【doc】细胞角蛋白在正常皮肤组织中的表达

【doc】细胞角蛋白在正常皮肤组织中的达 细胞角蛋白在正常皮肤组织中的表达 中q-rt,~皮妖科学熏蠢皇!!皇!!!堡箜鲞塑塑.? ? 论着? 细胞角蛋白在正常皮肤组织中的表达 孙莉,李红,刘淑梅,徐志秀 【摘要】目的观察7种细胞角蛋白(cytokeratins,CK)在正常皮肤组织的表达,并探讨其意义.方法应用免疫组 织化学S—P法对20例不同部位的正常皮肤组织进行CK7(K72.2),CK8(C一51),CK10(DE—K10),CK14(LL002), CK17(E3),CK18(Dcl0),CK19(KS19.1)标记,观察不同细胞角蛋白的表达情况.结果在正常皮肤上皮组织中,7种细 胞角蛋白的表达和分布有所不同.结论有选择地检测一组cK的联合表达,有助于各种皮肤上皮组织的识别. 【关键词】细胞角蛋白;皮肤;免疫组织化学 【中图分类号】R392.31;R751【文献标识码】A【文章编号】1681—4215(2005)01—0001—03 Expressionofcytokeratinsinnormalskintissue SUNLi,LIHong,LIUShu—mei,eta1.DepartmentofDermatology,Shengli OilfieldCentralHospital,Dongying 257034,China 【Abstract】 objectiveToobserveimmunohistochemicalexpressionofsevencytokeratinsonskinandtoas— sessitsdiagnosticvalue.MethodsImmunohistochemicalmarkers,includingCK7(K72.2),CK8(C一51), CK10(DE一 1(10),CK14(LL002),CK17(E3),CK18(DC10)andCK19(KS19.1)wereusedbyS—Pimmu— nohistochemicalstainingmethods.Theexpressionofcytokeratinswasobserved.ResultsTheexpressionsand distributedpatternsof7cytokeratinsweredifferentiatedOnnormalskinepithelialtissuesof20cases.Conclusion Comprehensiveanalysisofaselectivecytokeratingroup,canassistdistinguishedofvariousskinepithelialtis— SL1es. 【Keywords】cytokeratins;skin;immunohistoehemistry 哺乳动物的细胞质含有复杂的细胞骨架蛋白,包括微 丝,微管和中间丝.中间丝有细胞角蛋白I,细胞角蛋白 ?,结蛋白,波形蛋白,胶质纤维酸性蛋白,神经纤维等6 种.上皮细胞胞质中的骨架蛋白除微丝(肌动蛋白),微管 蛋白外,主要是细胞角蛋白(cytokeratins,CK).CK是上皮 细胞的特征性标记物,由生物化学和免疫学方法根据CK 分子量的不同,分为20种,是一个庞大复杂的家族.不同 类型的上皮细胞和同类型上皮细胞的不同分化阶段,表达 不同的CK.当上皮组织发生瘤变甚至癌变后,仍然表达与 正常组织基本相同的CK类型.皮肤的上皮性肿瘤,包括 表皮和皮肤附属器肿瘤,类型繁多,组织形态复杂,有时鉴 别诊断十分困难.研究不同CK在正常皮肤组织的表达, 可能对表皮和皮肤附属器肿瘤的诊断具有一定价值. 1材料与方法 1.1材料所有正常皮肤的研究标本均来自胜利油田中 心医院2003,2004年收检的病例,包括5例乳腺癌根治手 术切除标本中远离肿瘤的胸部皮肤,5例直肠癌手术切除 标本远离肿瘤的肛旁皮肤和l0例不同部位的色素痣切除 标本的切缘皮肤. 1,2试剂第一抗体为7种不同的细胞角蛋白单克隆抗 体,包括CK7(K72,2),CK8(C一51),CK10(DE—K10), CK14(LL002),CK17(E3),CK18(DC10),CK19(KS19,1), 均为工作液;免疫组织化学检测系统采用过氧化物酶标记 的即用型UltraSensitlveS—P试剂盒;显色试剂为高敏感 作者单位:257034山东东营,胜利油田中心医院皮肤科(检验 科,’病理科) 二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒.以上试剂购自福州迈 新生物技术开发有限公司. 