吖啶橙溴化乙锭双荧光染色试剂盒

吖啶橙溴化乙锭双荧光染色试剂盒 北京吉美生物技术有限公司 吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色试剂盒 产品简介: 细胞凋亡(Apoptosis)的检测方法有形态学、生物化学、DNA片段化检测方法以及TUNEL等标记片段化DNA方法，但从细胞凋亡概念产生的历史及准确性方面考虑，使用显微镜进行的形态学观察也是很重要的。细胞死亡的检测可以通过荧光色素染色区分活细胞、死细胞，测定细胞代细活性和形态学观察。这些方法都是利用细胞凋亡这种情况进行测定的，因而不一定反映实际情况。MTT法是测定线粒体中特有酶的活性，反映细胞数目的变化，其结果与细胞死亡的数目未必完全一致。 吖啶橙(Acridine Orange,AO)属于三环杂芳香燃料，可以标记DNA、RNA，属于异染性荧光染料。AO常用于细胞内DNA和RNA进行检测。AO与核酸结合方式主要有:1、插入性结合，AO嵌入核酸双链的碱基对之间，这种结合方式主要为AO与DNA的结合，其荧光发射峰为530nm，激发后呈绿色荧光;2、静电吸引，带正电荷的AO与单链核酸的磷酸根(带负电荷)产生静电间的吸引结合，这种结合方式主要为AO与RNA的结合，其荧光发射峰为640 nm，激发后呈红色荧光，少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光。因此，吖啶橙嵌合到双链DNA分子中显绿色，与DNA单链或RNA结合时发桔黄色或橙红色荧光。 溴化乙锭(Ethidium Bromide,EB)嵌合到双链DNA或RNA的碱基对中，无碱基特异性，发红色荧光。吖啶橙可透过活细胞膜， EB不能通过与活细胞具有相同通透性的细胞膜。 产品组成: 编号 JC2265 storage 名称 100T 。 200μl 4C避光 试剂(A):AO Solution 200μl RT 试剂(B): EB Solution 。 ml 4C避光 50试剂(C):AO/EB Dilution Buffer 使用说明 1份 自备材料: 1、 荧光显微镜 2、 PBS 3、 细胞计数板 4、 载玻片、盖玻片 操作步骤(仅供参考): 1、 AO/EB工作液的配制:取试剂(A)、试剂(B)、试剂(C)，按照试剂(A):试剂 (B):试剂(C)=1:1:8的比例稀释成AO/EB工作液。 2、 每份细胞样品中加入AO/EB工作液2μl，混合均匀。 3、 低速离心:500g离心5min，弃上清。 64、 用AO/EB Dilution Buffer重悬细胞，细胞计数，将细胞密度调整为0.5~5×10个/ml。 5、 每25μl细胞悬液中，加入1μl AO/EB工作液，充分混匀。 6、 取洁净载玻片，滴加上5μl细胞悬液，轻轻盖上盖玻片。 7、 在荧光显微镜B域进行观察。 北京吉美生物技术有限公司 染色结果: 活细胞 绿色荧光 死细胞 橙色荧光 注意事项: 1、 用能通过活细胞膜与DNA结合后蓝色荧光的Hoechist 33342和只能通过死细胞 与DNA结合后发红色荧光的碘化吡啶(propidium iodide,PI)对细胞进行双染的 方法也比较常用。 2、 如有低温离心机进行离心效果更佳。 3、 操作过程中应注意减少试剂(A)、试剂(B)暴露于强光下的时间。 4、 EB solution有一定毒性，请小心操作。 5、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 有效期:6个月有效。 相关产品: 产品编号 产品名称 JC2008 磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁) JC2080 胰蛋白酶-EDTA溶液(0.25%:0.02%) JC2247 DAPI染色液(5ug/ml) JC2257 Hoechst33342/PI细胞凋亡染色试剂盒 JC2279 台盼蓝染色液(0.4%) JD3019 Pollak三色染色液 JN5118 SSC缓冲液(20×,pH7.0) JT9111 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)