人芽囊原虫滋养体和包囊的形态学观察

人芽囊原虫滋养体和包囊的形态学观察 ?护771D(} 第j>赣南医学院V.2OO3 SE尸.20( 人芽囊原虫滋养体和包囊的形态学观察 ? 墨,掣鲞,苏永莲 黄爱民,谢学斌,葫雅琼 (赣南医学院寄生虫学教研室,江西赣州341000) 弓 摘要:用普通光学显散镜和荧光显擞镜对人芽囊原虫的三株滋养体和二株包囊进行了形状,太 小和结构的观察.滋养体为生长在LAsl坝相培养基内4,5天的培养物;包囊为带虫者粪便经蒸 馏水反复3次洗涤的沉淀物.均作滁片,分别以不染色,碘染色和L'Lod吖啶橙染色,镜下识别和 鉴定.滋养体以空泡型(包括二分裂状态的)占多数,其次为变形型,颗粒型爱其它类型少见颗 粒型为多分裂繁殖体.人芽囊原虫包囊形态较单一,都是圆形或卵圆形.人芽囊原虫包囊的光镜 照片,为首次报道;其包囊期在我国也是第一次记载 关键词:人芽囊原虫;滋养体;包囊;形态学观寮- 中国分百:—R38—2.9——赢———r文章编号:1001—5779(2000)03—0203—04 人芽囊原虫(B1astocystishominis,Bh)是 一 种人类常见的肠道致病原虫,其致病性已 为许多文献资料所证实【1,21,但其生活史各 期形态许多学者观察结果不尽相同;近年来 我们对Bh的滋养体和包囊期形态也作了观 察,结果如下. 1材料与方法 11虫株来源本次观察共用三株rjh滋 养俸,即HBC,NBD和NBC.株.卜?3(=株于 1988年6月取自一无症状带虫者粪便;NBD 株和NBC株于1999年6月分别取自一名患 者和一名带虫者的粪便.三份粪便均经镜检 证实含大量B主要为空泡型,二分裂型和 变形型虫体.取三份粪便分别接种于无米粉 LAS双相培养基内,共3管,经分离培养 获得.三株Bh培养均按每4,5天转种一 次,传代保种至今.在每次转种后余下的培 养物供观察研究用. 本次观察共用二株包囊,即HBC株和 NBC株.将上述接种后余下的HBC株粪便 车课题得到蛆西省自然科学丛金资助. 和NBC株粪便置室温(23,33?)下2,4 天,使得部分虫体转变成包囊,然后取此种粪 便1克于含4ml蒸馏水的青霉素瓶中,搅拌 成悬液一经小筛滤人10mt离心管中,加蒸馏 东至10ml,混匀,自然沉淀】h后.吸去上清 液,再加蒸馏水至10rot,自然沉淀,如次反复 3次.然后取沉渣0.1--0:2ml接种于LAS 双相培养基内,37?孵育2,3天出现Bh极 度旺盛生长,即证实沉渣含Bh包囊,可供观 察. 1.2观察方法上述三株Bh试管内培养 物和二株Bh包囊沉淀物均作直接涂片,碘 染色涂片各一张,用Olympus普通光显微镜 观察,记录观察结果或摄片.l部分培养物涂 片作HE染色,Olympus光镜观察或摄片. 同时用三株Bh培养物和二株Bh包囊沉渣 各作涂片,以1:l0吖啶橙染色-,国产44x 落射式荧光显微镜观察,记录结果.. 2结果 21滋养体形态 赣南医学院2O0o年 211光镜观察三株Bh刚由粪便接种 到LAS双相培养基内,37?孵育2,3天后 进行观察,生长极为旺盛,虫数密集,虫体普 遍较大;但经数次转种后,生长缓和,虫体普 遍较小.虫体形态至少可区分为三种类型, 即空泡型,变形型和颗粒形"』. 空泡型在直接涂片中,此型虫体每每 占多数,呈圆球形,闪亮不透明.虫体大小相 差悬殊,以HBC株为例,测量100个的直径 平均为135121,最小者70$ma,最大者 284"m,但三株之间无显着差异(图1.1). 在碘染色染色涂片中,虫体内的中心体 (('~ntralbody)染成棕褐色.细胞质谈棕褐 色,呈环状或月芽状,围绕于中心体.在卜fF 染色涂片中,中心体呈红色,细胞质呈淡红 色,细胞梭为蓝黑色,甚易区别(图21).在 涂片中,常能见到处于二分裂状态的空泡型 虫体,偶见复分裂状态虫体L6j,即一个空泡 型虫体同时在两个方向上处于二分裂状态 图1.4).也有呈内二分裂状态的(图15). 变形型(阿米巴型)在直接涂片中,有 些空泡型虫体向外缓慢(数分钟)伸出伪足, 形似阿米巴滋养体,但无位移.特别在外力 (热力,机械力)作用下,空泡型虫体迅速变形 运动,虫体细胞既可在一个方向上,也可在多 个方向上突出或陷人,形成群体多态性.偶 见形似阿米巴滋养体的虫体透明,伪足远端 呈小泡状突起,最后小泡脱离母体,形成子代 空泡型虫体[71.在碘染色涂片中,虫体内的 中心体和细胞质染色性同空泡型虫体.在无 中心体的变形型虫体呈一致淡棕褐色在 HE染色片中,虫体呈淡红色,细胞核蓝黑色 (图2.3). 颗粒型在三株Bh转种传代培养2,3 个月后,偶而在培养物涂片中见到大量的颗 粒型虫体.这种情况在HBC株见到5次, NBD和NBC株中均见到一次;但这种含大 量颗粒型虫体的培养物再经1,2次转种后 又会退至罕见.颗粒型虫体内的颗粒可见于 —— 204—— 中心体内,也可见于整个虫体细胞内.颗粒 为棕黑色致密圆点;或空泡状,泡壁深棕色, 厚薄不匀.但有的虫体含有的空泡状颗粒酷 似子代空泡型虫体,直径约为2,3m(图 l6,7).数目在1O,7O多个不等.此种成 熟的子代空泡型虫体,可选出位于细胞质内 或位于虫体细胞外.