X射线对新生儿脐血VEGF的影响

X射线对新生儿脐血VEGF的影响 52SUZHOUUNIVERSITYJOURNALOFMEDICALSCIENCE2007;27(I) X射线对新生儿脐血VEGF的影响 孙斌,杨占山 (I.苏州大学附属儿童医院新生儿科,江苏苏州215003;2.苏州大学放射医学与公共卫生学院,江苏苏州215123) 摘要:目的研究x射线对脐血细胞中血管内皮细胞生长因子(VEGF)的影响.方法使用不同剂量(0…24 8,16Gy)的x射线照射脐血.用逆转录多聚酶链反应(RT—PCR)法及定量PCR法研究照射后体外培养24h的脐血 细胞中的VEGFmRNA达水平.结果经2,4,8,16GyX射线照射后24h,脐血细胞中的VEGFmRNA表达水平 较正常对照组均显着升高,其中4.0GyX射线照射后24h的脐血VEGFmRNA表达水平升高最显着.结论不同 剂量x射线照射后,脐血细胞中VEGFmRNA表达增强,可能对细胞具有辐射防护作用. 关键词:X射线;脐血;血管内皮细胞生长因子 中图分类号:R8l1.5文献标识码:A文章编号:1673—0399(2007)01—0052—02 EffectofX-raysontheExpressionofVEGFinCordBloodofNeonate SUNBin,YANGZhan—shan (1.TheChildrenHospitalAffiliatedtoSuzhouUniversity,JiangsuSuzhou215003,China; 2.SchoolofRadiationMedicineandPublicHealth,SuzhouUniversity,JiangsuSuzhou,2151 23,China) Abstract:ObjectiveTostudytheeffectofX—raysonvascularendotheliagrowthfactor(VEGF) expressionincordblood.MethodsReversetranscriptasepolymerasechainreaction(RT—PCR)and quantitation—PCRwereusedintheexaming.ResultsThesignificantup—regulationofVEGFexpression inducedby2,4,8,16GyX—rayswerewitnessedincomparisonwiththatinthecontrolgroups,espe— ciallyelevatingmost24hafter4GyX—irradiation.ConclusionTheriseofVEGFmRNAafterirradi— ationsuggestesthatitmightbeplayaroleintheradiationprotectionofcells. Keywords:X—rays;cordblood;VEGF 血管内皮细胞生长因子(vascularendothelia growthfactor,VEGF)在调节内皮细胞功能,血管发 育,血管发生及血管通透性等方面具有重要的功 能n】.一般认为,哺乳动物血管的发生,发育在出生 后不久便停止.只有在受到损伤或有肿瘤发生的情 况下才有新的血管生成.本实验通过体外脐血照射 后,VEGF在体外培养的脐血细胞中表达的变化,分 析VEGF在辐射损伤后的机体修复中的作用. 1材料和方法 1.1脐血采集无菌条件下穿刺脐静脉采集37, 42周龄足月正常分娩的新生儿脐带血,体外EDTA 抗凝. 1.2照射条件采用Varian直线加速器6MVX 线照射,SSD(源皮距)100em,剂量分别为0,2,4,8, 16Gy,剂量率250cGy/min. 1.3RT—PCR引物设计采用GeneFisher软件设 计,由上海生工生物工程公司合成.序列顺序:vegf: f:5'一gcccactgaggagtccaaca一3'.r:5'一tcctatgtgctggcctt— ggt一3'.probe:5'一FAM—caccatgcagattatgcggatcaaacc— TAMRA一3';Abl:f=5'一tcctccagctgttatctggaaga一3',r:5' 一 actcagaccctgaggctcaaag一3',probe:5'一FAM—aagcccttc— agcggccagtagcat—TAMRA一3'. 1.4定量PCR按书分别进行RNA的抽提, 逆转(mRNA至cDNA),定量PCR.