【doc】免疫磁珠法分离人外周血T淋巴细胞

【doc】免疫磁珠法分离人外周血T淋巴细胞 免疫磁珠法分离人外周血T淋巴细胞 ?16? 丁I嘴吃 第二军医大学学掇1997Febll81l 参考文献 1刘扬.吴孟超.钱光相等抗^AFPRLCAMcAb在棵鼠人肝 癌模型中敲凫显像与治疗.第二军医大学+1994;15(5)446 2GoldenbergDMIntroducttontothesecondconference…a diolmmunodetectionandradloimm~notherapyofcancer.Cancer Res.1990l50(supp1)778s 3PauwelsEKVatL-KcootteuhurghMJProspectsforradioim munoimagingandradioimmunotherapyinoncology?NuclMed Commu~.1988;?(11)l867 4GoldenbergDMtGoldeabergH,HigginbothamFEela1.Imaging ofprimaryandmetastaticlivercanceTwith.Imonocloaaland polyclonalant/bodiesagainstalphafetoproteia.JClinOneo1. 1987l5(11)'】827 第二军医大学1997Feb}18(1)l16 5Narkh~mN,RitaonA.James0口.Primaryhepatoeellularcar cinomalocalizedbyaradiolabelledmonoclonaIantibodyJHepa to1.1986l2(I)l25 6GoldenbergDM,KimEE.DelaudF口,.Clinicalstudies0nthe radioimmunodetectionoftIlnlofscontainingalphafetoprotein. Cancer,1980l45(10)l2500 7JainRK.PhysiologicalbarrierstOdeliveryofmonoelonalantibod iesandothermac~omoleculesintumorsCancerRes.199050 (Suppl3):814s 8VaughanAT,AndersonP.DykesPWeta1.Limitationstothe killingoftumorsusingradiolabelledantibodies.BrJRadio1. 1987#60f714)567 (1996—06一"收稿,1996—10—19髂回) (本文编辑刘跃) 免疫磁珠法分离人外周血T淋巴细胞尺l 牟贤龙郑茂方跃明 -_—,———, 为了深入研究T,B淋巴细胞的生物学特性和功能,常 需从淋巴细胞群体中分离出单一的T细胞或B细胞.以满 足实验要求我们根据T淋巴细胞瞳面,用高梯度磁 场,应用免疫磁球法分离外周血T淋巴细胞,分离效率高 1材料和 1.1材料包被羊抗鼠lgG免疫磁珠(挪威Dyna]公司产 品t型号M一450);鼠抗人CD3单克隆抗体(Sigma公司产 品);ABc试剂盘(Vector公司产品);人淋巴细胞分离液(上 簿试剂二厂产品);高梯度磁性细胞分离器(本实验室自制). 12细胞悬液制备人外周血用肝翥钠(10ygtm1)抗凝, 等量生理盐水稀释,在另一试管底部加入人淋巴细胞分离 液,由上方缓慢加入2倍量血液,2000×g水平离心40rain, 吸取淋巴细胞悬液,生理盐水冲洗并制备i×10/ml细胞悬 液5ml. i.3免疫磁珠分离细胞悬液4C孵育15rain,加鼠抗人 CD3单克隆抗体,4Jc孵育60rain,甩PBS冲洗,去上清液, 加入包被羊抗鼠IgG免疫磁珠,置4c孵育60rain,每l0 rain轻振荡1次,PBS冲洗并稀释.将细胞悬液注入填有不 锈锕毛的特制试管中,放入分离器进行分离纯化.在强磁场 作用下,结台磁球的细胞不能通过分离器,未结合磁珠的细 胞将顺利从分离器中流出. i.4T细胞的定性定量检测将分离所得的细胞,采用免 疫组织化学ABC法[1计数,并用台盼蓝染色检测活性 2结果 表皮细胞悬液制备后,测其细胞活性为(96.O?2.i); CD3一细胞百分率为(620士4.5);结合磁珠的细胞(61.5 士4.6).经免疫磁球分离后,镜检试管中细胞悬液,结合磁 珠的细胞数>99,CD3细胞百分率超过99,细胞活性 (95.0士3+1). 3讨论 免疫磁珠是包被有抗体(或抗原)的可磁化颗粒,与待测 样品中相应的抗原特异性结合,可作为免疫反应的载体,用' 于各种免疫检测与细胞分离.它与其他细胞分离技术比较, 具有操作简单,快速,样本量可大可小,易在无菌条件下操作' 并可获得高纯化率活性细胞等优点.被认为在细胞分离中有 良好的应用前景].' 免疫磁珠直径的大小将影响其与细胞结台的程度,磁场 强度的高低也影响纯化细胞的产率.但磁珠直径小则更需要' 高强度的磁场,才能提高分离效率.我们对以往实验进行总 结改进,采用新型的包被羊抗鼠IgG免疫磁珠,直径为4.5' ,表面光滑,大小一致,有利于细胞结台.车室自制的高梯 度磁性细胞分离器,试管腔中克填了不锈钢毛(1.5cm×0.6' cm,充填钢毛100g),钢毛在磁场作用下产生强大的高梯度 磁场,克服磁珠本身弱磁性问题,从而提高了分离效率.' 关键词免疫磁球;细胞分离iT淋巴细胞 中国图赍料分类法分类号R557.4' 参考文献 1倪灿荣.凫疫组织化学实验新技术皿应用.北京;北京科学拄求出 1Z9 版社,1993:128, 2绦从高.细胞免瘦学方法学的新进展.中华医学检验杂志.】993: 16(2):11? (1996—04一】6收稿,1996—09一"髂回) (本文编辑刘跃) 作者单位第二军医大学长海医院皮肤科,上海.2004船