【doc】补骨脂素及醋酸地塞米松脂质体凝胶的研制

补骨脂素及醋酸地塞米松脂质体凝胶的研 制 f,2f ? 药齐U- 补骨脂素及醋酸地塞米松脂质体凝胶的研制 ,rI一 砧7,01, 何童,雷嘉J1.,扬健,罗顺德(武投大学亚太医院药学部,期北武投43oo6o),,'?...一 摘要:目的科备台有朴骨腊素及醋酸地塞米松的脂质体凝腱并研究其经皮嗳收后体内分布,为临床新制荆的开寞打下基 础用均匀优选谊腊质体凝腱的处方及制备工艺,并用扫描电镜观测其外观,大小及分布.用分干算击蛄鲁|?,比 科定其包封率.初步考察谊制荆的稳定性.并取末鬼为试验对象研究其皮肤刺教一眭.用辱置研宽其经皮传递詹主辩俸内分布 情况.结果由优选出的处方度工艺制备的腊质体凝腱外观nt整,分布较均匀.包封率理想,稳定性良好,与对愚品相比对掌 鬼皮肤有嘲王的伴护作用,在辟鼠皮肤内的滞留量显着增加,是对】!曩品的4.2倍(P<0.01).而奎身吸收量嘲王降低(P<0. 05).结论台有补骨脂素及醋酸地塞米榜的麻质体凝腱高技低毒,可望成为临床治疗白?囊的新型外用剥制. 关量词:三}重壁圭;堕熊童查堡;塑堕生墨些询璃纂 中围分类号:R943文黛标识码:^文章编号:1001—2494c20呻I12—0818—04 Theprel~ralionandinvivodispositionofsl~-absorpedfiposomalgdind1Idingpsorale~and dexametlmso~ acetate HEWen,LEIJia-chuan.YANGJian,LUOShun-de(Dearptmen2Pharmacy,Yam/HL[Wuh an—l竹,Wuha~ 4300~0,CMaa) ABs1^cT;OBJECTIVETosludythepreparationand/n-v/vodispositionthrougI.,kin-ab~~ plion0fllposomal8dincludingpB0I神眦and d嘿"hBs0呻 acetateinerIodevelopa13ewlIIemcprelm~mtionforvitiligoMmmo~sToscreenthecompo sitionandpIepIIg methoduBi】 homogeneousdesign.ItsoutwardappearanceandsizedistributionwdetectedbyBca工 IIIigeleetnmmier~eope(SEM). MolecularsieveandHPLCw盱usedstudytheer哪psuledmkoftheJjp口幻 IrIBI8d.Wealsoob~rvedsutbili~yLa-~ropIe?min8ri】y. Finallywetesteditsskiniterationand/nv/vothspositionthfoIIghsldn— absorptionRESULTSTheliposomalgelhadpcotmsingehataelers0f fin~lookingappearance,shallow池dis~bution,higI.e口ps山 edrate&ndgoodstsbilily/n.Comp,~edwiththecontrol,ithad signifie.antprotee~veactionforrabbits'skin.Itproducedhighexaoeumulation0fpB0ral? anddexaraethasoneacetatein(4.2-fold.P' 0.O1)andlowdrugconcenlrtttionintheintertml.曙a喈 ofguinepigs(P<005).CONCLUSIONTheresultssh伽ysL'端estedthatthe ljp0自 0ngelirreludingpsoralenanddcxmnethasoneaceIatewasvaluabletobefu~herdevdoped昭 &newthesapeut~cpreparationforvitillgo withhieffectandl0wIoxieity KEYWORDS0en;湖衄eII.a啪eaceIate;liposomalgel 白癫疯(vltiligo)是一种常见的后天性色素脱失 性皮肤病,一般不影响身体健康,由于白瘫多见于面 部,颈部,手背等露出部位,常使病人造成精神负担. 现有的药物治疗方法主要有:?利用补骨脂素及其 衍生物等光敏物质.内服或外搽结台紫外线或日光 照射;?皮质类固醇激素外用或皮内注射;?