定量PCR仪由 MJ公司提供. 1.5统计学分析采用SPSS11.0统计软件对计 量资料进行统计分析,结果以土s表示,两组间比 收稿日期:2006—06—14作者简介:孙斌(1969一),男,江苏常熟人,副主任医师,在读 医学博士,研究方向为放射毒理及新生儿疾病. 苏州大学(医学版)2007;27(1)53 较采用t检验. 2结果 由表1可见,脐血经不同剂量x射线照射后24 h,其VEGFmRNA表达水平与正常对照组相比,均 明显升高(P<0.05).4GyX射线照射后24h的 脐血VEGFmRNA表达水平与其他剂量x射线照射 组相比显着升高(P<0.01);2,8,16Gy剂量x射 线照射后24h的脐血VEGFmRNA表达水平3组间 互相比较无明显差异(P<0.05). 表1不同剂量x射线对脐血VEGFmRNA表达的 影响(互?s) 与正常对照组相比,P<0.05,一P<0.O1;4GyX射 线照射组与其他剂量x射线照射组相比,P<0.01 3讨论 辐射损伤可由日常放射检查,肿瘤放疗,辐射事 故,核恐怖袭击及战时核爆炸等引起,其病变特征为 炎症反应减弱,细胞增殖受抑,局部缺血缺氧.若孕 妇受到辐射损伤,则胎儿势必受到影响.研究发现, VEGF在受精卵着床过程中发挥重要作用,并参与 整个妊娠期间胎盘生长过程中的血管形成,妊娠后 胎盘组织VEGFmRNA表达与胎盘VEGF水平均有 明显上升b】.整个孕期胎盘的合体滋养细胞和浸润 性绒毛滋养细胞均有VEGF表达,滋养细胞源性 VEGF以自分泌方式对滋养细胞的浸润,分化,代谢 起作用,以旁分泌方式促进胎盘床的血管形成和维 持胎盘血管的通透性b】.若胎儿受到辐射损伤,肯定 影响VEGF的表达,从而使胎儿的发育受到影响. 本研究证实,新生儿脐血经不同剂量x射线照 射后24h,其VEGFmRNA表达水平与正常对照组 相比,均明显升高(P<0.05或P<0.01).这说明 受到辐射损伤后VEGF能应激增加,从而发挥其调 控胎儿生长发育的作用,保护和减少胎儿受到的辐 射损伤,在一定程度上保证胎儿的正常生长发育. 4GyX射线照射后24h,脐血VEGFmRNA表 达水平与其他剂量x射线照射组相比显着升高(P <0.01),2,8,16Gy剂量x射线照射后24h的脐 血VEGFmRNA表达水平3组间互相比较无明显差 异.这可能与辐射的剂量依赖效应有关,当剂量达 到很大水平时,细胞发生了凋亡或死亡,从而使 VEGFmRNA表达水平反而下降,机体得不到应有 的保护.所以,当受到很大的辐射损伤时,机体受到 的损伤是不可逆的,很可怕的.胎儿的生长发育会 受到抑制,甚至死胎. 辐射对细胞,机体VEGF表达的影响机制可能 是:VEGF是辐射后血管增殖重要的调节因子,它在 促进血管内皮细胞增殖,抗凋亡及促使受辐射的组 织形成新生血管中起着重要的作用.体内研究表 明,VEGF和抗凋亡蛋白Bcl一2具有协同作用,使内 皮细胞免于凋亡.抑制VEGF受体可增加辐射对微 血管的破坏.表明VEGF对内皮细胞具有辐射防护 作用,增加机体对辐射的抗性.另外,研究表明,辐 射诱导的VEGFmRNA可以被金雀异黄素 (genistein)或蛋白激酶抑制剂H7完全阻断.表明辐 射影响VEGFmRNA的机制可能与触发Src磷酸激 酶和蛋白激酶c的通路也有关】. VEGF在细胞受到辐射后表达增高,且持续一 段时间,这可能与VEGF对血管内皮细胞的辐射防 护作用有关.因此,应用慢GF蛋白或基因重组治疗 可能是促进内皮细胞增殖,进而对其进行辐射防护 的有效方式,这将在放射性烧伤的治疗中具有广泛 的应用前景. 参考文献: 【1]KlagsbrumM,D'AmorePA.Vascularendothelialgrowth factoranditsreceptors[J].CytokineGrowthFactorRev, 1996,7(3):258—270. 【2]FerraraN,Davis-SmythT.Thebiologyofvascularendo— thelialgrowthfactor[J].EndocfinolRev,1997,18(1):4— 25. 【3]RegnauhTR,OrbusRJ,deVrijerB,eta1.Placental expressionofVEGF,P1GFandtheirreceptorsinamodelof placentalinsufficiency—intrauterinegrowthrestriction(PI- IUGR)【J].Placenta,2002,23(23):132—144. 