生殖支原体检测方法的研究进展

生殖支原体检测的研究进展 婚;},遭巷嗥盔谤鹤嘻碗 预防医学情授融志1999年第l5卷第2期 62.2,病变未能控制l2.7其毒副反应有胃纳减遇,腹 胀,腹泻眼干,皮肤搔痒,皮肤色素沉着,肝功能异常,心动 过缓. 汉防己甲紊具有络合铜离子,影响腔原的交联反应,抑 制腔原合成I促使肺内脂类捎散;解除肺血管平滑肌痉挛, 降低肺血管阻力,改善组织灌流,加速矽肺痛变消散等作 用. 4矽肺宁 系中成药,具有保护肺泡巨噬细胞膜,提高肺泡巨噬细 胞ATP含量,以丑抗细胞毒性和抗炎作用.1987年通过专 家鉴定.每次4片,每日3次.连服1年.404倒煤矽肺,矽 肺经措后症状改善血清铜蓝蛋白和粘蛋白降低}细胞免疫 功能改善x线胸片病变进履率98%,明显低于对照组 (369).其毒副反应,服药初期个别出现皮疹,恶心,胃纳 减遇. 5矽复康 系以莨菪药为主的中药复方片剂l,1989年通过专家 鉴定.该药具有括血化谳,疏通镟循环.松驰支气管平精肌. 改善纤毛上皮运动功能,增强肺廓清能力;保护肺泡巨噬细 胞I调整免疫功髂等作用.每次3片,每日3次,3个月l疗 程,问蕊l十月.连服4个疗程.经治后,症状改善I肺活量, 第1秒时间肺活量增高I部分患者胸片清晰度增高.结节阴 影密度降低,融合块影不同程度缩小. 6辨证施治 拄辨证施治治疗矽肺,基本治则扶正,祛邪.前者,包 括润肺生律,益气健脾,补肾同本;后者,包括活血化蜓,软 坚散结,化矽利尿.此外,止咳,化痰,清热解毒等荆常随证 旆用.譬如,描博矿务局职业病防治所活血化淤,健脾养 阴j壹治疗矽肺73倒6个月,咳嗽,胸闷,气急好转7O,血 清白蛋白增高,球蛋白降低,唯胸片无明显改变. 近年来,还发现黄花嵩素对肺抱巨噬细胞有直接保护 作用,治疗实验性矽肺疗效明显?"热毒清"(由金银花,蒲 公英,大青叶,鱼腥草制成的注射剂)具有稳定溶酶体膜和 清除自由基,防止脂质过氧化反应,对SiO:所致的溶爵体 和线粘体膜损伤有明显保护作用,并能延缓肺泡巨噬细胞 吞噬si0z后的崩解,死亡-能有效地保护肺泡巨噬细胞. 热毒清用于治疗实验性矽肺疗效明显0" 7参考文献 1西华山钨矿职工医院.白芨治疗矽肺初步观察. 中华结核病科杂志,1959,(2):I49. 2l查文安-马秉光-陈紊华,等.中医药治疗矽肺近况.煤 矿医学,l982,4(增刊一):120. 3陆崇义,磨传真-吴超伟,等.抗矽治疗后继服黄根两年 观察报告.职业医学,1986,13(2):12. 4郭维新,俞品琦.合68克矽平和汉防巳甲紊对大鼠矽 肺治疗效果光镜和电镜观察工业卫生与职业病, l984-10(2)79. 5夏来顺.我国矽肺药物治疗的概况.预防医学情报杂 志,1992,8(3):81. 6夏来顺,程嘉瑾-汤永勇,等.矽肺的发病机理,临床 现及诊治.化工劳动保护(工业卫生与职业病分册), l998,19(3)t125. 7叶虢奇.矽复康治疗矽肺临床疗效分析.中西医结合 杂志,I990,10(7):420. 8孙顺仙,刘正亮,黄花蓠紊对豚鼠肺抱巨噬细胞毒性及 抗石英毒作用的体外观察.职业医学,1985,12(2)33. 9刘爱华,吴植恿,张教轩."热毒清对实验性矽肺防治 的研究.职业与健康.1993.(6):44. 1O姜志尧,郝天玲,周滨,等.中药.热毒清对抗矽尘毒 性效应的扫描电镜动态观察,职业医学,1989,16(2); 6. (收稿:199B一一20修回.1998一l0—30) f,7/, 生殖支原体检测方法的研究进展? 王蓓综述赵季文审控 自Tully.等1981年首次从非淋苗性尿道炎男性患者 的尿道分泌物中分离培养出2株生殖原体(Mycoplasma genitaliun.Mg)以后,许多学者对Mg的生长特性,免疫学 特性,分子生物学特性以及与疾病的关系等进行了大量的 研究并建立了多种Mg的检测方法,本文就Mg的检测方 法研究进展进行简要综述. 1分离培养法 l南京铁道医学院流行病学教研室(南京210009) 7i?;砟 ' 1.1培养基培养.瑚M对培养基要求极高且生长缓 慢,培养较难-尤其是对临床标本中Mg的培养更不容易成 功.TullylgS1年建立了对医学支原体具有重要意义的 sP一4培养基.