氯芥乙 醇液外搽等方法C1j.但无论采用何种方法,均需长 期治疗,因此不可避免地产生较为严重的不良反应, 如局部皮肤红肿,萎缩,毛细血管扩张,毛囊炎等,亦 可吸收而引起全身不良反应.研究表明:脂质体这 种新型的皮肤局部用给药系统具有药物全身吸收限 速屏障作用,减少药物的全身吸收,同时又能增加药 物在皮肤局部的积累.从而起到药物持续释放作用, 8I8?‰PlmrmJ.2DmmlMr.Vat.玎No.12 减少给药频率及给药次数.减少局部不良反应.同 时脂质体具有无毒性,可生物降解性(磷脂类),易大 量制各等特性.本试验以补骨脂素及醋酸地塞米松 为主药,研制其脂质体凝胶,拟为临床治疗白癜疯提 供一种高效,低毒的新型外用制剂. 1仪器与药品 1.1仪器 岛津LC一9A型高效液相色谱仪(13产);XZ一1 旋转蒸发仪(上海医疗器械一厂);SX一40扫描电子 显微镜(日产);METFLERTOLEDOAG245电子天平 (瑞典产). 1.2药品 补骨脂素(本室自制并鉴定,含量100.32%); 姗年n月第3,春第i2 醋酸地塞米松(天津市天津药业公司);毗.?-二棕榈 酰基磷脂酰胆碱(DLDPPC,Sigma公司提供);胆 固醇(北京化学试剂公司);羧甲基纤维素钠(CMC- ?.北京化学试剂公司);BHA(上海益民食品四厂); 醋酸泼尼松(天津市天津药业公司);其它试剂均为 分析纯. 2方法和结果 2.1均匀设计优选处方及制备工艺 2.1.1均匀设计方法安排试验根据预试验结果 及参考有关文献【】,拟采用干膜振荡分散法制备 多室脂质体,选择对脂质体的成形,外观,大小及分 布,特别是包封率(Y)影响较大的4个因素,即DPPC 用量(1T螭,DPPC一胆固醇=2:1),水化溶液用量(), 水化温度(?),CMC.Na用量(rIlg).依次分别定为 X.,X,X3.x4,每个因素选8个水平(拟水平).根据 均匀设计实验原理和使用原则,按均匀设计的U ()表进行拟水平安排,列出试验,见表1. 裹1拟水平均匀设计方案 2.1.2数据处理及最佳条件的确定以所制得的 含药脂质体凝胶的包封率(Y)为指标,在计算机上 将表1数据进行多元逐步回归处理,得回归方程:y =62.53+0.433Xi一0.747x2+0.029X~+1.568x4.r =0.9014,F:1.830,此方程以a:0.10检验,F:1. 83(Fnol(4.3)=5.34,提示可能是非线性关系,方 程中各因素前的系数表明:?DPPC用量在100,400 嘴范围内越大越好;?水化液体积宜选较小者;? 水化温度在4o,60?范围内对Y影响不大,但温度 较高者为优;?CMC.Na用量在5,l5mg范围内宜 选较大者.经多次预试+确定最佳处方及制备工艺: 将4O0ragDPPC,200rag胆固醇与补骨脂素50?,醋 酸地塞米松0.3rag,BHA0.5嘴共溶于100ml氯仿 一 甲醇(2:1)中,将溶液置于500ml梨形烧瓶中.放人 直径为5?--n玻璃珠5O颗.于真空旋转蒸发器上于 60?挥干溶剂,残留物在烧瓶壁上及玻璃珠表面形 成均匀薄膜(A);另将10ragCMC.Na用0.7ml丙二 醇及l乙醇润湿,使起自然膨胀,形成CMC.Na混 悬液(Bj,将8.3mlCaC12溶液(8mmol?L)加热至 60屯加入(A)中.随后在1—2s之内将(B)加入,并 于60~C水浴中振摇30min后取出.于室温静置1h 即得. 22含药脂质体凝肢的质量研究 22.1外观,大小及分布内眼观察为白色均匀凝 胶状;于400倍光学显微镜下观察脂质体呈圆整球 形,大小较均匀;用电子显傲镜观察.测得粒径范围 为1,15m.分布均匀性较好,大多数脂质体由于 CMC—Na这种亲水胶体的桥接作用而形成团聚物,见 图1. 用1舍药脂质体凝肢扫描电钝(SEM)图(x1GO0倍) 2.2.2线性范围测定【J色谱条件:Nova-Pack CI8柱,流动相:甲醇.水(52:48),流速0.7ml?mln,, 检测波长246nm,灵敏度O.I)lAUFS,内标醋酸泼尼 松(10g?ml一'). 曲线:精取补骨脂素对照品及醋酸地塞米 松对照品.共同用甲醇制成前者浓度为10懈?tIll,, 后者浓度为0.5"g?ml..的标准贮备液.