【4]程淑,杨池荪,李诗兰.正常妊娠和妊高征胎盘中血 管内皮生长因子的表达及其意义【J].中华围产医学杂 志,1999,(1):8-9. 【5]HelskeS,VuorelaP,Carpen0,eta1.Expressionof vascularendothelialgrowthfactorreceptors1,2and3in (下接第77页) 苏州大学(医学版)2007;27(1)77 厚的切块可能纳人更多的干扰成分,在后续处理中 难以去除.由此,起初画线可贴近肝缘,待肝脏最大 层面出现后,画线则相对有所保留.而在肝门区或 胆总管,胰管等将要显露时,为防止过度切割损伤胆 胰管,切块要变薄,如取1,2层为宜.另外,避免将 线直接画到胆囊,胆胰管壁上,以免经腐蚀后被侵 蚀.同时,切割前和切割中随时观察相邻层面的解 剖关系,也是防止误切或漏切欲保留结构的重要环 节. 以往文献报道,消除胃十二指肠液体干扰可采 用口服含碘对比剂.但这同时也遮盖了对胆总管 末端与十二指肠解剖关系的观察.笔者近来尝试口 服清水冲盈胃十二指肠(本组中有10例),编辑时有 意保留十二指肠.结果显示这对胆管低位梗阻时观 察病灶与十二指肠的相互关系较为有利. 几项研究提示,nCTC具有良好的临床应用价 值?-__1.其成像克服了使用胆管对比剂在胆管梗阻 时显影不佳或不显影的缺陷,同时又弥补了磁共振 胆管造影的部分不足.近来,有学者报道采用多排 螺旋CT增强扫描后以多平面重建(MPR)或采用固 定层块(15mm)以MinIP法显示胆系,取得了满意 的效果n-91.该法成像相对简捷,无须手工编辑,但 不足是难以整体显示胆胰管结构. 本组结果显示,尽管三维MinIP图像在定性准 确率上与以往报道结果仍基本相似?-_1,但nCTC通 过变层切割和腐蚀处理,不仅可明显缩短后处理时 间,而且能改善三维图像整体效果,从而有助于提高 该技术的临床实用价值.相信随着多层CT的应用 将不仅能改善z轴空间分辨率,消除呼吸运动伪影, 而且也将进一步提高nCTC图像质量. 参考文献: 【11StockbergerSM,ShermanS,KopeckyKK.HelicalCT cholangiography【J】.AbdomImaging,1996,21(2):98— 104. 【2】ZemanRK,BermanPM,SilvermanPM,eta1.Biliary tract:three?dimensionalhelicalCTwithoutcholangio- graphiccontrastmaterial【J】.Radiology,1995,196(3): 865—867. 【3】张追阳,丁乙,胡春红,等.阴性法螺旋CT胆管造 影在胆管梗阻疾病中的应用【J】.中华放射学杂志, 2001,35(6):460—464. 【4】ParkSJ,HanJK,KimTK,eta1.Three-dimensional spiralCTcholangiographywithminimumintensityprojec— tioninpatientswithsuspectedobstructivebiliarydisease: comparisonwithpercutaneoustranshepaticcholangiogra— phy【J】.AbdomImaging,2001,26(3):281—286. 【5】张追阳,丁乙,倪才方,等.阴性法螺旋CT胆胰管 造影与直接胆胰管造影的比较【J】.中华放射学杂志, 2002,36(7):613—617. 【6】RaoND,GulatiMS,PaulSB,eta1.Three.dimensional helicalcomputedtomographycholangiographywithmini— mumintensityprojectioningallbladdercarcinomapatients withobstructivejaun~ce:comparisonwithmagneticreso— nancccholangiographyandpercutaneoustranshepatic cholangiography【J】.JGastroenterolandHepatol,2005, .20(2):304—308. 【7】Nino—MurciaM,JeffreyRBJr,BeaulieuCF,eta1. 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