维生素C和B_1对铅致小鼠睾丸损伤保护作用研究

维生素C和B_1对铅致小鼠睾丸损伤保护作用研究 维生素C和B_1对铅致小鼠睾丸损伤保护 作用研究 第19卷第4期 2010年O8月 中国组织化学与细胞化学杂志 CHINESEJOURNALOFHISTOCHEMISTRYANDCYTOCHEMISTRY Vo1.19.No.4 August.2010 维生素C和B对铅致小鼠睾丸损伤保护作用研究 陕光张孝斌杨嗣星 (武汉大学人民医院泌尿?科湖北430060) [摘要]目的探讨维生素C,B联合用药拮抗铅对睾丸的毒性作用.方法1.3O只雄性小鼠随机分为2组(15 只/组):空白对照组和铅染毒组.染铅组雄性小鼠每日腹腔注射醋酸铅20mg/kg,空白对照组给予等容量的生理盐水,一 日一次,第42日结束以上实验.将小鼠取血,用试剂盒检测血浆中谷胱甘肽的含量,谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和谷胱 甘肽还原酶(GR)的活性.将睾丸组织经过处理后,在光镜及透射电镜下观察睾丸组织结构变化;2.45只雄性小鼠随机 分为3组(15只/组):空白对照组,铅染毒组和维生素联合干预组.染铅组雄性小鼠每日腹腔注射醋酸铅20mg/kg,维生 素干预组在染铅后,即时每组小鼠给予维生素C和维生素B,一日一次,第42日结束.处死小鼠,取血,用试剂盒检测 血浆中谷胱甘肽的含量,谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和谷胱甘肽还原酶(GR)的活性.在光镜以及透射电镜下观察睾丸 组织结构变化.结果1.与空白对照组比较,醋酸铅染毒组小鼠血浆中还原型谷胱甘肽(GSH)的水平降低,GSH/GSSG 的比例降低,GPX活性升高,GR活性降低;光镜下睾丸组织生精小管变薄,各级生精细胞,支持细胞减少,部分细胞核 出现核固缩;3.电镜下染毒组小鼠睾丸组织超微结构变化明显,支持细胞溶酶体增多,线粒体肿胀空泡化;2.与醋酸铅染 毒组比较,维生素干预组小鼠血浆中还原型谷胱甘肽(GSH)的水平升高,GSH/GSSG的比例升高,GPx活性降低,GR 活性升高;光镜观察结果:与染铅组相比,维生素B和C联合干预组中破坏的睾丸生精上皮有所恢复;电镜观察结果:与 染铅组相比,维生素B和c联合干预组睾丸组织超微结构基本恢复正常,生精细胞和支持细胞结构正常,细胞器丰富.结 论1.醋酸铅使体内GSH的水平降低,GPX活性升高,GR活性降低,从而诱导氧化应激的发生,导致染铅小鼠睾丸的 损伤;2.维生素干预组小鼠血浆中还原型谷胱甘肽(GSH)的水平升高,GSH/GSSG的比例升高,GPx活性降低,GR活 性升高,维生素干预组小鼠血浆中氧化型谷胱甘肽还原为还原型谷胱甘肽,从而发挥抗氧化作用,对小鼠睾丸起到保护作 用. (关键词)醋酸铅;生精细胞;氧化应激;GSH;GPX;GR;维生素B】;维生素C (中图分类号)R698(文献标识码]AD0I:10.3870/zgzzhx.2010.04.018 PRoTECTIVEEFFECTOFASCORBICACIDANDTHIAMINE~UPPLEMENTATION AGAINST DAMAGECAUSEDBYLEADINTESTESOFMICE ShanGuang,ZhangXiaobing,YangCixing (DepartmentofUrology,ThePeople'sHospitalofWuhanUniversity,Hubei430060,China) (Abstract]ObjectiveToinvestigatetheprotectiveeffectandapoptosis—relatedmechanismofascor, bicacidandthiaminesupplementationagainstdamagecausedbyleadinthetestesofmice.Me thods1.30 malemicewererandomlyassignedinto2groups(15/group):(1)Controlgroup:Animalsserv edasneg, ativecontrolsandreceivedtapwateralone;(2)Pb— treatedgroup:AnimalsweretreatedwithPb(20rag/ kg)andreceivedleadacetatebyintraperitonealiniectiondaily.Allthemicewereanaesthetizedwithether