1.3方法复查胜利油田中心医院2001,2004年收检的 所有皮肤上皮性肿瘤病例的存档切片,从中选取所有皮肤 附属器肿瘤及部分皮肤癌病例为研究对象.对存档蜡块重 新切片,进行免疫组织化学染色.抗原修复,CK7标记皮肤 附属器肿瘤采用胰酶消化法,胰酶浓缩液和稀释液1:3混 匀,滴片后37?孵育15min;CK8,CK10,CK14,CK17,CK18, CK19等6种抗体染色标记的切片,采用柠檬酸缓冲液高温 高压法,高压锅内置pH6.0的0.01mmol/L柠檬酸缓冲液, 加热至沸腾,放入切片,密闭高压锅继续加热,喷汽后2mln 停止.S—P法免疫组化标记.DAB显色.以PBS代替一 抗做空白对照. 1.4结果判定所有免疫组化染色结果在光镜下进行观 察和评判.7种CK阳性表达位置均为细胞质.参照许良 中等…的方法,综合考虑切片中阳性细胞占所观察同类细 胞数的百分比和阳性细胞着色强度两项标准,半定量判断 结果.根据显色程度判断阳性强度,分为4级,无着色为阴 性,记0分;浅黄色为弱阳性,记1分;棕黄色为中度阳性, 记2分;棕褐色为强阳性,记3分.根据阳性细胞数量在观 察的同类细胞中所占比例,分为4类,即阳性细胞?2%为 “个别”,记0分;阳性细胞数3%,20%为”少量”,记1分; 21%,60%为”中量”,记2分;>60%为”大量”,记3分. 综合评价值由两类记分分值的乘积表示,0,3分为(一),4 分为(+),6分为(++),9分为(+++). 1.5统计学方法计数资料使用PSMS3.1医学统计学软 件包进行处理,进行×检验,数值较小者使用确切概率法 ? 2?主望!废封学杂志JournalofChineseModernDermatology2005年第2卷第1期 检验,P<0.05为有显着性意义的标准. 2结果 20例正常成人皮肤组织标本中不同CK的表达和分布 见表1.不同CK在皮肤组织中的表达强度及阳性细胞数 量的综合半定量评价见表2. 表17种CK在20例正常皮肤组织中的表达情况(阳性例数/可观察例数) 0.05 表27种CK在正常皮肤组织中的不同表达(半定量判断) 皮肤组织中表达CK的成分有表皮及附属器,附属器 包括毛发,皮脂腺,汗腺,大汗腺等结构.我们的观察显示. 表皮基底细胞不表达CKIO,棘细胞层多数不表达CK8,棘 细胞层和颗粒层不表达CK19,这些表达与表皮其他成分比 中华现代皮肤科学杂志Journ旦竺!竺里竺!!笙笙鲞笙塑 较,差异有显着性;毛囊的内毛根鞘多数不表达CK8,外毛 根鞘多数不表达CK10,与内毛根鞘比较,差异有显着性;皮 脂腺不表达CK8,CK18,与汗腺比较,差异有显着性;汗腺 不表达CK10,与皮脂腺,表皮棘细胞,颗粒层细胞比较,差 异有显着性. 3讨论 作为上皮细胞特征性标记物的CK,根据分子量的不 同.分为20种.CK可进一步分为A(acidic)和B(basic)二 大亚族或称为l型和?型.I型CK等电点偏酸,相对分 子质量较低,基因定位于染色体17q,包括CK9,CK20.? 型CK等电点偏碱,相对分子质量较高,基因定位于染色体 12q,包括CK1,CK8.一种偏酸性的I型细胞角蛋白和一 种偏碱性的?型细胞角蛋白成对地表达于某种上皮细胞. 一 定种类的上皮细胞和具有向该上皮细胞分化特点的肿瘤 细胞中的CK,按一定规律构成中间丝,其组合方式即该种 上皮的CK组型.按CK组型不同可把上皮细胞分为单层 上皮,复层扁平上皮和其他上皮(包括移行上皮,间皮,某 些腺上皮)三大类.所有CK都由中间的螺旋结构和N一 端,C一端组成.中间x螺旋结构由310,350个氨基酸构 成,其杆状部分在除CK20外的所有CK中具有很高的同源 性.2条单链的CK形成平行的绳状二聚体,2个二聚体形 成四聚体,四聚体首尾结合形成原纤维,互相缠绕形成原纤 维丝,原纤维丝互相缠绕形成10Bill的CK纤维,和其他辅 助蛋白一起维护上皮细胞的形态完整性’. 皮肤包括多种结构,从基底层到角质层CK分子量逐 渐增加表皮的基底细胞胞质中含有分子量46000, 58000的角蛋白张力丝,直径约5Bin,走向规则,常与表皮 表面垂直.棘层细胞胞质中角蛋白较基底细胞丰富,分子 量56000,65000.颗粒层细胞含丰富角蛋白束,角蛋白丝 分子量63000,67000.角质层细胞胞质中有大量8,10nin 直径的角蛋白丝,彼此平行排列,与表皮平面平行.皮肤附 属器包括毛发,皮脂腺,汗腺,大汗腺等结构.文献介绍,毛 球的干细胞表达CK15,毛囊的内毛根鞘表达CK1, CK10’,外毛根鞘表达CK8/18,其内层表达CK6,CK16, CK17,外层表达CK5/8,CK14,CK15;皮脂腺表达 CK5,CK14;汗腺也可表达CK5/8,CK5,CK14.