分别吸取贮 备液1.0,2.0,3.0,4.0.5.0,6.0ml于l0tIll量瓶中, 再分别精密加入内标液1.0ml,用甲醇定容,进样l0 l,以峰面积对浓度回归,得补骨脂素线性方程为:^ =0.4278C一0.13,r=0.9996,醋酸地塞米松线性方 程为:A=0.3903C+0.1838,r=0.9992,即补骨脂 素在1.0,60"g?ral范围内+醋酸地塞米松在 005,0.3tLg?mlI1范围内峰面积与浓度线性关系良 好. 2.23回收率测定精密称定50嘴补骨脂素及 0.3rag醋酸地塞米松,用以上制备脂质体凝胶,再 精密量取5.0ml于100ral量瓶,用甲醇适量振摇提 取完全后定容,过滤,精取续滤液1ml置100rd量 瓶,精密加人1O.0】Ill内标液.进样测定补骨脂的含 量;另取续滤液1ml置10?II量瓶,精密加入1.0ml 内标液,用甲醇定容,进样测定醋酸地塞米松的含 量.结果见表2. 2.2.4包封率测定精取样品5.0ml.用pH7.4 cP/tam,.2000an.WbNo.12?819 表2回收率实验结果 药物加^量耨量回啦翠…脚 坚:型::墨兰 朴骨脂膏2571I255609980 2571I2529B9a39 253'1I25903I?759970I雌 253'1I256?102 253'1I2544798 醋照地塞米船0I4町0t473984 0IOI,岍l004 0I曲7OI4日098s699160虻 014町O1499953?0B1 0149701476986 PBS50ml稀释后过SephadexG一50柱.分离去除游 离补骨脂素及醋酸地塞米松,洗脱用乙醇生理盐水 溶藏(无水乙醇.生理盐水=4:6),用以上HPLC测定 补骨脂素筛分前量m前及筛分后量m,其包封率% =/m前×100%.同理可得醋酸地塞米橙筛分前 量m前及筛分后量m后.其包封率%=13"1后/m前× l00%.制得不含药物的空白脂质体凝胶,并同法测 定.结果表明脂质体凝胶中其它成分不影响两种主 药的含量测定,见图2.最后得补骨脂素包封率= (91.3?04)%(n=5),醋酸地塞米松的包封率: (89.2?0.7)%(n=5). 口l口_u10】j ^B 时隔,n 圈2脂质体凝腱渍相色谱囤 ^.空白脂质悱囊艘色谱田.B.古药指质体囊眭色谱图…朴骨脂书b一内 标;c一醋照地毫米橙 2.2.5初步稳定性考察?常规加速实验法:将3 批样品避光置于40?,RH75%条件下观察3个月. 每个月每批号取3份样品观察其性状,脂质体形态, 表3脂质体凝腱对主苟在体内分布的影响.腭?g-.,20.?s 大小及分布,主药含量等稳定性指标,并与0月时比 较,结果3个月内各项指标均无显着变化.根据有关 规定可将其有效期暂定为2年.?光加速实验: 将3批号样品密闭置于40O0h光照强度下,分别于 1,3,5,7.10d每批号取出3份考察稳定性指标,结 果显示随着光照时间的延长,补骨脂素含量逐渐下 降,且颜色逐渐变黄(BHA遇光易变色).其它指标 无显着变化.提示本品宜避光保存.?离心实验:取 3个批号样品各5Inl装人5Inl离心管中.以31100r? min离心30min.各样品均无分层.凝聚等现象. ?留样观察:取3批样品避光,于室温放置,分别于 0,3.6.9.12.16,18,24个月取样考察稳定性指标,均 无显着变化. 2.3药理试验 2.3.1皮肤刺激性实验取家兔8只,体重(2.0? 0.2)kg,于给药前24h将背部脊柱两侧对称脱毛.每 侧约5cm×5cm,正常饲养,一侧涂脂质体凝胶1ml, 另一侧涂等剂量的补骨脂素.醋酸地塞米松软膏(自 制)适量,每天一次,连续给药一个月后.观察皮肤变 化,两者均有不同程度的红肿发生.软膏侧于给药后 9d即出现红肿现象,脂质体凝胶侧于给药后21d才 发生轻微红肿.两者时间有显着性差异(P<005). 2.3.2经皮传递研究取300—500g豚鼠20只. 早0兼有.随机分为两组,背部皮肤实验面积3cm ×3cm,实验组给予舍药脂质体凝胶1ml对照组给 予等剂量的含药软膏(自制),两组均每天给药一次. 连续给药7d,于最后一次给药4h后处死,迅速取表 皮,心,肾,肝,肺等组织器官粉碎后用适量无水乙醇 提取,检测其含药量,结果见表3,表明脂质体凝胶 中药物在表皮中滞留量约是对照组的4.2倍(P< 0.01),而全身吸收量明显降低(P<0.05). "实壁期问吐集的所有昂量 3讨'论成分.我们将其提取精制.为本实验提供充足的原 3.1目前临床上自瘴疯常用补骨脂50g用75%乙料:我们曾尝试将补骨脂素与醋酸 地塞米松共同制 醇l00ml浸泡制成酊剂供患者涂抹,并配合光照治成软膏供患者涂用,但临床试验 表明该软膏与单独 疗.通常认为补骨脂中含的补骨脂素是其主要有效使用这两种药物效果无显着区 别,且长期使用会出 820?‰,.2000."?0t2 现明显的局部及全身不良反应.