andkilledbycervicaldislocationonthe42ndtestday.TheactivityofGPxandGRintheplasmawerede— terminedwithactivityassaykitsaccordingtothemanufactureSinstructions.Underlightmicroscopeand transmissionelectronmicroscope(TEM),cytoarchitecturechangesofspecimensstainedwithhematoxylin andeosin(HE)wereobserved.2.45malemicewererandomlyassignedinto3groups(15/group):(1) Controlgroup:AnimalSservedasnegativecontrolsandreceivedtapwateralone;(2)Pb— treatedgroup: Animalsweretreatedwith.Pb(20mg/kg)andreceived1eadacetatebyintraperitonealinjectiondaily;(3) Vitamin— protectedgroup:AnimalswereinjectedVitC420mg/kgcombinedwithVitB,30mg/kgdailyafer Pbtreatment.Boodwascollectedintubescontainingethylenediaminetetraaceticacidasanticoagulant, thelevelofglutathionewasmeasuredusingaglutathoneassaykit.TheactivityofGPxandGRintheplas— mawasdeterminedwithactivityassaykits.Testeswerefixedincoldfixativefor48h,andthenparaffin sectionsweremade.Underlightmicroscopeandtransmissionelectronmicroscope(TEM),cytoarchitec一 (收稿日期]2010—04—12[修回日期]2010—06一O1 [作者简介]陕光,男(1980年),汉族,博士. *通讯作者(Towhomcorrespondenceshouldbeaddressed) 第4期陕光等.维生素C和B对铅致小鼠睾丸损伤保护作用研究395 turechange8ofspecimensstainedwereobserved.Results1.TheGSHlevelinthePb— treatedgroupde— creasedcomparedwiththatofthecontro1goup,GSH/GSSGratioalsodecreased,andtheactivityofGPx increasedwhilethatofGRdecreased.Underlightmicroscopy,manyseminiferoustubulesbecamethin, anddisappearanceofmostspermatidsandspermatozoawasalsoobservedinthePb— teatedgroup.Under TEM,thetestisultrastructureofthePb— treatedgroupchangedsignificantly,withincreasedlysosomeof sertolicellsandswellingandvacuolizationofmitochondria.2.TheGSHlevelinthevitamin—protected groupincreasedwhencomparedwith. thatofthePb—treatedgoup,GSH/GSSGratioalsoincreased,andthe activityofGPxdecreasedwhilethattofGRincreased.Underlightmicroscopy,thepathologicchangesin seminiferoustubuleshadpartlyrecovered.andsomedisplayedafullspermatogeniccomponent.Under