糖类抗原CA50 TRFIA与IRMA对比分析

糖类抗原CA50 TRFIA与IRMA对比分析 盟整堂苤笪叠苤.!g逞,18(6 重,预后越差.所以血清甲状腺激素水平动态观察对糖尿 病患者进行病情估计,疗效观察具有临床意义. 参考文献 [1]马季萍.T3低下综合征.国外医学内分泌分册.1984,(4):173 --—— 477--—— [2]张萍,傅一明,吴世凤.糖尿病患者血清甲状腺激素的变化及其意 义.广西医科大学.2oo1,18(3):364. [3]刘琴,胡德龙,卢莘生.糖尿病患者血浆甲状腺激素水平的临床观 察.实用医学杂志.2oo3,19(9):983.. (2oo5—08—19收稿) 糖类抗原CA50TRFIA与IRMA对比分析 复旦大学医学院附属华山医院核医学科(20~40)陆云吴文清张学平邓守真刘兴党 本文运用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)与免疫放射 分析(IRMA)分别检测糖类抗原cA50的含量,比较两种方 法的相关性及各自的优势. 1资料和方法 1.1对象我院门诊及住院患者血清标本共78例,正常对 照57例.年龄(56,89)岁,平均(71?6.2)岁. 1.2检测试剂cA50(TRFIA)kit由江苏省原子医学研究 所提供,cA50(IRMA)kit由法国CIS提供. 1.3仪器用时间分辨荧光免疫分析仪AutoDELIA1235 检测cA50含量,上海原子核所日环仪器厂SN一695—免 疫计数仪测定cA50含量. 1.4方法同一血清标本分别采用TRFIA和IRMA检测78 例患者血清标本和57例正常对照血清标本cA50含量,均按 说明书操作. 1.5统计学处理采用S~S10.0统计软件进行相关性统 计分析,各组间数据用?s示. 2结果 TRFIA一数据采用git—g函数和四参数~stic函 数数据处理程序处理,所得cA5O—TRFIA标准曲线及含量; CIS供cA50(IRMA)运用三参数作用定律数据处理程序,所 得cA50一IRMA标准曲线及含量.TRFIA与IRMA分别检 测糖类抗原cA50的含量结果分析显示,两种方法呈正相关, 相关性好. 2.1TRFIA与IRMA分别检测CA50含量结果见表1. 表1两种方法检测cA50含量和相关系数(r) 2.2两家公司各自提供的cA50基本参数及相关指标见表 2. 表2cA50基本参数及相关指标 2.3以cA50两方法相关正常范围作参考,即大于正常值上 限为阳性,反之为阴性,其两种检测方法的阳性和阴性数比 较见表3. 表3两种检测方法的阳性和阴性数比较 3讨论 TRFIA是采用荧光寿命长的镧系元素做标记物,根据荧 光寿命设置采集发射荧光的时间窗,待生物分子,有机物质 的短寿命背景干扰荧光完全衰变后,开始收集只有镧系元素 标记的荧光信号,极大地提高荧光信噪比,使其灵敏度超过 放射免疫.其方法具有灵敏度高,稳定性好,线性范围宽,试 剂盒货价时间长,操作简便,又可进行多标记分析等优点,被 公认为目前较为理想的一种超微量生物活性物质定量检测 技术…. 国内开展时间分辨免疫分析方法和技术的研究始于20 世纪8O年代中期,2000年起仪器,诊断试剂盒和螯合剂已逐 步国产化,商品化,方法和研制已进入临床应用. cA50TRFIA以cA50单克隆抗体作包被板,双功能螯合 剂为异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合铕Eu?及标记cA50 单克隆抗体,发光增强系统为以B一二酮体为主的增强液. 采用固相夹心法进行检测,以铕标单克隆抗体为示踪物,当 铕在增强液中从单克隆抗体上解离后发出强的荧光,其强度 与cA50的浓度相关. IRMA原理为:将抗cA50单克隆抗体包被到塑料试管 璧上成为固相抗体,与样本和标准品中CA一50抗原结合,加 入I标记cA一50,形成夹心式结合反应,即两步夹心法免 疫放射分析. 国产化cA50一TRFIA法,配合运用于全自动时间分辨 荧光仪1235autoDE~IA,分析范围和灵敏度以及稳定性均 较理想.可测范围为(0.7,140)U/ml,ED20,DE50和ED80 分别为17.71U/ml,39.76U/ml和85.94U/ml.质控血清范 围cA50TM.为(10.0,13.6)U/ml,TM2为(92.6,125.4) U/ml,同批试剂连续6个月应用分析结果稳定.与进口的 C1S公司的IRMAkit比较,两者的相关系数较好,结果相符. 总之用TRFIA和IRMA法分别检测糖类抗原CA50的含量结 ..—— 478?-—— 果表明,两种方法具有较好的相关性,且均具有较高的灵敏 度和重复性.IRMA用放射性核素标记,受时间和温度影响, 反应时间较长,每批需做标准曲线;而TRFIA则是一种非放 射性标记检测技术具有自动化程度较高,试剂稳定性好,有 效期长,无放射性污染等特点,在检测灵敏度,特异性,测量 范围以及标记物的稳定性方面显示其优越性.