HPLC测定选择了几种流动相体系,通过比较分离情 况,确定了上述体系,同时采用等梯度洗脱方式,各物质能得 到较好的分离,而且满足定量的要求. 在HPLC/UV方法中,由于近紫外区测定,色谱基线漂 移很大,不易作定量用,而用HPLC/ELSD测定在上述的漂 移管温度和气流下,有较为稳定的基线,干扰小,适合用于定 量分析. 通过已上市三批样品的含测结果确定本品的猪去氧胆 酸含量不得少于0.50mg/丸,将此方法定人质量较为合 理. 参考文献 [1]曹进,徐燕,王义明,等.清开灵注射液中三种胆酸含量测定方法 比较.中成药,2003,25(9):705—708. 收稿日期:2008—04—15