TEM.thetestisultrastructureinmiceexposedtovitaminB1andCreturnedtonormaltesticulartissue, germcellsandSertolicellswerenormal,andorganelleswererichinspermatogonia.Conelusion1.The GSHlevelinthePb— treatedgroupdecreased,GSH/GSSGratiodecreased,theactivityofGPxincreased whiletheactivityofGRdecreased.whichmayindueeoxidativestress.2.TheGSHlevelinthevitamin— protectedgroupincreased,GSH/GSSGratioincreased,theactivityofGPxdecreasedwhileth eactivityof GRincreased.GSSGiSconvertedtothereducedform(GSH)byvitaminB1andC. [Keywords]Lead;Testis;OxidativeStress;GSH;GPx;GR;VitaminC; VitaminB】 铅是自然界普遍存在并被广泛应用的一种金 属.在工业革命之前人体对环境中铅的接触相对较 少,但随着工业化和大规模的采矿,这种接触日益 增加.与其他非必需元素相比,环境中铅的污染相 对较高.在体内,铅以稳定的氧化态铅存在,目前 尚未发现其有生理功能,理想的血浓度为零__】 人体在摄入铅后,体内的铅可能分布于三个主要部 位:体内铅蓄积最多的是在骨骼中;其次是血液和 软组织.近3O年来,由于精液质量下降从而增加 了人们对男性生殖健康的关注,同时人们也逐渐认 识到铅对男性生殖的毒性作用_3 在铅中毒防治工作中,普遍使用的常规螯合剂 (如巯基药和氨羧络合剂)可导致体内一些必需元 素如Zn,Cu,Mn,Fe等的损失[4有些药物还 会对某些器官如肾脏造成损坏,对低水平的铅暴露 亦不敏感.鉴于以上的副作用,螯合剂的安全 和有效性受到了质疑[7而维生素作为人类正常的 膳食成分,对人体毒副作用较少,因此日益受到研 究者们的广泛关注,并超出一般临床治疗范围.维 生素C在体内是多种代谢酶的辅酶,在体内参与 多种反应,如参与氧化还原过程,在生物氧化和还 原作用以及细胞呼吸中起重要作用.此外Ping 等实验表明富含维生素C的饲料有明显拮抗铅 吸收的作用,加速铅排泄. 近年来,由于B族维生素尤其是维生素B的 安全性较高,在驱铅治疗中日趋受到关注.虽然已 有大量证据证实了维生素B和C的联合抗铅作用, 但关于不同剂量维生素B和C对铅毒性,特别是 对铅致睾丸细胞凋亡的影响,目前国内外的研究较 少.谷胱甘肽属于含有巯基的,小分子肽类物质, 具有两种重要的抗氧化作用和整合解毒作用.环境 毒物可诱导氧化还原状态的改变,接触的环境毒物 通过不同的相互连接机制诱导改变细胞的氧化还原 平衡.维生素B,c联合应用可使更多的GSSG 转化为GSH,而GSH起到了强大的抗氧化作用. 同时另外一方面维生素B,C联合应用可修复铅 对线粒体的损伤,从而抑制更多RoS的产生,并 有效的清除?O.,?OH一和NO,逆转铅对小鼠 睾丸组织的损伤. 因此,本实验在探讨铅睾丸毒性作用机制的同 时,进一步观察不同剂量维生素B.,C的联合干 预作用,为铅中毒防治的人体实验研究和维生素的 合理应用提供科学依据,也为铅暴露人群提供安全 的保健措施,这对于促进广大人群的健康具有重要 的现实意义. 材料和方法 1动物分组及铅染毒小鼠模型的建立 1.1选用雄性(体重11—19g)小鼠,适应性 喂养一周后,30只雄性小鼠随机分为2组(15只/ 组):空白对照组和铅染毒组.染铅组雄性小鼠每 日腹腔注射醋酸铅20mg/kg,空白对照组给予等 容量的生理盐水,一日一次,第42日结束以上实 验. 1.2选用雄性(体重l1—19g)小鼠,适应性 喂养一周后,45只雄性小鼠随机分为3组(15只/ 396中国组织化学与细胞化学杂志第19卷 组):空白对照组,铅染毒组和维生素联合干预组. 染铅组雄性小鼠每日腹腔注射醋酸铅20mg/kg, 维生素干预组在染铅后,即时每组小鼠给予维生素 C和维生素B,一日一次,第42日结束. 2.观察指标及测试方法 在第42日后分别颈椎脱臼处死每组各15只小 鼠,立即取睾丸组织.将睾丸组织放人4的中性 甲醛中固定48小时,再经过脱水,包埋等步骤制 成4-6~m的石蜡切片.各组小鼠另分别断尾取血 分离出血浆,用试剂盒检测GSH含量,GPx和 GR活性. 3.睾丸组织细胞形态学常规HE染色后镜下 观察. 4.