适台于Mg生长的sP一4培养基,不古醋酸 芘,含Mg代谢所需的葡萄糖及它营养成份,最适pH为 7-4,7-5,可通过加人0.8Noble琼脂或0.5,0.6琼 脂糖而固体化,用于克隆苗株t观察苗落.Tully等利用这 种培养基.从l3份尿遭分泌物标本中分离培养获得2株 Mg.培养期约为50天.1996年Jensen等还报道了另一 种适台Mg生长的培养基.即改良Friis肉汤培养基,?份 PCR检测Mg—DNA阳性的尿道分撼物标本中有6份在 其中呈阳性生长. 国内学者对sP一4培养基进行了改良.赵季文等.利用 改良的SP一4培基从性病及性乱人群中分离Mg获得成功. 初代生长时间在3o天以上,平均为3783天,最长为55 天 12组织缅胞培养法组织细胞培养支原体.可为支原体 提供良好的类似体内的生长环境早在60年代,Chanock 等.报道了肺兜支原体(Mp)在组织细胞中的生长.9o年 代Jensen等.开始尝试用细胞培养法来进行Mg的繁 殖,并借此在电镜下观察到Mg侵^细胞的过程以及在细 胞内的定位在PCR的监测下,Jensen发现在儿份PCR 有9舒适应在Veto细 检测MgDNA阳性的尿道标本中, 胞培养中增殖,经过多次传代培养后转^改良的FriisFF 肉汤培养基中,有6份能继续传代生长,最终在琼脂培养基 中克隆莸揭4株Jensen认为,在分离莸得新的Mg菌株方 面,细胞培养繁殖过程起到了三方面的作用,一是使临床标 本中的Mg逐渐适应在人工培养基中生长,二是增加了接 种于支原体肉捞培养基中的支原体数量,三是可提供持续 的接种源. 2血清学方法 根据Mg的免癌学特性,^们建立了用于检测Mg抗 体和检测与鉴定Mg抗原的血清学方法 Furr等?于1984年详缅报道了检测Mg抗体的MIF 技术.Moiler等对31例耒检测出ct和Mh血清抗体的 急性盆腔炎患者,用MIF检测Mg抗体,发现其中大约 4O在发病后一个月内抗体滴度有4倍或4倍以上的改 变.Taylor—Robinson等报遭应用间接MIF检测NGU 患者的Mg抗体,认为间接MIF试验是一种具有足够敏感 性,特异性和简便易行的检测方法.Jen~en等..曾用EIA 检测有尿道炎症状与无尿道炎症状的男性STD患者急性 期血样标本中的Mg抗体,结果发现反应性较弱,且与Mp 存在广泛的交叉反应 根据特异性抗体能阻止支原体的生长及代谢这一特 性.可采用已知高效ff『血清进行生长及代谢抑制试验以鉴 别支原体..".赵季文等曾采用MYI'鉴定所分离获得的 Mg菌株. 暴露于支原体表面的脂结合膜蛋白(1ipid—associated membraneproteins,LAMPs是一种支原体种属特异性抗 原,具有高抗原性,且不同菌株的支原体,其LAMP抗体具 有高度种属特异性,与其它种属无文叉反应"".因此提 可消除 取Mg的LAMP建立/~LISA方法检测Mg抗体,Mg与Mp之阿的交叉反应. 3分子生物学方法 DNA探针和聚合酶链反应(PCR)检测Mg的方法.克 服了前两类检谢方法的弊端,为研究Mg与疾病的病困学 JPreMedlnf—May.1999,Vo],15,No.2 关系提供了有力的手段 3.1DNA探针技术l987年Hyman"用PUCB裁体构 建成Mg基因文库.并从中筛选制备出特异性DNA探针, 通过斑点杂交可检测仅含0.1ng的特异性支原体DNA, 即10CFU. 3.2聚合酶链反应(PCR)技术PcR是一种新的基因诊 断技术,灵敏度高,特异性强,且快速,简便l990年,PCR 技术开始在医学支原体领域应用 早期的引物多参照菌体末端特异性粘附蛋白的DNA 序列而设计.Palmer等"体外扩增Mg粘附蛋自的部分棱 苷酸序列,3株Mg均出现376bp的DNA片断一并证明 PCR技术可检础到10矗.g的Mg—DNA,其引物序列为r Mgt:5TGTCTATGACCAGTATGTAC3' Mg2:5'CTGCTTTGGTCAAGACATCA3' 1991年jensen等.