我们的实验 结果也证实了以上部分观察.另外,我们的实验结果还显 示毛球干细胞,内毛根鞘,外毛根鞘表达CK14,内毛根鞘表 达CK7,外毛根鞘表达CK19,皮脂腺表达CK7,CK10, CK17,CK19,汗腺表达CK7,CK17,CK18,CK19.表明皮肤 附属器细胞的CK表达谱较文献所载更宽,相互间CK表达 谱的重叠较多.这种情况是因为皮肤附属器均具有相同的 组织起源,均为表皮的衍生物,只是向不同方向分化所造成 的 ? 3? CK标记在判断结果时,与其他抗体阳性判断的标准有 所区别’,阳性细胞必须在10%以上,有的要求50%以 上才能认为阳性.我们应用半定量积分法综合评价免疫标 记结果.结果显示CK标记有助于对皮肤不同上皮性结构 的鉴别.目前,肿瘤的鉴别诊断中常采用不同CK的联合 表达.我们观察结果提示,表皮棘层细胞CK10+/ CK18+/CKI9一,基底细胞CK10一/CKI8一/CKI9;表皮 鳞状细胞多为CK8+/CK10+/CK18+,而毛发结构多为 CK8一/CK10一/CK18一;鳞状细胞CK18+/CK19一,皮脂 腺结构CK18一/CK19+;鳞状细胞CK8一/CK19一,汗腺结 构CK8+/CK19+;汗腺结构CK18+/CK10一,皮脂腺结构 CK18一/CK10+;我们认为,有选择地检测一组CK的联合 表达,有助于皮肤不同上皮结构的鉴别,也町能有助于皮肤 上皮性肿瘤的诊断和鉴别诊断.当然,确定一组CK联合 表达的意义,还需要观察大量皮肤标本的CK表达情况. 【参考文献】 1许良中,杨文涛.免疫组织化学反应结果的判断标准中国癌症 杂志,1996,6(4):229—231. 2ChuPG,WeissLM.Keratinexpressioninhumantissuesandneo- plasms.Histopathology,2002,40(5):403—439. 3初培国.细胞角蛋白染色在肿瘤诊断中的应用中华病理学杂 志,2004,33(3):273—276. 4LiuY.LyleS.YangZ.eta1.Keratin15promotertargetsputative epithelialstemcellsinthehairfolliclebulgeJInvestDermatol, 2003,121(5):963—968 5YamamotoO,HamadaT,DoiY,etalImmun0hist0chemicaIand ultrastructuralobservationsofdesmoplastietch0pitheIinmawitha specialreferencetoamorphologicalcomparisonwithnormalapo— crineacrosyringeum.JCutanPathol,2002,29(1):15—26. 6GhoCG,BraunJE,TilliCM,eta1.Humanfollicularstemcells: theirpresenceinpluckedhairandfollicularceilcultureBrJDer— matol,2004,150(5):860—868 7MisagoN.NarisawaYTrieholemmalcarcinomaincontinuitywith triehoblastomawithinnevussebaceus.AmJDermatopathol,2002, 24(2):149—155. 8Yamamoto0,DoiY.HamadaT,eta1Animmunohistoehemieal anduhrastructuralstudyof.yrjngocystaden0mapapilliferum.BrJ Dermatol,2002,147(5):936—945. 9JiangJ,UlbrightTM,YoungerC.cta1.Cytokeratin7andcytokeratin 2Oinprimaryurinarybladdercarcinomaandmatchedlymphnode metastasis.ArchPatholLabMed,2001,125(7):921—923. 10AminMB,TamboIiP,MerchantSH,eta1.Micropapillaryeompo— nentinlungadenocarcinoma:adistinctivehistologicfeaturewith possibleprognosticsignificance.AmJSurgPathol,2002,26(3): 358—364. (编辑:晓青)