若试剂成本 志2005年第18卷第6期JofRadioimmunolo~2005,18(6 低廉,则更有利于临床大批量检测的需要,值得进一步推广. 参考文献 【!]李振甲,陈泮藻,高平,编着.时间分辨荧光分技术与应用.北 京:科学出版社.1996,24. (2005—08一l8收稿) 血清TRAb检测对Graves'病突眼的应用价值 宋补昌李宝兰孙斌一 Graves'病(Graves'disease,GD)是一种器官特异性自身 免疫疾病,Graves'病并发眼球突出是最常见的眼眶病之一. 目前研究表明,促甲状腺受体抗体(Thyrotropinreceptorarti— body,TRAb)是Graves'病发病的主要因素.j.但对于 TRAb在Graves'病并发眼球突出的形成原因中的作用研究 且存在分歧,本文就此进行探讨,现将结果报道如下. 不多, 1资料和方法 1.1一般资料我院2003年1月,2003年5月门诊及住 院的Graves'病患者135例,按照有无眼球突出分为二组: (1)突眼组:共90例(男39,女51),男:女=1:1.31;年龄(9 , 65)岁,平均34.80岁.(2)无突眼组:共46例(男l3,女 33),男:女=1:2.54,年龄(12,68)岁,平均39.80岁. 1.2眼球突出度检查采用Hertel突眼计检查.根据我国 正常人眼球突出度标准;双眼球或单眼球突出度>14mm, 或双眼球突出度差?2mm者,为眼球突出(除外生理性和假 性突出). 1.3仪器和方法空腹抽取静脉血,常规离心后,吸取血清一 20?保存,待统一测定.用放射受体分析(比利时BIOCODE公 司提供试剂盒)测定TRAb,测量仪器为上海原子核研究所生产 的SN一695型智能放免测量仪.判断标准:正常人<9U/L,> 14U/L阳性,9,14U/L为可疑患者,定期复查. 1.4统计学处理采用t检验和U检验判断显着性. 2结果 2.1两组患者血清TRAb测定结果,见表1. 表1两组血清TRAb测定结果(i?5.U/L) 表2两组血清TRAb阳性率结果 '山西医科大学第三医院甲状腺科(030053) 一山西医科大学第三医院眼科 2.2两组患者TRAb阳性率结果,见表2. 3讨论 自1956年Adams和Phrves首次在弥漫性甲状腺肿伴甲 亢患者(Graves'病)血清中发现一种新型甲状腺刺激物 (LATS),国内外学者对其功能,性质及与Graves'病的关系 作了许多相关性的研究,后经Smith研究证实LATS是一种 IgG免疫球蛋白,LATS和TSH对甲状腺具有相似的作用机 理,最新流行命名为促甲状腺激素受体抗体(TRAb)[41.目 前认为,TRAb是甲状腺内的淋巴细胞所产生的一类多克隆 抗体,其中包括:?甲状腺刺激性球蛋白(TSAb),它与TSH 受体结合模仿TSH的作用,通过激活腺苷酸环化酶一cAMP 通路,刺激甲状腺滤泡其具有阻滞TSH或TSAb对甲状腺的 兴奋作用,可引起甲状腺机能减退(甲减).?中和性自身抗 体,部分Graves'病患者血清中可检出该机体,其与TSHR结 合后既不激活TSHR也不阻滞TSAb对TSHR的激活作用, 其可能与Graves'病的甲状腺以外症状如突眼,胫前水肿有 关.但用免疫沉淀法或Western印迹法检测常不能得出一致 的结果,故对其的存在仍有异议.这些抗体的平衡破坏可能 导致了临床症状的变化,主要的临床表现是由主导的克隆抗 体所决定的. Graves'病是以甲状腺刺激抗体为阳性特征的,几乎 100%的活动期的GD患者表现为TSAb阳性.目前证明, TRAb在Graves'病的发病中起主导作用.但对Graves'病的 突眼形成中的作用研究不多,意见不一.有文献报道,TRAb 阳性与Graves'眼病密切相关.并在Graves'眼病致病过程中 起重要作用,但也有研究证明,在Graves'眼病发病中其抗原 不是TSHR,其直接反应的抗原是一组眼肌细胞膜多种膜蛋白 抗原"j.而Baha等用PCR技术证实人眼球后的成纤维细胞 有TSH受体mRNA表达,TRAb升高既可刺激甲状腺,又可作 用于眼球后的成纤维细胞,使其在受刺激后合成了吸水性较 强的氨基多糖,并有大量的淋巴细胞,造成眼眶压升高,眼眶 周围组织水肿,眼球突出,眼外肌活动障碍等临床表现.因此 有学者认为,TRAb是甲状腺眼病的一个诊断指标,特别是对 甲状腺功能正常的突眼病人,诊断价值更高,国内一些学者证 实Graves'病突眼症患者血清TRAb的活性明显高于正常对照 组.但对于Graves'病患者发生突眼和不发生突眼者,其 TRAb活性是否有差异,尚未见报道.本文结果显示,GD患者 发生突眼组TRAb活性和阳性检出率都明显高于不发生突眼 组.表明TRAb在GD患者的眼球突出形成巾起着很重要的