而脂质体凝胶增加 了药物在表皮内的滞留,同时使全身吸收显着减少, 对皮肤有明显的保护作用.车工作为临床试验提供 了可靠的依据临床试验正在进行中. 3.2该脂质体凝胶中主药含量的确定是根据补骨 脂酊剂中补骨脂素含量及醋酸地塞米松霜的含量来 决定的,由于脂质体凝腔这种剂型的优势,它们的含 量有望进一步降低,其具体含量及用量有待进行药 效试验及临床试验来确定. 3.3HPLC测定包封率时,将两种主药用相同的色 谱条件分开测定,主要是由于这两种主药含量相差 悬殊,测补骨脂素时醋酸地塞米松峰太小,不在其线 性范围内;测醋酸地塞米松时,补骨脂素严重超载, 也超过其线性范围,而色谱图上,两种主药峰分离度 理想,对测定互不干扰,故采用两次测定法.El前尚 未找到合适的方法及条件将两者同时测定. 3.4补骨脂素为呋喃香豆精类化合物,碱性条件下 82-I一lL 易开环破坏,在酸性条件下闭环而含药脂质体凝 胶最后为pH6.08,所以不影响补骨脂素的稳定性. 3.5由于本实验着重考察该脂质体凝胶是否可增 加药物在皮肤内的含量,而药物经过表皮达到真皮 后会很快被毛细血管系统吸收,处于"漏槽"状态,表 皮中的药物含量足以证明了本实验达到了预期目 的,具有一定参考价值. 参考文献 [11朱学驻.色素障碍性皮欧病.见:陈供铎主编.皮肤性病学 [M].第4版.北京:人民卫生出版社,1997:162—164 [2]MichaelMe耐MultipII?LeomDmEsem[P].us,47612.~ l988一?一02 :3]赵建斌,崔靳,王莲刚,等.补骨脂煮脂质体的研科厦细臆毒怍 用韧步研究[J]第四军医大学.1蛳,18(6):封3. [4]姜舜尧.冉巧风.ttPLC法测定耆鹿运痹肢囊中补骨脂煮和异 扑骨脂煮【j】西北葛学杂志.1996.11(s):l钾. [5】林瑛,张文生.皮爽莲是软膏中醋酸地塞米橙的H眦测定 [J].中国医药工业杂志,19915,27(5):227. [6]魏树礼.药物剂型的稳定性[^].见:奚念朱主编药学[M] 第3版.北京:人民卫生出版杜.1998:119—150. (收稿日期:lg~9413.tT) 两种硝苯地平缓释制剂体外释放的比较 97I2 , L/ {盥,.福岛昭二,猪爪信夫(1西安市药品检验所.陕西西安71~M.;2西安市第五人民医院,陕西西安7100ff~;3.日本 ti,i~P学院大学苟学部苟荆学教室.日本K0be651—2l脚:4日本北海道药科大学.日本Hkd0舛7一o2?) 摘要:目的Iit产天海力缓释片和日丰产Adal缓释片释放速率的比较方法采用日本'第13改正药局方)巷出试验第2 法a结果2种缓释片在酸性和中性2种缓冲寝中的释放速率有明显差异(P<O.O5)结论天海力缓释片是一个,l-~r良 好释放特性的口服缓释制荆.,/———————? 关量词:蔓垫?;毽壁蜘;醺蕉主望=! 中田分类号:11943文献标识码:A文章编号:1001—2494(2o00J12—082l一02 Comparative加咖releaseoftwondipineeontrolledea靶preparations JIANGXia0min?WANGYou,SHOJ[Fukushir~a,NUBUO[notsume('帆Dco咖f. 崩'舯.71~54) AlcT:oB皿c?VETocCfnl:~rethe?mreleasemleofTianh~ieontmlledeI~blets(m日de_nChina)町ld^dalBt(mi玎 pat1).M~TItODThereleaseten2intheI~poeiaofJapanthirteenthediti蛆sed. Rnrdeaser丑te0f eontMledrele~,etabletsic肌ldlgerence(P<O.O5).CONCLUSIONTim~'MlicontrolledI~letsisBpre~iontIlgoodrel ease ch8rac KEyWOI~OS:nffedlpine;controlledreleasepreparation;releaser? 钙通道阻滞剂的发展是近20年来治疗心血管 疾病药物方面的一大突破,其治疗作用主要表现为 对心脏冠状血管及周围血管平滑肌的抑制.硝苯地 平作为钙通道阻滞荆,近年来广泛应用于临床. 为了维持稳定而持久的药效,减少服药次数,最近国 2000年l2月第35卷第l2 内外市场上均出现了硝苯地平的缓释片剂.为 国产和国外缓释制剂的质量,我们选择国产和国外 2种缓释片进行了体外释放速率的对比试验.报道 如下. l仪器及试药 ‰?,,?%...12?82