血浆谷胱甘肽(GSH)的检测 4.1血浆总谷胱甘肽(TGSH)的检测 (1)剪尾采血100gl,加入含有肝素的EP管 (2)40?,1000rpm离心10min. (3)收集上清50l即为待测血浆 (4)25?将5Ol血浆加入96孑L板与150/aL试 剂盒反应物(其中包括GR,DTNB和NADPH) 作用5min (5)使用紫外分光光度仪读取412nm波长处 的0D值 (6)根据OD值做出曲线,得到TGSH 值 4.2血浆氧化型谷胱甘肽(GSSG)的检测 (1)25?将5OL血浆和GR抑制剂 2-vinylpyridine(108glof2-vinylpyridineand892 u1ofethano1)加入96孔板与150/~L试剂盒反应物 作用5min (2)使用紫外分光光度仪读取412nm波长处 的OD值 (3)根据OD值做出标准曲线,得到GSSG值 4.3血浆还原型谷胱甘肽(GSH)的检测 TGSH值减去GSSG值既得GSH值 4.4血浆GPx和GR活性的检测 (1)25?将2Ol血浆和20"lcumene hydroxide~1]入96孔板混合 (2)与50L试剂盒反应物和GPxco—substrate 作用5min (3)使用紫外分光光度仪读取340nm波长处 的0D值 (4)根据OD值做出标准曲线,得到GPx活 性值 GR活性的检测方法根据试剂盒说明书 5.电镜观察睾丸组织超微结构 (1)将各组小鼠睾丸包膜剪开后将睾丸切成数 块 (2)2.5%戊二醛前固定,1锇酸后固定 (3)梯度乙醇脱水,树脂包埋 (4)半薄切片定位,超薄切片机切片,片厚 60nm (5)行醋酸铀,枸橼酸铅双重染色 (6)用H一600型透射电镜观察睾丸组织超微结 构 6.数据处理与统计方法 实验数据多以Mean?SD表示,均数的组间 比较采用单因素方差分析(one—wayANoVA), 率的组间比较采用检验,P<0.05表示差异具 有显着性. 结果 1.小鼠睾丸组织病理形态学的改变 1.1铅对雄性小鼠睾丸组织病理形态学的改变 光学显微镜下,空白对照组睾丸组织结构正常, 生精上皮完整,各级生精细胞及精子排列有序;支 持细胞核仁明显;生精小管之间可见形态正常的圆 形或椭圆形睾丸间质细胞,核圆居中(图1).在 醋酸铅染毒6周后,生精上皮完整性严重破坏,精 原细胞排列疏松,初级精母细胞及精子细胞锐减; 支持细胞和间质细胞数目大量减少,可见大部分细 胞核固缩(图2). 第4期陕光等.维生素C和Bj对铅致小鼠睾丸损伤保护作用研究397 图1正常对照组小鼠睾丸组织HE×200 Fig.1Testisofnormalnouse(HEstaining×200) 图2染铅组6周小鼠睾丸组织HE×200 Fig.2Testisofthemousetreatedwithleadfor6weeks (HEstaining×200) 1.2维生素B和C联合干预对染铅雄性小 鼠睾丸组织病理形态学的影响 光学显微镜下,维生素B和C联合干预组, 破坏的睾丸生精上皮有所恢复,生精小管形态基本 规则,各级生精细胞分层排列;支持细胞和间质细 胞核固缩细胞减少(图3). 图3维生素干预组小鼠睾丸组织形态学变化HEN200 Fig.3Testisofmousetreatedwithleadandvitamins (HEstaining×200) Reductioninthenumberofthespermatogeniccells, Sertolicellswasprominent,andpartofspermatogeniccells appearedcaryolysis(redarrow)invitamin,protectedgroup; (HEstaining×200). 2.小鼠血浆GSH和GSSG水平的影响 2.1铅对雄性小鼠血浆GSH和GSSG水平的 影响空白对照组小鼠血浆中GSH的水平大致是 醋酸铅染毒小鼠血浆中GSH水平的1.6倍,其差 异在统计学上有显着性意义(P<0.05);同时醋 酸铅染毒组小鼠血浆中GSSG的水平大致是空白 对照组小鼠血浆中GSSG水平的1.4倍,其差异也 有显着性意义(P<O.05)(图4) 3.O 工2.0 8 磊1.0 0 ContTolPb-treatedControIPb.Created? 图4染铅小鼠血浆GSH水平降低 ReducedplasmaglutathionelevelsinPb—treatedgroup. Fig.4ThelevelsofplasmaGSHandoxidizedglutathi: one(GSHandGSSG)weredeterminedusingaglutathione assaykit.andthereducedglutathione(GSH)levelwascal— culatedbysubtractionofGSSGfromTGSH.Datarepresent themean?SE(n一15/group).