根据Mg的粘附蛋白基因设计台 成了如下组引物: MgPai5'AGATGATGAAACCCTAACCCCTTGG3' MgpA--25'GACCATCAAGGTATTTCTCAAGAGC3' MgpA一35'CCGTTGAGGGGTTTTCCAT丁TTTGC3' 用MgPa—l和MgPa一3成功地扩增出Mg的281bpDNA 片段,5个临床分离株扩增出同样的产物而其他支原体和 细苗均为阴性,用MgPa一2作探针,对扩增产物经South- erFtEP印进杂交,均为阳性,证明引物具有特异性,共检出 下降大约有50个Mg细胞.1993年Jerisen等""叉根据 Mg粘附蛋白基固设计了另一对引物,即: MgPa一476:5ATGGEGAGCETATCTTTGATCCTTTAA3' MgPa一目a3:5'TTCACCTCCCCACTACTGTCCTAATGC 用来证实和补充引物MgPa一1和MgPa一3所扩增的结 果,其扩增片段为4536p.研究发现,这两对Mg粘附蛋白 引物的敏感性完垒一致.用这种方法检测99倒尿道炎病人 的尿道拭子,结果17铡Mg阳性,而用培养{击无一例阳性 1994年Jensen"扩增Mg粘附蛋白基固序列井测序 表明:该序列在Mg各株之间有明显异质性,为此,Jensen 等学者以根据支原体种属性高度保守区域l6SrRNA的基 因序列,设计了种特异性PCR引物,以期检测临床标本中 所有Mg的感染-其引物序列为 . Mg一15'GAATGACTCTAGCAGGCAATGGCTG3' Mg一2SATTTGC"TEACTTTTACAAGTTGGCT3' 4株临床标本的实验结果表明,Mg粘附蛋白的基曰序列互 不相同,但其165rRNA基固序列则是i00同源,将两种 引物的PCR结合,还可在可疑阳性标本中检测出1050 十Mg基固组拷贝以下的Mg基固,即以16SrRNA基固为 靶基因的PER系统在保证特异性的基础上更为灵敏 赵季文等.采用Palmer设计的引物,扩增 Mg376bpDNA片段,检测三种人群的Mg.结果是性乱人群 阳性率为25.26,性病人群为l2.33,而健康人群为 3.85孔繁荣等采用Jensen设计的MgPa—L和MgPa 一 3,扩增Mg28lbpDNA片段.检测结果是性乱妇女Mg检 出率为102,STD患者为4.O 1998年.糜祖煌等哪研究报道了分别以Mg粘附蛋白 预防医学情报杂志1999年第l5卷第2期 和[6SrRNA基因为靶基固建立的二种套式PCR检测技 术,前者扩增生Mg的374bpDNA片段.后者扩增产生 241bpDNA片段.套式PCR不仅提高了.灵敏度,而且囡采 用两对不同的引物,特性也进一步得到提高用此法检测 4O例童性STD患者.发现Mg阳性l2倒,阳性率为30, 检出阳性率均高于普通PCR法. 4小结 微生物感染诊断的"金标准"是培养挂,然而Mg培养 成功率极低,有待于对培养基进行进一步的研究和改照,以 促进Mg在其中的生长;此外,将细胞株引入Mg的培养可 能是一个较好的方法,有必要加强这方面的探索和研究免 疫学检测方法困支原体种属问易出现交叉匣应以及对抗 原,抗体纯度要求较高而在实际应用上受到一定限制,若能 研究建立快速,灵敏,特异的检测临床标本中Mg抗原的方 法,则具有较大的实用价值PCR技术是一个简单而叉直 接的检测Mg方法,正被曰益广泛地采用,主要用于Mg感 染的早期诊断或隐性感染的诊断以及各种人群中Mg的流 行病学研究但在应用时应注意?临床标本中Mg含量 低,DNA纯度不够,抑制物过多,TaqDNA聚酶活性低均 会引起假阴性,应进一步完善DNA的提取技术}@因 PCR敏度极高,在整个操作过程中均应严格避免PCR 产l:Jj地.减少假阳性 5参考文献 lTullyJG,D.Taylor—Robinson.RMCole,andDL Rose.Anewlydiscoveredmycop]asmainthehuman urogenlta]tract.Lancet,l981.1288. 2TullyJG-DTy]or—Robinson.DLRose.eta】My- coplasmagenhalium,anewspeciesfromthehuman urogenitaltract.Int.J.Syst.Bacterio],1983.33(2): 387. 3JensenJStI-IansenHT,LindK.IsolationofMy— coplasmgenitallumstrainsfromthemaleurethra.J. 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