偶见处于二分裂状态或 内二分裂状态的虫体出现颗粒(图l5). 2.12荧光镜观察 空泡型虫体呈枳红色,中心体呈浅亮 绿色,有的虫体内尚能见到2,3个鲜艳枳红 色小球体. 变形型虫体呈枳红色,伪足色浅不易 见,有的虫体内可见2个鲜艳积红色小球体. 颗粒型虫体呈浅亮绿或亮绿色.含少 量颗粒者,虫体仍呈枳红色.有的在颗粒丛 内可见4,lO多个鲜艳枳红色小球体. 2.2包囊形态. 2.2.1光镜观察在直接涂片中,Bh咆囊 多数呈圆形,少数呈卵圆形.大小以卜?株 为例,随机测量23个的直径平均为574m, 最小者为387,m,最大者为7.74gin.囊壁 厚.内壁相对较薄,包绕于虫体;外膜较厚, 黑色,有的能见到细绒状结构.在内壁与外 膜之间为无色透明的中间层,甚厚.囊内虫 体闪亮不透踞(图3).这些特征与Zaman (1994,19)所报道的Bh包囊形态极为相近【J.包,95 8,9囊在碘染色涂片中呈黄褐色,囊 内虫体浅褐色. 2.2.2荧光镜观察在1:10吖啶橙染色 涂片中,包囊体一般发银白色荧光,囊内虫体 银白色较浅.少数包囊不发荧光或发枳红色 荧光,囊内虫体枳红色荧光明显. 3讨论 本文报道了Bh生活史各期形态光镜下 所见.试管内培养的Bh滋养体可区分为空 泡型(包括二分裂状态的),变形型和颗粒型. 空泡型每每占多数,变形型其次,颗粒型及其 3期吴国宏,等人芽囊愿虫滋养体和包囊的形态学观察 它类型少见.以颗粒型占优势的传代培养次 数很少.Jiang(~993)所谓的多分裂型-"和 Singh(1995)所谓的包囊型,可能指的都 是含有子代空泡型虫体的颗粒型. 本文所提供的Bh包囊光镜形态照片, 适于一般实验室的应用和参考,而在此前所 报道的相差显微镜和电镜形态照 片-?r],只能用于研究Bh包囊诊断的 确立,主要依据其形态特征与前人所描写的 相近,同时接种于LAS双相培养基内能出现 旺盛生长,即所谓满天星现象.本次报道的 Bh包囊在我国是首次记载. 试管内培养的Bh滋养体在荧光镜下呈 枳红色,中心体浅亮绿色,有的虫体内能见到 或多或少的鲜艳枳红色小球体.这种小球体 究竟是什么?Bh包囊大都发银白色荧光,但 有少数不发荧光或发枳红色荧光,其原因何 在?均需进一步研究. (注:原免疫学教研室夏金华老师参加部 分工作,致谢.本文图片见封三) 参考文献 [1]吴斌综述,游开绍审校人芽囊原虫的研究进 展[J]国外医学寄生虫病分册.1994,2l(2): ' 5962 _ [2]吴国宏,熊树,曹镐禄等.一起人芽鹱愿虫病 暴发流行的调查研究[J]中国寄生虫病防治 杂志,20o0,13(1):2s一27. 3]连惟能溶组织内阿米巴的体外培养见:陈佩 惠,周造兜主编《医学寄生虫体外培养》[Mj 北京:科技出版社,1995.6874 [4]吴开琛,潘玉蓉,胀家埙等.荧光素吖啶橙染色 活体检查疟原虫子孢子初步结果一j]中国寄 生虫学与寄生虫病杂志.1993,ll(2):126 [5]SheehanDJ,RaucherEG,andMckitrickJCAs一 ~x-iationofBlast~wstichominiswqthsignsand sSmspt{mrksofhun1andilate[J]JCii~,microbid, 1986,24(4):548550 :6]何建国,江静渡,周蛊等人芽囊原虫的光学和 超微结构研究[J]中山大学(自然科学院 版),1990,29(3):122128 [7]李肖梅,周宏,钟鼎民等.对二例人芽囊原虫病 诊治研究J]中华儿科杂志.1990,28(6):348 — 349 [8]?VMorphobgyofthectofBlastoeystis hominis【]].SoutheastAsianj"lropMed Heahh,1994,25(4):790—791 [9]zan】anV,HoweJ,NgMUltrastructure.fBk— tccy~tishow,inksc[J]parositolRes,1995 81:465496 [10]JiangjB,at,dHeJGTaxonomicstatusofBEas tocystishominis[J].ParasitologyToday,L993, 9(1):23 儿]SinghM,Sur~hK,HoLC,eta1.Elucidationof thelifecycleoftheintmlnalDn)t.z0anBl*~sto- c州hominis[J]Pa~sltolRes,1995,81:446 — 450' 控]厶n?]VHomeJ,NgMScmmingelectron micrc~'o95'ofBlastocystis~h<mninlscysks[Jj ParasitdRes,1998,84:476—477 [13]MoeKT,SisghM,HoweJ,eta1.DevdopmeJu BtastocystishomlhiscyslsinlovacuoIforms in~rm[J]Pamsito[Res,1999,85:103—108 (收稿日期:2000—05—08)