*P<0.05VSControl group 2.2维生素B和C联合干预对染铅雄性小鼠 血浆GSH和GSSG水平的影响 维生素联合干预组小鼠血浆中GSH的水平大 致是醋酸铅染毒小鼠血浆中GSH水平的1.8倍, 其差异在统计学上有显着性意义(P<0.05);而 醋酸铅染毒组小鼠血浆中GSSG的水平大致是维 生素联合干预组小鼠血浆中GSSG水平的1.6倍, 其差异亦有显着性意义(P<0.05)(图5) ? 水平升高, GSSG水平降低 IncreasedplasmaglutathionelevelsinPb-treatedgroup. Fig.5Thelevelsofplasmatotalandoxidizedglutathi— one(GSHandGSSG)weredeterminedusingaglutathione 398中国组织化学与细胞化学杂志第19卷 assaykit,andthereducedglutathione(GSH)leve]WaScal culatedbysubtractionofGSSGfromTGSH.Datarepresent themean?SE(n一15/group).*P<0.05VSPbtreated group 3小鼠血浆GPx和GR活性的影响 3.1铅对雄性小鼠血浆GPx和GR活性的影响 与空白对照组小鼠相比较,醋酸铅染毒小鼠血浆 中GPx的活性增加(P<O.05),而GR的活性降 低(P<0.05)(图6) ? 图6染铅小鼠血浆GPx活性增高,GR活性降低 IncreasedplasmaGPxactivityanddecreasedGRactivity inPb—treatedgroup. Fig.6GPxandGRactivityweredeterminedusinga glutathioneassayKit.Datarepresentthemean?SE(n一 15/group).*P<O.05VSControlgroup 3.2维生素B和C联合干预对染铅雄性小鼠 血浆GPx和GR活性的影响 与醋酸铅染毒组小鼠血浆中GPx的活性相比 较,维生素联合干预组小鼠血浆中GPx的活性降 低,其差异在统计学上有显着性意义(P%0.05); 同时数据显示,与醋酸铅染毒组小鼠血浆中GR的 活性相比较,维生素联合干预组小鼠血浆中GR的 活性增高,其差异在统计学上有显着性意义(P< 0.05)(图7) 4小鼠睾丸组织超微结构的改变 4.1铅所致雄性小鼠睾丸组织超微结构的改变 空白对照组睾丸组织超微结构正常,支持细胞 胞质丰富,粗面内质网及线粒体较多,精原细胞与 基膜和支持细胞之间连接紧密(图8).染毒组小 鼠睾丸组织超微结构变化明显,主要表现为:?支 持细胞溶酶体增多,线粒体肿胀空泡化,支持细胞 内出现较大空泡;?精原细胞与支持细胞及生精小 管的基膜之间出现较多较大空泡;?细胞间紧密连 接模糊不清,间隙增宽(图9); 240 120 6O OPb - treatedVitarnin.Pb-treat~dVitamin. protectedproteded 图7维生素联合干预组小鼠血浆GPx活性降低,GR 活性增加 DecreasedplasmaGPxactivityandincreasedGRactivi— tyinPb—treatedgroup. Fig.7GPxandGRactivityweredeterminedusinga glutathioneassaykit.Datarepresentthemean4-SE(n 15/group).*P<0.05VSPb—treatedgroup 4.2维生素B和C联合干预对染铅雄性小鼠 睾丸组织超微结构的影响 维生素B和C联合干预组睾丸组织超微结构 基本恢复正常,生精细胞和支持细胞结构正常,细 胞器丰富,精原细胞与基膜和支持细胞之间紧密连 接层次清楚(图1O) 讨论 氧化应激是指机体在遭受各种有害刺激时,体 内高活性分子如活性氧自由基(reactiveoxygen species,ROS)和活性氮自由基(reactivenitro— genspecies,RNS)产生过多,氧化程度超出氧化 物的清除,氧化系统和抗氧化系统失衡,从而导致 组织损伤.I_. 谷胱甘肽属于含有巯基的,小分子肽类物质, 具有重要的抗氧化作用和整合解毒作用u.谷胱 甘肽有还原型(GSH)和氧化型(G-S—S-G)两 种形式,在生理条件下以还原型谷胱甘肽占绝大多 数__】.GSH主要是由细胞产生内源性的抗氧化剂 并同时维持外源性抗氧化剂作用_1"].