肿瘤细胞培养方法简介

肿瘤细胞培养方法简介 一、机械刮除法 1(标记:镜下观察，用不脱色笔在培养瓶皿的背面圈下生长肿瘤细胞的部位。 2(刮除:弃掉培养液，把无菌胶刮伸入瓶皿中，肉眼或显微镜窥视下，刮除无标记空间。 3(用Hanks液冲洗一两次，洗除被刮掉的细胞。 4(注入培养液继续培养，如发现仍有成纤维细胞残留，可重复刮除至完全除掉为止。 二、反复帖壁法 1(待细胞生长达一定数量后，倒出旧培养液，用胰酶消化后，Hanks冲洗2次，加入不含血清的培养液，吹打制成细胞悬液。 2(取编号为A、B、C三个培养瓶。首先把悬液接种入A培养瓶中，置温箱中静止培养5,20分钟后，轻轻倾斜培养瓶，让液体集中瓶角后慢慢吸出全部培养液，再接种入B培养瓶中后，向A瓶中补充少许完全培养液置温箱中继续培养。 3(培养B瓶中细胞5,20分钟后，按处理A的方法，把培养液注入C培养瓶中，再向B瓶补加完全培养基。 三、消化排除法 1(先是用0.5,胰蛋白酶和0.02,EDTA(1:1)混合液漂洗培养基细胞一次，然后再换成新的混合继续消化，并在倒置显微镜下窥视和不时摇动培养瓶，到半数细胞脱落下来后，便立即停止消化。 2(把消化液吸入离心管中，离心去上清，吸入另瓶中，加培养液置温箱中培养，向原瓶内也补加新的培养液继续培养。用此法处理后，成纤维细胞比肿瘤细胞易先脱落，经过几次反复处理，可能把成纤维细胞除净。 四、胶原酶消化法 1(可用0.5mg/ml的胶原酶消化处理，边消化边在倒置显微镜下窥视，当发现成纤维细胞被除掉后，即终止消化。 2(用Hanks洗涤处理一次后，更换新培养液，继续培养，可获纯净肿瘤细胞。如成纤维细胞未被除净，可再次重复。