如维持 VC,VE的还原形式.GSH通过直接结合来自于 机体或体外的异质物,致癌物等从而起到解毒的作 用.谷胱甘肽(尤其是肝细胞内的谷胱甘肽)具有 非常重要的生理作用,就是能与某些药物(如扑热 息痛),毒素(如自由基,重金属)等结合,参与 生物转化作用,从而把机体内有害的毒物转化为无 害的物质,排泄出体外. t ?I I _【一{最量弓Luu) 童毒o《×oE"Id 一一乓薹.妄S 喜u《×d0幅,蔓 第4期陕光等.维生素C和B对铅致小鼠睾丸损伤保护作用研究399 图8小鼠睾丸组织超微结构(EM×8000);图9小鼠睾丸组织超微结构(EM× 10000);图10小鼠睾丸组织超微结构 (EM×8000) Fig.8Ultrastructureofmicetestistissue(EM× 8000);Fig.9Ultrastructureofmicetestistissue(EM×IOOOO);Fig?10 U【trastructureofmicetestistissue(EM×8000) 环境毒物诱导氧化还原状态的改变.接触的环 境毒物通过不同的相互连接机制诱导改变细胞的氧 化还原平衡已被广泛证明.同时氧化应激也被 证明对调节细胞凋亡起着重要的作用l_】j. 铅已经被证明可以诱导产生活性氧,此外,铅 可以导致抗氧化分子的直接消耗.铅实际上被证明 直接结合胞浆谷胱甘肽.铅还结合酶,具有功能巯 基,从而改变酶的活性和氧化还原平衡.铅暴露触 发细胞凋亡在多种细胞系中已经得到证明,其中线 粒体发挥关键作用.铅诱导的细胞凋亡已被证明是 由谷胱甘肽消耗和产生的ROS介导的盟. 本实验中,0.4染铅组小鼠血浆中GSH水 平明显低于空白对照组,说明GSH直接与进入到 体内的大量醋酸铅结合,消耗了GSH的量,氧自 由基的产生增加,打破了氧化系统和抗氧化系统的 平衡.我们同时发现相对于空白对照组GPx的活 性在染铅组是增高的,而GR的活性恰好相反.这 也说明了机体内的GSH在GPx的作用下转变为了 谷胱甘肽的氧化形式GSSG.由于GSH的消耗大 于自身的合成,从而激活了氧化应激,造成了小鼠 睾丸组织的损伤. 线粒体是细胞内产生ROS的主要场所,也是 氧化损伤最先打击的靶器官.在生物体内,氧化与 抗氧化处于平衡状态,正常情况下细胞代谢需要 RoS,如低浓度的ROS能促进细胞增生.某些因 素一旦打破这种平衡,使R()S产生增多,即可导 致细胞损伤3l.在金属铅催化下的Fenton反应和 Haber—Weiss反应中,进一步生成OH.在生物 体内,OH的氧化性最强_2.本实验中大量的醋 酸铅进入小鼠体内,引发活性氧(ROS)增加,产 生氧化应激损伤,造成线粒体结构,功能改变,出 现线粒体膜电位降低,线粒体内膜通透性明显增 加,可能通过抑制线粒体呼吸电子链,造成氧化及 磷酸化作用脱偶联,导致能量代谢紊乱,并进一步 导致细胞损伤甚至死亡,电镜下可见线粒体肿胀空 泡化,线粒体嵴消失等结构变化. 活性氧(ROS),包括氧自由基:超氧阴离子 自由基(?O.)和羟自由基(?OH),以及非氧 自由基的衍生物,如过氧化氢(H:O.).?().是 线粒体中通过半泛醌减少氧分子而产生的,研究表 明线粒体是内外凋亡信号诱导产生ROs的主要来 源.其它的抗氧化分子(如VC,VE),酶(如磷 脂过氧化氢,谷氧还蛋白)作为对抗氧化应激的次 级防御.如果解毒系统和抗氧化作用受到损害,或 者ROS产生过多将激活氧化应激导致DNA,蛋白 质和脂质氧化[2弘 维生素C是体内多种代谢酶的辅酶,也是一 种自由基清除剂,能干扰铅与重要的生物分子之问 的相互作用,有效地清除活性氧(ROS)【],从而 降低铅引起的氧化应激反应卫.维生素B含有一 个嘧啶环和噻唑核,两摩尔维生素B中侧链上的 羟基(一0H)和噻唑核中的硫(S)原子可能参与 铅的螫合,推测维生素B能够动员细胞内铅进入 血流,以维生素B一铅复合物形式排出,从而降低 铅在睾丸组织的蓄积.Senapati等研究表明硫 胺素具有预防铅诱导的肝脏脂质过氧化作用,从而 减少铅损害[2.推测这可能是硫胺素与含巯基的代 谢酶作用有关,但明确的机制仍有待于进一步研究. 当维生素B,C联合应用时抗铅作用明显增 强,从而使生精细胞,支持细胞和间质细胞凋亡减 少,睾丸组织损害减轻.光镜和电镜观察显示:损 害的睾丸组织得到一定的修复.干预组小鼠血浆 GSH水平提高,GPx活性降低,GR活性增强. 由此我们可知道维生素B,C联合应用使更多的 400中国组织化学与细胞化学杂志第19卷 GSSG转化为GSH,而GSH起到了强大的抗氧化 作用.同时另外一方面维生素B,C联合应用可 能修复了铅对线粒体的损伤,从而抑制了更多 ROS的产生,并有效的清除?O一,?OH和NO, 逆转了铅对小鼠睾丸组织的损伤.此结果证明维生 素B,c联合应用可拮抗醋酸铅的睾丸毒性作用. 参考文献 [1]TheWorldHealthreport2002.Midwifery,2003,19: 72—73 [2]Bellinger,DC.Lead.Pediatrics,2004,113:1016— 1022 [3]JensenTK,BondeJP,JoffeM.TheinfluenceofOCCU— pationalexposureonmalereproductivefunction.Occup Med(Lond),2006,56:544—553 [4]LongGJ,RosenJF,PoundsJG.Leadimpairsthepro— ductionofosteocalcinbyratosteosarcoma(R0S17/ 2.8)cells.Toxieo1ApplPharmacol,1990,106:270— 277 [53BellAN,MehendaleHM.Theeffectofdietaryexpo— suretoamirexpluschlordeconecombinationonCC14 hepatotoxicity.FundamApplToxicol,1985.5:679—687 [6]GeusauA,SchmaldienstS,DerflerK,eta1.Severe2, 3.7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin(TCDD)intoxica— tion:kineticsandtrialstoenhanceeliminationintwo patients.ArchToxieol,2002,76:316—325 [73GurerH,ErcalN.Canantioxidantsbebeneficialinthe treatmentofleadpoisoning?FreeRadieBiolMed, 2000,29:927—945 [83HsuPc.GuoYL.Antioxidantnutrientsandleadtoxici— ty.Toxicology,2002,180:33—44 [93PompellaA,VisvikisA,PaolicchiA,eta1.Thechan— gingfacesofglutathione,acellularprotagonist.Bio— chemPharmaeol,2003,66:1499—1503 r10]PastoreA,PiemonteF,LocatelliM,eta1.Determi, nationofbloodtotal,reduced,andoxidizedglutathione inpediatricsubjects.ClinChem,2001,47:1467, 1469 [11]YangY,DieterMz,ChenY,eta1.Initialcharacter, izationoftheglutamate—cysteineligasemodifiersubunit Gclm(-/,)knockoutmouse.Novelmodelsystemfor aseverelycompromisedoxidativestressresponse.JBi— o1Chem,2002,277:49446—49452 [12]GiordanoG,Afsharinejadz,GuizzettiM,eta1.0r— ganophosph0rusinsecticidesehlorpyrifosanddiazinon andoxidativestressinneurona1cellsinageneticmode1 ofglutathionedeficiency.ToxicolApplPharmacol, 2007,219:181—189 r13]MeConnaehieLA,MoharI,HudsonFN,eta1.Gluta— matecysteineligasemodifiersubunitdeficiencyand genderasdeterminantsofacetaminophen—-inducedhepa—— totoxicityinmice.Toxico1Sci,2007,99:628—636 [14]FrancoR,Sanchez-OleaR,Reyes—Reyes,EM.eta1. 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